本发明专利技术提供了在受治疗者中确定HCC亚型的方法，其包括a)从所述受治疗者获得样品，b)测定样品以检测1种或多种生物标志物的表达，以及c)将所述生物标志物的表达与受治疗者中的HCC亚型相关联。本发明专利技术还提供了在样品中检测HCC干细胞的方法。此外，本发明专利技术提供了用于治疗患有HCC的受治疗者的方法和组合物，其利用了与HCC干细胞相关的生物标志物。
【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2008年6月9日，专利技术名称为“确定肝细胞癌亚型和检测肝癌干细胞的方法”的专利技术专利申请No.200880025276.8的分案申请。相关申请的交叉参考本申请要求2008年6月9日提交的PCT申请号PCT/US08/007196的权益，后者要求2007年6月8日提交的美国临时申请号60/942,833的优先权，其公开内容在此引入作为参考。关于联联邦政府资助的研究的声明本专利技术是在政府资助下完成的，由美国国家癌症协会的内部研究计划授予的NCI补助金号为ROICA128609。政府拥有本专利技术中的某些权利。专利技术背景肝细胞癌(HCC)是世界范围内癌症死亡的第三大主要原因。HCC就其临床表现以及基因组模式和转录模式来说是非常异质的。HCC的异质性和用于其检测和亚型鉴定的适当的生物标志物的缺乏已经妨碍了患者的预后和治疗层级。因此，存在对于能够在哺乳动物中鉴定HCC的亚型的一种或多种生物标志物以及对以HCC的亚型为基础提供适当治疗的方法的需求。专利技术简述本专利技术提供在受治疗者中确定HCC的亚型的方法，所述方法包括a)从受治疗者获得样品，b)测定样品以检测至少1种生物标志物，以及c)将所检测的生物标志物与受治疗者中的HCC亚型相关联。在这一点上，所述生物标志物选自由SEQ ID NO:1-39标识的生物标志物所组成的组。本专利技术还提供在样品中检测HCC干细胞的方法，在一个实施方案中，本专利技术的方法包括a)获得样品，b)测定样品以检测mir-181生物标志物的存在，以及c)将mir-181生物标志物的存在或不存在与样品中HCC干细胞的存在或不存在相关联。本专利技术还提供用于治疗患有HCC的受治疗者的方法和组合物，其利用与HCC干细胞相关的生物标志物。附图的不同视图的简述图1A显示mir-181a1的表达，其为以微小RNA分析为基础的HSC-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1B显示mir-181a2的表达，其为以微小RNA分析为基础的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1C显示mir-181b1的表达，其为以微小RNA分析为基础的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1D显示mir-181b2的表达，其为以微小RNA分析为基础的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1E显示mir-181c的表达，其为以微小RNA分析为基础的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1F显示mir-181a的表达，其为如通过RT-PCR所测定的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1G显示mir-181b的表达，其为如通过RT-PCR所测定的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1H显示mir-181c的表达，其为如通过RT-PCR所测定的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1I显示mir-181d的表达，其为如通过RT-PCR所测定的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图1J显示mir-213的表达，其为如通过RT-PCR所测定的HSC、DBE、HP和MH-HCC细胞中(肿瘤与非肿瘤组织的)log(2)比率。图2A显示mir-181a1的散布图。图2B显示mir-181a2的散布图。图2C显示mir-181b1的散布图。图2D显示mir-181b2的散布图。图2E显示mir-181c的散布图。图3A是显示0、2和8天时ESC培养基相比于常规培养中mir-181a、mir-181b、mir-181c和mir-181d产生倍数的图示。图3B是显示0、2和8天时ESC培养基相比于常规培养中CAR和UGT2B7的倍数的图示。图3C是显示0、2和8天时ESC培养基相比于常规培养中CCND1和TACSTD1产生倍数的图示。图3D是显示撤走ESC培养基后0、1、2和8天时mir-181a、
mir-181b、mir-181c和mir-181d产生倍数的图示。图3E是显示撤走ESC培养基后0、1、2和8天时CAR和UGT2B7产生倍数的图示。图3F是显示撤走ESC培养基后0、1、2和8天时CCND1和TCSTD1产生倍数的图示。图4是在pMSCV-hTR和pMSCV-mir-181b1处理的HuH1细胞中mir-181b的相对表达的图示。图5是在用2’-O-甲基反义相比于对照转染的HuH7细胞中mir-181的相对表达的图示。图6A是在pMSCV-hTR和p-MSCV-mir-181b1处理的HuH1细胞中CCND1的相对表达的图示。图6B是在pMSCV-hTR和p-MSCV-mir-181b1处理的HuH1细胞中TACTD1的相对表达的图示。图6C是在pMSCV-hTR和p-MSCV-mir-181b1处理的HuH1细胞中DKK1的相对表达的图示。图6D是在对照和反义处理的HuH7细胞中CCND1的相对表达的图示。图6E是在对照和反义处理的HuH7细胞中TACSTD1的相对表达的图示。图6F是在对照和反义处理的HuH7细胞中DKK1的相对表达的图示。图7A显示在DKK1的611-632 3’-UTR处的mir-181a、mir-181b、mir-181c和mir-181d的预测的结合位点。图7B显示在DKK1的771-799 3’-UTR处的mir-181a、mir-181b、mir-181c和mir-181d的预测的结合位点。图8A是预测的mir-181a1和mir-181b1的TCF-4结合位点。图8B是预测的mir-181a2和mir-181b2的TCF-4结合位点。图8C是预测的mir-181c和mir-181d的TCF-4结合位点。图8D是预测的mir-181c和mir-181d的另一个TCF-4结合位点。图9是在每种细胞系(Hep3b B型(HSC-HCC)、MHCC97C型(HP-HCC)、Smmc7721D型(MH-HCC))相比于原代肝细胞中mir-181a、mir-181b、mir-181c和mir-181d的倍数的图示。图10是在HSC-HCC、BDE-HCC、HP-HCC和MH-HCC亚型中具有升高和降低表达的miRNA的数目的图示。专利技术详述微小RNA(或miRNA)是存在于许多生物中并且通过主要在3’未翻译区中与mRNA的部分互补位点的碱基配对而在mRNA翻译和降解中起到关键调节作用的小的非编码的RNA基因产物(例如，约22nt)。Lee，Science，294(5543):862-864(2001)；Lau，Science，294(5543):858-862(2001)；Lagos，Science，294(5543):853-858(2001)。miRNA被表达为长的前体RNA，其被Drosha，一种细胞核酸酶加工并且随后通过输出蛋白-5(exportin-5)依赖性的机制被运送至细胞质中。Yi，Genes Dev，17(2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种治疗患有肝细胞癌(HCC)的受治疗者的方法，其包括施用治疗上有效量的试剂，其中当所述受治疗者患有肝干细胞样肝细胞癌(HSC‑HCC)和/或胆管上皮细胞样肝细胞癌(BDE‑HCC)亚型时，所述试剂选自由β‑联蛋白抑制剂、miR‑181抑制剂及其组合组成的组，或者当所述受治疗者患有肝祖细胞样肝细胞癌(HP‑HCC)和/或成熟肝细胞样肝细胞癌(MH‑HCC)亚型时，所述试剂是miR‑181抑制剂，其选自由miR‑181a1、miR‑181a2、miR‑181b1、miR‑181b2、miR‑181c及其组合组成的组。
【技术特征摘要】
2007.06.08 US 60/942,8331.一种治疗患有肝细胞癌(HCC)的受治疗者的方法，其包括施用治疗上有效量的试剂，其中当所述受治疗者患有肝干细胞样肝细胞癌(HSC-HCC)和/或胆管上皮细胞样肝细胞癌(BDE-HCC)亚型时，所述试剂选自由β-联蛋白抑制剂、miR-181抑制剂及其组合组成的组，或者当所述受治疗者患有肝祖细胞样肝细胞癌(HP-HCC)和/或成熟肝细胞样肝细胞癌(MH-HCC)亚型时，所述试剂是miR-181抑制剂，其选自由miR-181a1、miR-181a2、miR-181b1、miR-181b2、miR-181c及其组合组成的组。2.如权利要求1所述的方法，其中所述miR-181抑制剂包括试剂，所述试剂含有与选自由反义miR-181a1、反义miR-181a2、反义miR-181b1、反义miR-181b2、反义miR-181c及其组合组成的组的至少一种反义miRNA互补的核酸。3.一种治疗患有BDE-HCC亚型的受治疗者的方法，其包括施用有效量的含有与至少5种生物标志物互补的核酸的试剂，所述生物标志物选自由SEQ ID NO:2、9-17和19-35标识的生物标志物组成的组。4.一种治疗患有HP-HCC亚型的受治疗者的方法，其包括施用有效量的含有与至少5种生物标志物互补的核酸的试剂，所述生物标志物选自由SEQ ID NO:1-8、11-13、17-18、23、28、29和33-39标识的生物标志物组成的组。5.一种治疗患有MH-HCC亚型的受治疗者的方法，其包括施用有效量的含有与至少5种生物标志物互补的核酸的试剂，所述生物标志物选自由SEQ ID NO:1、8-12、14-17和19-39标识的生物标志物组
\t成的组。6.一种治疗患有HSC-HCC亚型的受治疗者的方法，其包括施用有效量的含有与至少5种生物标志物互补的核酸的试剂，所述生物标志物选自由SEQ ID NO:1-19标识的生物标志物组成的组。7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：X·W·王，J·季，T·亚玛史塔，C·M·克罗斯，
申请(专利权)人：由卫生与公众服务部代表的美利坚合众国政府，俄亥俄州立大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US
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