用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条和方法技术

本发明专利技术涉及用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条和方法，具体地，公开了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条，包括：含荧光微球标记的犬冠状病毒抗体的标记物垫、含另一犬冠状病毒抗体的捕获膜。本发明专利技术还公开了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的方法，包括：将含犬冠状病毒的溶液滴加到前述试纸条的样品垫上，反应一段时间后用读卡器检测信号。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及纳米材料技术、免疫学技术、侧流层析技术等领域。更具体的，本专利技术涉及一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条；此外，本专利技术还涉及一种用荧光免疫层析技术来检测犬冠状病毒的方法。
技术介绍
犬冠状病毒可感染不同品种和年龄的狗，幼犬尤其严重。感染的狗会出现胃肠炎症状，频繁地呕吐、腹泻、厌食、沉郁，伴随白细胞减少，迅速脱水，甚至死亡。有时症状消失后14-21天会复发，严重危害犬类的健康。如果犬感染了犬冠状病毒，需要尽早检测并及早治疗。检测犬冠状病毒的传统方法是胶体金免疫层析法，但是胶体金免疫层析灵敏度较低，稳定性也不够好，容易出现假阴假阳。我公司开发的荧光免疫层析法检测犬冠状病毒的试剂盒灵敏度很高，可检测到10ng/ml的犬冠状病毒抗原，对犬冠状病毒感染的犬能早检出早隔离早治疗，提高幼犬的成活率，同时因为灵敏度提高，极大地减少了假阴假阳的出现，提高了产品的稳定性，因此具有重要的应用前景。
技术实现思路
本专利技术旨在解决本领域中的上述各种问题和实现以下目标。具体地，本专利技术的目的就是要提供一种方便、快速而且高灵敏度的地检测犬冠状病毒的试纸条和方法。具体的，本专利技术提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条。在一种实施方式中，本专利技术提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述标记物垫含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。在进一步的实施方式中，其特征在于，所述荧光微球是时间分辨荧光微球。r>在进一步的实施方式中，其特征在于，所述时间分辨荧光微球是含铕复合物的荧光微球。在另一种实施方式中，本专利技术提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的方法，其特征在于，在所述的试纸条样品垫上滴加含犬冠状病毒的样品，反应后检测荧光信号。在另一种实施方式中，本专利技术提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试剂盒，包含试剂瓶和试纸条，其中试纸条又包含标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述试剂瓶含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。在进一步的实施方式中，其特征在于，所述荧光微球是时间分辨荧光微球。在另一种实施方式中，本专利技术提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的方法，其特征在于，在所述的试剂瓶中加入含犬冠状病毒的样品，混合后滴加到试纸条样品垫上，反应后检测荧光信号。详细说明用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条如图1示，包括样品垫1，标记物垫2，NC膜3，吸水纸4，PVC底板5。NC膜3上含有C线6和T线7。其中样品垫一般为玻璃纤维、滤纸或滤血膜。标记物垫可为玻璃纤维、滤纸或聚酯膜。当样品垫和标记物垫材质相同时可整合在一起，用一条玻璃纤维、滤纸或聚酯膜来完成样品垫和标记物垫的功能。所述标记物垫上或者含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体，或者同时含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体和生物素标记的犬冠状病毒捕获抗体，还可以含有其他用作阳性对照的荧光微球标记的犬冠状病毒或抗体，如链亲和素或兔抗体。如果试剂盒中有试剂瓶，则标记物垫可以仅仅是玻璃纤维、滤纸或聚酯膜而不含荧光微球或抗体。捕获膜可以是硝酸纤维素膜（NC膜）、尼龙膜等，所述捕获膜的T线或者含有犬冠状病毒捕获抗体（双抗体夹心法），或者含链亲和素（标记物垫同时含荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体和生物素标记的犬冠状病毒捕获抗体），C线或者含有能结合犬冠状病毒检测抗体的二抗，或者含生物素标记的牛血清白犬冠状病毒或卵清犬冠状病毒（标记物垫含链亲和素），或者含羊抗兔抗体（标记物垫含兔抗体）。用免疫层析技术检测犬冠状病毒的方法，如图1示，当样品溶液滴加到试纸条的样品垫1上后，液体将沿水平箭头方向移动，先到达标记物垫2，样品中的犬冠状病毒与标记物垫2中荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体结合形成‘犬冠状病毒-犬冠状病毒检测抗体-荧光微球’复合物，当溶液继续移动到达捕获膜的T线时，溶液中的‘犬冠状病毒-犬冠状病毒检测抗体～荧光微球’将与此处的犬冠状病毒捕获抗体形成‘犬冠状病毒捕获抗体-犬冠状病毒-犬冠状病毒检测抗体～荧光微球’复合物并被固定在T线上，随后用检测仪来检测T线上的荧光信号，根据信号强度可以判断犬冠状病毒浓度的高低，荧光信号强则犬冠状病毒浓度高。由于T线处犬冠状病毒捕获抗体捕获的荧光微球包含有很多荧光分子，所以T线处可以检测到很强的荧光信号，从而使这种免疫层析技术检测犬冠状病毒的方法有很高的灵敏度。当荧光分子是时间分辨荧光复合物时，由于发射光有数百微秒到数毫秒的荧光寿命，可以在激发光撤掉后数十微秒到数百微秒检测发射光信号，此时激发光和背景荧光都已经消失，只有荧光分子特异的荧光信号，所以检测的特异性和灵敏度都大大提高。本专利技术中的‘微球’可以是二氧化硅微球、聚苯乙烯微球或其他高分子微球，微球直径在10nm到10μm之间，其表面可带有羧基、氨基或酮基等官能团。本专利技术中的‘荧光微球’指球体中包埋了荧光分子的微球。所述‘荧光分子’包括荧光素、罗丹明等荧光分子或其衍生物、铕复合物、钐复合物、铽复合物等镧系元素复合物荧光分子以及铂复合物、钯复合物等磷光分子，其中铕复合物为铕与配体螯合后再与其他有机分子形成的复合物，铂复合物为铂与配体（包括卟啉、卟吩、吡啶及其衍生物）螯合形成的复合物，其中铕复合物又为时间分辨荧光复合物，铂复合物又为磷光复合物。本专利技术中的‘荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体’指跟荧光微球耦联的犬冠状病毒检测抗体。更具体的，犬冠状病毒检测抗体为用犬冠状病毒的蛋白免疫动物后动物血液中出现的能跟犬冠状病毒特异性结合的抗体。本专利技术中的‘捕获探针’指结合在试纸条捕获膜上的犬冠状病毒捕获抗体（双抗体夹心法）、链亲和素（标记物垫同时含荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体和生物素标记的犬冠状病毒捕获抗体）。更具体的，犬冠状病毒捕获抗体为用犬冠状病毒蛋白免疫动物后动物血液中出现的能跟犬冠状病毒特异性结合的抗体，但是犬冠状病毒捕获抗体与犬冠状病毒检测抗体识别犬冠状病毒蛋白的不同部位，两个抗体分别识别并结合犬冠状病毒蛋白后靠双抗体夹心法识别犬冠状病毒。本专利技术中试纸条捕获膜上的‘T线’指捕获探针所在的区域，也就是荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体与犬冠状病毒结合后再被固定的犬冠状病毒捕获抗体捕获（双抗体夹心法）的区域，或者是链亲和素与生物素标记的犬冠状病毒捕获抗体结合的区域（荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体和生物素标记的犬冠状病毒捕获抗体夹心识别犬冠状病毒）。本专利技术中试纸条捕获膜上的‘C线’指荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体与其二抗结合的区域，或者是指含有其他抗原或抗体（羊抗兔抗体）与荧光微球标记的阳性对照结合的区域。因为犬感染犬冠状病毒后病情严重的甚至会引起死亡，所以需要在感染初期尽早快速的检测，早作诊断，早知结果，以便及时采取补救措施或治疗手段。而本专利技术可以通过荧光免疫层析法方便、简单、快速并且高灵敏度地检测动物的犬冠状病毒而早做治疗，避免其进一步发展对动物身体产生严重伤害。附图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述标记物垫含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。

【技术特征摘要】
1.一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述标记物垫含有荧光微球标记的犬冠状病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。
2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球是时间分辨荧光微球。
3.如权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述时间分辨荧光微球是含铕复合物的荧光微球。
4.一种用荧光免疫层析技术检测犬冠状病毒的方法，其特征在于，在权利要求1所述的试纸条样品垫上滴加含犬冠状病毒的样品，反应后检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨挥，
申请(专利权)人：杨挥，
类型：发明
国别省市：上海;31