The invention discloses a purification method of diphtheria toxoid, which comprises the following steps of centrifugation, ultrafiltration, concentration, salting out, salting out of two sections, ultrafiltration desalting, detoxification and chromatography. A method for purifying diphtheria toxoid provided by the invention, the preparation method of diphtheria toxoid purity is high, up to 2500Lf/mg, so as to reduce the side reaction after inoculation, higher safety; the method of the invention has the advantages of simple operation, convenient purification, low cost, suitable for industrial mass production.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
,具体涉及一种白喉类毒素的纯化方法。
技术介绍
白喉一直是最令人恐怖的儿童期疾病之一,是由能够产生外毒素的白喉棒状杆菌(以下简称白喉杆菌)引起的急性病,该病的爆发具有破坏性。细菌毒素可以引起产生上呼吸道阻塞性假膜(哮吼)或损伤心肌及其他组织,虽然大多数感染为隐性或临床症状相对较轻,但许多患者死于由白喉引起的呼吸道阻塞或中毒性心肌炎。历史上许多国家都发生过以儿童为主的白喉大流行。在白喉呈地方性流行的国家,该病多为散发病例或小规模爆发。尽管大多数的白喉杆菌感染为隐性或临床症状相对较轻,但其病死率高(>10%),即便在最近的爆发中亦是如此。据估计在20世纪80年代大量使用白喉类毒素以前,在发展中国家每年约有100万病例,5万~6万例死亡。即使在近几年,在地方性流行区,白喉的报告病死率仍超过10%。人是白喉杆菌的唯一天然宿主。白喉仅通过飞沫和密切接触传播。高传染性皮肤白喉在热带地区的一些地方常见。在温带气候的地方多数病例发生在寒冷季节,而在温热带气候的地方一年四季均有传播发生。在白喉仍呈地方性流行的国家,该病主要影响学龄前儿童和学龄儿童。在大多数工业化国家白喉已无地方性流行或非常罕见。然而,保持儿童和成人的疫苗高接种率仍十分重要,这一点已从世界许多地方白喉的爆发中得到了印证,尤其是20世纪90年代发生在前苏联的白喉大流行。传统的白喉疫苗生产流程是用液体培养基发酵培养产毒的白喉杆菌,对含外毒素的培养上清离心去除菌体,然后用硫酸铵二段盐析法进行精制,精制后的毒素用甲醛进行脱毒成为类毒素原液。但是传统的方法生产的类毒素原液存在纯度不高的 ...
【技术保护点】
一种白喉类毒素的纯化方法,其特征在于,它包括以下步骤:S1.离心:将培养的白喉培养液采用甲醛进行杀菌,然后用连续离心机进行离心去除菌体,控制进液端流速至离心上清液澄清、无乳光;S2.超滤浓缩:将上述离心液采用孔径为0.45~0.65μm的滤芯预过滤,再用截留分子量为30KD的超滤膜超滤浓缩至原体积的1/10,然后用注射用水将浓缩液稀释一倍,再超滤浓缩至稀释前浓缩液的体积,重复上述操作3~5次,得终浓缩液;S3.一段盐析:终浓缩液中加入硫酸铵进行盐析,然后按离心收集的上清液体积的1%加入活性炭,继续搅拌10~30min,再加入碳酸氢钠使其终浓度为0.5%,继续搅拌30~60min,离心收集盐析后的上清液;S4.二段盐析:在盐析后的上清液中加入硫酸铵进行二段盐析,盐析后离心收集沉淀;S5.超滤脱盐:用碳酸氢钠溶液溶解沉淀,采用孔径为0.45~0.65μm的滤芯预过滤,用碳酸氢钠溶液将截留液稀释一倍,用截留分子量为30KD的滤膜超滤浓缩至原体积,重复上述操作直至硫酸铵含量<0.1%;S6.脱毒:超滤脱盐后的白喉类毒素中加入甲醛溶液,置于35~39℃脱毒28~34d;S7.层析:将脱毒后的白喉 ...
【技术特征摘要】
1.一种白喉类毒素的纯化方法,其特征在于,它包括以下步骤:S1.离心:将培养的白喉培养液采用甲醛进行杀菌,然后用连续离心机进行离心去除菌体,控制进液端流速至离心上清液澄清、无乳光;S2.超滤浓缩:将上述离心液采用孔径为0.45~0.65μm的滤芯预过滤,再用截留分子量为30KD的超滤膜超滤浓缩至原体积的1/10,然后用注射用水将浓缩液稀释一倍,再超滤浓缩至稀释前浓缩液的体积,重复上述操作3~5次,得终浓缩液;S3.一段盐析:终浓缩液中加入硫酸铵进行盐析,然后按离心收集的上清液体积的1%加入活性炭,继续搅拌10~30min,再加入碳酸氢钠使其终浓度为0.5%,继续搅拌30~60min,离心收集盐析后的上清液;S4.二段盐析:在盐析后的上清液中加入硫酸铵进行二段盐析,盐析后离心收集沉淀;S5.超滤脱盐:用碳酸氢钠溶液溶解沉淀,采用孔径为0.45~0.65μm的滤芯预过滤,用碳酸氢钠溶液...
【专利技术属性】
技术研发人员:吴强,陈道远,马礼耕,伍长华,
申请(专利权)人:成都欧林生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:四川;51
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