环肽类化合物的组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种环肽类化合物的组合物及其制备方法和用途。组合物含有结构如式VIII所示化合物，结构如式IV所示化合物或其盐，结构如式VI所示化合物，结构如式VII所示化合物，所述组合物溶于水后形成的溶液无乳光现象。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术涉及药物纯化和制备领域，尤其涉及一种环肽类化合物的组合物，以及制备该环肽类化合物的组合物的方法。

技术介绍

米卡芬净(Micafungin)是一种新型棘白菌素类抗真菌药物，通过抑制真菌细胞壁的组成成分β-1，3-D-葡聚糖合成酶，破坏真菌细胞结构，使之溶解。米卡芬净广泛用于治疗各种感染，尤其是曲霉菌、念珠菌、隐球菌、毛霉菌、放线菌、组织胞浆菌、皮肤癣菌和镰刀菌等引起的感染。特别是用于治疗化疗、AIDS等免疫力低下患者的真菌感染。临床还与两性霉素和三唑类抗真菌药物进行联合用药。
米卡芬净钠(MicafunginSodium，又称FK463)是药品Mycamine(米开民)的活性药物成分。米卡芬净钠盐的化学结构如式I所示：
澄清度检查是检查药物中的微量不溶性杂质，出于用药安全性考虑，用于注射剂的原料药，一般应进行此项检查。药物澄清度是注射剂药物的一重要指标，间接地反应出药物中部分不溶性微粒的含量，反应出药物的纯度。不溶性微粒进入血管能引起血管肉芽肿、静脉炎、血栓及血小板减少，对心肌、肝、肾亦有损害。来自国家药品不良反应检测中心的监测数据显示，抗生素类注射剂的药物不良反应发生率高，其主要原因为药物的澄清度项不符合要求。
米卡芬净钠注射剂作为一种注射剂药物，日用量较高，澄清度是一项重要质量指标。控制米卡芬净钠注射剂的澄清度，势必首先需要控制米卡芬净钠原料药的不溶性微粒含量，即需要控制米卡芬净钠原料药的澄清度。而影响米卡芬净澄清度的主要物质，是其在制备方法中产生的脂类杂质。
美国专利6,107,458和WO2004014879A1以及WO96/11210公开了制备和提纯式I化合物的方法。其中，WO2004014879将米卡芬净DIPEA(二异丙基乙基胺)盐(式VIII化合物)通过过滤和色谱分离提纯后，再使用溶剂沉淀，得到式I化合物。
AtsushiOhigashi等人在JournalofSynthesitOrganicChemistry(合成有机化学杂志)2006年第64卷第12期上发表的论文“ProcessDevelopmentofMicafungin，aNovelLipopeptideAntifungalAgent”中介绍，式VIII化合物经过离子交换得到式I化合物的溶液，然后在该溶液中加入有机溶剂形成沉淀，得到式I化合物。
XelliaPharmaceuticals在专利WO2012136498中公开了式III化合物与式VII化合物一锅缩合得到式VIII化合物，并在专利WO2012143293中公开了由式VIII化合物一步大孔树脂层析制备得到式I化合物的方法。
上述现有技术在制备式I化合物的方法均是采用发酵得到的式II化合物为起始原料，经酰化酶水解脱除侧链生成式III化合物。式III化合物与式V化合物酰化缩合得到式VIII化合物，即式I化合物DIPEA盐，最后经离子交换得到式I化合物。具体制备方法如下所示：
该方法制备得到的式I化合物常常会含有与式I化合物结构的酰化侧链类似物的微量杂质，包括主原料式II化合物生成的棕榈酸(式IV化合物)和反应过程中残留的式V、VI和VII化合物。而现有技术公开的制备方法中并没有有效去除这些杂质的纯化工艺。
式II化合物经酰化酶水解生成式III化合物的同时，生成另一副产物式IV化合物(棕榈酸)。棕榈酸为长链脂肪酸，在水中几乎不溶解，在式III化合物纯化时，通常有部分的棕榈酸残留在式III化合物中，即使反复使用已知方法进行结晶和层析，也无法降低式III化合物中棕榈酸的含量。而在后续制备和纯化式I化合物的过程中，棕榈酸与式I化合物的侧链以非极性键和氢键相互结合和缠绕，导致棕榈酸仍残留在式I化合物中。
式III化合物与式V化合物酰化缩合制备式VIII化合物的过程中，式V化合物中本身也残留有少量式VI和式VII化合物，且过量的式V化合物会转化为式VI和式VII化合物，最终导致获得的式VIII化合物样品中残留有式VI和式VII化合物。式VI和式VII化合物为长链芳香类化合物，酯和水溶解性均较差，在式VIII化合物和式I化合物纯化时难以去除，即使反复使用已知方法进行结晶和层析，也无法降低式VI和式VII化合物的含量。这是由于式VI和式VII化合物与式VIII和式I化合物的侧链以非极性键和氢键相互结合和缠绕，导致式VI和式VII化合物始终保留在其中。
可见，采用现有技术公开的层析和结晶工艺均难以完全去除棕榈酸、式VI化合物和式VII化合物，尤其是含量较低时，这些物质与式I化合物无法完全分离。
专利技术人在式I化合物研究过程中发现，上述杂质的残留最终会影响溶液的澄清度，产生“乳光”现象。如果不将上述杂质含量控制在一定限度的范围内，最终获得式I化合物溶液澄清度检查表现显著浑浊，无法达到药品的质量标准。而目前所公开的式I化合物制备方法均无法将这些微量杂质良好去除或控制在合理限度内。
因此，本领域迫切需要获得一种高纯度组合物及其制备方法，以便能够更好的解决溶液澄清度的问题，确保最终制备的抗真菌药物的安全性。

技术实现思路

专利技术人在制备式I化合物的初期，采用本领域公开的方法进行制备得式I化合物，得到的式I化合物经澄清度检查时表现显著浑浊。专利技术人尝试将式I化合物溶解在水、醇水溶液或醇类溶剂中，然后采用0.22μm膜微滤，再采用已知的方法将式I化合物进行固体析出沉淀，得到的化合物复溶后仍表现出浑浊，出现“乳光”现象，使用分光光度计在410nm波长下测定透光率小于97％。专利技术人继续进行研究，采用活性炭吸附、有机溶剂萃取、超滤、硅藻土层析、氧化铝层析等方式，都未能解决上述“乳光”现象。
为了解决这一难题，专利技术人将高浓度的式I化合物溶解在水中，采用膜微滤，将膜上极微量的物质进行质谱分析。专利技术人惊奇的发现，质谱检测结果显示含有式IV、VI和VII化合物。由此专利技术人推断，式I化合物出现的“乳光”现象是由制备过程中式IV、VI和VII化合物的残留所引起。
专利技术人为了进一步明确引起“乳光”现象的原因，采用具有高灵敏度的UV检测器的HPLC检测样品，检测结果显示未发现式IV化合物、式VI化合物和式VII化合物，推测这些物质含量极低，低于UV检测器的最低检测限度。专利技术人继续使用更高灵敏度的分析仪器LC-MS(3Q)，该仪器通常用于临床血药浓度的检测，检测灵敏度极高，可达到ng或pg级别。专利技术人使用LC-MS检测后，惊奇地发现澄清度良好的样品式IV化合物、式VI化合物、式VII化合物含量低。而澄清度表现“乳光”现象的样品，式IV化合物、式VI化合物和式VII化合物含量较高。由检测结果可知，样品中式IV化合物、式VI化合物和式VII化合物残留量过多时会导致澄清度表现出“乳光”现象。
在上述检查结果的基础上，结合式I化合物的合成路线，专利技术人认为对前端工序的式VIII化合物进行纯化，将有可能解决这一难题。对此，专利技术人针对式VIII化合物的纯化工艺进行了研究，采用了多种树脂层析和结晶方法，包括使用C-18、HP20SS等树脂层析、甲醇/乙酸乙酯体系或乙醇/乙酸乙酯或甲醇/乙酸正丙酯等体系结晶，均未解决上述难题。
专利技术人在进一步研究后惊奇地发现，将式VII本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环肽类化合物的组合物，其特征在于，所述组合物包含：结构如式VIII所示化合物，结构如式IV所示化合物或其盐，结构如式VI所示化合物，结构如式VII所示化合物；所述组合物溶于水后形成的溶液无乳光现象；

【技术特征摘要】
1.一种环肽类化合物的组合物，其特征在于，所述组合物包含：结构如式
VIII所示化合物，结构如式IV所示化合物或其盐，结构如式VI所示化合物，
结构如式VII所示化合物；所述组合物溶于水后形成的溶液无乳光现象；
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物溶于水后形成的
溶液在410nm波长下测定的透光率大于等于97.5％，优选大于等于98.0％，更优
选大于等于98.5％。
3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物溶于水后形成的

\t溶液中VIII所示化合物的浓度为10mg/ml，优选20mg/ml，更优选50mg/ml，
最优选100mg/ml。
4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中式IV所示化
合物或其盐的含量为0.01-100ppm，优选0.01-50ppm，更优选0.01-10ppm。
5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中式VI所示化
合物的含量为0.001-10ppm，优选0.001-1ppm，更优选0.001-0.5ppm。
6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中如式VII所示
化合物的含量为0.01-30ppm，优选0.01-10ppm，更优选0.01-5ppm。
7.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中式IV所示化
合物或其盐的含量为0.01-100ppm，优选0.01-50ppm，更优选0.01-10ppm；式
VI所示化合物的含量为0.001-10ppm，优选0.001-1ppm，更优选0.001-0.5ppm；
如式VII所示化合物的含量为0.01-30ppm，优选0.01-10ppm，更优选0.01-5ppm。
8.如权利要求4-7任一所述环肽类化合物的组合物，其特征在于，所述组
合物中各组分含量用超高效液相和三重四极杆串联质谱联用仪测定。
9.一种制备如权利要求1-8任一所述环肽类化合物的组合物的方法，其特
征在于，所述方法包括步骤：
(a)将如式VIII所示化合物粗品溶解在含水的醇溶液中；
(b)调节pH，通过降温和/或添加有机溶剂(i)，形成晶体或沉淀，过滤，干
燥得到如权利要求1-6任一所述环肽类化合物的组合物。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述醇选
自：甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇中的一种或其混合。
11.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述含水
的醇溶液中，醇与水体积比为10-100，优选11-50，更优选12-25。
12.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中所述pH调
节为5.0至8.5。
13.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中所述有机溶剂
(i)选自：正丙醇、异丙醇、异丁醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丙
酯、乙酸异丙酯或其混合。
14.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中所述的降温
的温度为-40至35℃，优选-20至35℃，更优选-10至30℃，最优选-5-20℃。
15.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)-(b)可以
重复一次或一次以上。
16.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述醇选自：
甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇中的一种或其混合；步骤(a)中所述含水的醇溶
液中，醇与水体积比为10-100，优选11-50，更优选12-25；步骤(b)中所述
pH调节为5.0至8.5；步骤(b)中所述有机溶剂(i)选自：正丙醇、异丙醇、
异丁醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸异丙酯或其混合；
步骤(b)中所述的降温的温度为-40至35℃，优选-20至35℃，更优选-10至
30℃，最优选-5-20℃；所述步骤(a)-(b)可以重复一次或一次以上。
17.一种如权利要求1-8任一所述的环肽类组合物的用途，其特征在于，用
于制备式I所示化合物；
18.一种含有式I化合物的组合物，其特征在于，所述组合物由权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘石东，何兵明，王修胜，季晓铭，
申请(专利权)人：上海天伟生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31