本发明专利技术提供了一种含有15N—L—脯氨酸残基的三肽化合物和/或其与酸形成的盐，所述三肽化合物结构式如下：；其缩写为H—（β-Ala）—（15N-Pro）—Dab—NH—Bzl；其中：β-Ala指β—丙氨酸残基； 15N-Pro指氮元素为氮15的L—脯氨酸残基；Dab指L—2,4二氨基丁酸残基；Bzl指苄基。该三肽减皱化合物和/或其与酸形成的盐是一种带有氮15示踪剂的对人体安全无害的多肽化合物。它是一种乙酰胆碱受体抑制剂，可以使肌肉松弛，减皱效果显著，可用于减轻、减少皱纹的药物研究和治疗中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药用化妆品
，具体涉及一种含有15N—L—脯氨酸残基的三肽减皱化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
皱纹的形成主要是由肌肉强烈收缩或肌肉长时间保持在强烈收缩位置所造成。目前，治疗面部皱纹的主要方法是注射肉毒杆菌毒素A，通过将肉毒杆菌毒素A注入面部肌肉的方式使面部肌肉麻痹。这样，位于眼部或额头的肌肉就不能再活动，从而使得眼部或额头皱纹不易出现。然而，使用皮下注射肉毒杆菌毒素A的治疗必须由专业医生来实施，同时与之相关的高额费用及较高的毒性也限制了肉毒杆菌毒素A的广泛应用。此外，其作用仅能持续3—6个月，之后就必须重复注射治疗。肉毒杆菌毒素A的作用机制在于其选择性地阻断乙酰胆碱在神经肌肉突触处的释放，由此出现肌肉麻痹；这是通过一种被称为SNAP—25蛋白质的裂解来实现的。SNAP—25蛋白的N—末端氨基酸序列（Glu—Glu—Met—Gln—Arg—Arg—NH2）能抑制在突触中Ca++依赖性神经递质的释放，并导致肌肉松弛。由此开发的、可局部施用的化合物Ac—Glu—Glu—Met—Gln—Arg—Arg—NH2（阿基瑞林）比肉毒杆菌毒素A的作用约弱5000倍，从而使其能更好地按剂量给药并且几乎无毒性。然而，它的松弛肌肉作用太弱且极不稳定，甚至于不能达到较满意的减少皱纹的效果。急需寻找毒性更低，减皱效果更好的化合物以满足市场的需求。中国专利200580039359.9公开了一种结构更为简化的三肽化合物，其中的化合物4.5 和4.6在细胞水平的试验中在2小时和48小时显示了比阿基瑞林更好的减皱效果，然而其在更长时间的减皱实验中却未能显示令人满意的减皱效果，且在人体试验测试中也未能显示更好的临床适用性。因此，还需要寻找减皱效果持续时间更长、具有更好临床适用性的结构简单的减皱化合物，以满足临床需要。自然界的氮是由氮14和氮15两种稳定同位素组成的，其中氮14的含量约为99.63%，其原子量为14.0037，氮15的含量约为0.365%，其原子量为15.0001。由于普通的氮缺乏适用的放射性同位素示踪原子，氮15就成为化学、医学、农业科学等研究应用领域中的重要示踪原子（稳定性同位素示踪原子），它是一种对人体无辐射危害、损伤的安全的示踪剂。至上世纪80年代初，国际上已有数百种氮15标记化合物用于各项研究和应用，为此还有专用的氮15光谱分析仪。医学研究中，在对药物作用、药物分布、药物代谢等情况进行了解掌握时，氮15标记化合物的应用发挥出其功能显著的示踪剂作用。氮15除具有同位素示踪特性外，通常情况下与氮14的性能并没有差别。但是，本专利技术人在对减皱化合物进行研究时令人惊讶地发现，将某些具有减皱效果的三肽化合物中的脯氨酸的氮原子替换为氮15后，该三肽化合物不仅具有了同位素示踪性，而且大大延长了减皱的持续效果，更在临床试验中显示了意想不到的持续减皱效果，进一步满足了临床需要，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种含有15N—L—脯氨酸残基的三肽减皱化合物及其制备方法和应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种含有15N—L—脯氨酸残基的式（I）所示的三肽化合物或其与酸形成的盐： （I）该化合物也可以用缩写H—（β-Ala）—（15N-Pro）—Dab—NH—Bzl表示；其中：β-Ala为β—丙氨酸残基； 15N-Pro为氮元素为氮15的L—脯氨酸残基； Dab为L—2,4二氨基丁酸残基；Fmoc为9－芴基甲氧基羰基；Boc为叔丁氧羰基；Bzl为苄基。上述三肽化合物可与酸形成单价或多价的、均质或混合的盐。具体的，所述盐可以为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、丙二酸盐、马来酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、扁桃酸盐、肉桂酸盐、烟酸盐、甲磺酸盐或甲苯磺酸盐。其中优选为盐酸盐或乙酸盐。本专利技术化合物可以按照中国专利200580039359.9所述制备方法制备，只是在制备过程中将原料脯氨酸替换为15N脯氨酸。本专利技术所述三肽化合物或其与酸形成的盐也可以按照如下方法制备得到：1）将Fmoc—Dab(Boc)—OH与2-Cl-Trt树脂连接，制得Fmoc—Dab(Boc)—2-Cl-Trt树脂；2）对步骤1）制得产物的氨基端进行脱保护，脱除保护基；3）将步骤2）制得产物与Fmoc—L—（15N-Pro）—OH在缩合剂存在下进行缩合反应，制得Fmoc—（15N-Pro）—Dab(Boc)—2-Cl-Trt树脂；4）对步骤3）制得产物的氨基端进行脱保护，脱除保护基；5）将步骤4）制得产物与Boc—(β-Ala)—OH在缩合剂存在下进行缩合反应，制得Boc—（β-Ala）—（15N-Pro）—Dab(Boc)—2-Cl-Trt树脂；6）对步骤5）制得产物进行切割，得到Boc—（β-Ala）—（15N-Pro）—Dab(Boc)—OH；7）将步骤6）制得产物与苄胺在缩合剂存在下进行缩合反应，制得Boc—（β-Ala）—（15N-Pro）—Dab(Boc)—NH—Bzl；8）对步骤7）制得产物进行脱保护，得到H—（β-Ala）—（15N-Pro）—Dab—NH—Bzl。如果需要，可以将所得化合物用如下方法进一步精制纯化：将步骤8）制得的粗品化合物进行柱层析纯化、脱盐，将收集的洗脱液浓缩、冷冻干燥，即得式（I）化合物精品。如果需要，可以将所得式（I）化合物与相应的酸反应将其转化为相应的盐。本专利技术还提供含有式（I）化合物或其酸加成盐的药物组合物或者化妆品组合物。进一步地，可以将所述组合物制备成为软膏剂或凝胶剂或者化妆品面霜或者按摩霜使用，且其中式（I）化合物或其盐的质量百分含量为0.001%—5%。本专利技术还提供式（I）所述三肽化合物或其与酸形成的盐在制备用于减皱药物中的应用。本专利技术还提供式（I）所示三肽化合物或其与酸形成的盐在制备用于减皱的化妆品中的应用。本专利技术化合物或其盐在应用时的施用方式为经皮涂抹施用，因此，可以将本专利技术化合物制备成经皮给药的任何制剂形式使用。本专利技术中，常见英文缩写的含义为：DIC：二异丙基碳二亚胺DCC：二环己基碳二亚胺HOBT：1－羟基苯并三氮唑NMM：N－甲基吗啉DMF：N,N－二甲基甲酰胺DCM：二氯甲烷Dab：L－2,4－二氨基丁酸残基Fmoc：9－芴基甲氧基羰基Boc：叔丁氧羰基DIPEA：二异丙基乙胺β-Ala：β－丙氨酸残基15N-Pro：氮元素为氮15的L－脯氨酸残基Bzl：苄基HCl：氯化氢TLC：薄层层析2-Cl-Trt树脂：2－氯三苯甲基氯树脂...
【技术保护点】
式（I）化合物或其与酸形成的盐： （I） 。
【技术特征摘要】
2014.10.20 CN 20141055680161.式（I）化合物或其与酸形成的盐：
（I） 。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述盐为式（I）化合物的盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、乙醇酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、丙二酸盐、马来酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、扁桃酸盐、肉桂酸盐、烟酸盐、甲磺酸盐或甲苯磺酸盐。
3.根据权利要求1所述的化合物，其为式（I）化合物的盐酸盐或乙酸盐。
4.权利要求1所述化合物的制备方法，该方法包括如下步骤：
1）将Fmoc—Dab(Boc)—OH与2-Cl-Trt树脂连接，制得Fmoc—Dab(Boc)—2-Cl-Trt树脂；
2）对步骤1）制得产物的氨基端进行脱保护，脱除保护基；
3）将步骤2）制得产物与Fmoc—L—（15N-Pro）—OH在缩合剂存在下进行缩合反应，制得Fmoc—（15N-Pro）—Dab(Boc)—2-Cl-Trt树脂；
4）对步骤3）制得产物的氨基端进行脱保护，脱除保护基；
5）将步骤4）制得产物与Boc—(β-Ala)—OH在缩合剂存在下进行缩合反应，制得Boc—（β-Ala）—（15N-Pro）—Dab(Boc)—2-Cl-Trt树脂；
6）对步骤5）制得产物进行切割，得到Boc—（β-Ala）...
【专利技术属性】
技术研发人员：张嘎，张贲，丁文锋，
申请(专利权)人：张嘎，
类型：发明
国别省市：河南;41
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