一种含有碳氮键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白及其提取方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种含有碳氮键His‑Vx3‑eGFP蛋白‑纳米铝共价偶联泛素化蛋白及其提取方法和应用，所述泛素化蛋白是由His‑Vx3‑eGFP蛋白和经过修饰后的纳米铝，通过碳氮双键形成偶联物，然后偶联物再与经过处理后的肿瘤细胞裂解液孵育，即得所述泛素化蛋白。相对于现有技术，本发明专利技术所得α‑Al2O3‑His‑Vx3‑eGFP性质稳定，能够大大提高泛素化蛋白的募集效果，简化了实验操作。此外，还克服了原有泛素化蛋白疫苗使用时添加佐剂的缺陷。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种含有碳氮键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白及其提取方法，属于肿瘤疫苗

技术介绍
肿瘤严重威胁人类的健康。治愈性切除手术或化疗、放疗是目前肿瘤病人首选的治疗方法。临床资料显示，大部分肿瘤病人对化疗、放疗等治疗不敏感，因此，肿瘤的临床治疗迫切需要新的方法和手段。肿瘤生物治疗作为一种新的肿瘤治疗策略，具有特异性强、毒副作用小等优点，越来越受到人们重视。其中，以树突状细胞(DC)为载体的肿瘤疫苗目前已成为肿瘤生物治疗的研究热点。在肿瘤发生发展过程中，肿瘤抗原不能有效呈递给T细胞是导致免疫逃逸的重要原因。同时在荷瘤机体中，由于存在抗原递呈细胞的功能低下甚至缺陷，特别是DC在数量和功能的改变，可造成肿瘤细胞逃避机体的免疫监视，导致肿瘤的形成和发展。目前，基于DC的肿瘤疫苗被认为是最有效的肿瘤疫苗之一，已开展大量基础研究和临床试验。DC疫苗功能的实现主要取决于两部分因素，一是DC的有效抗原提呈作用；二是负载有效的抗原，抗原信息得以充分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有碳氮键的His‑Vx3‑eGFP蛋白‑纳米铝共价偶联泛素化蛋白，其特征在于，所述泛素化蛋白是由His‑Vx3‑eGFP蛋白和经过修饰后的纳米铝，通过碳氮双键形成偶联物，然后偶联物再与经过处理后的肿瘤细胞裂解液孵育，即得所述泛素化蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种含有碳氮键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白，其特征在于，所述泛素化蛋白是由His-Vx3-eGFP蛋白和经过修饰后的纳米铝，通过碳氮双键形成偶联物，然后偶联物再与经过处理后的肿瘤细胞裂解液孵育，即得所述泛素化蛋白。
2.权利要求1所述的含有碳氮键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用三乙氧基硅烷，对纳米铝颗粒进行修饰；
(2)将修饰后的纳米铝与戊二醛反应，使醛基连接至纳米铝，然后加入His-Vx3-eGFP蛋白，通过生成碳氮双键形成His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联物；
(3)培养肿瘤细胞，抑制泛素化蛋白的降解，经细胞裂解液处理，离心得上清液；
(4)将步骤(2)所得共价偶联物和步骤(3)所得上清液共孵育，即得所述泛素化蛋白α-Al2O3-His-Vx3-eGFP-Ub。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述修饰方法为：纳米铝与过量的三乙氧基硅烷室温下搅拌反应，使三乙氧基硅烷与纳米铝上的羟基反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：王立新，沈艳飞，赵金金，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32