本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌及其在防治玉米小斑病方面的应用。本发明专利技术的一种防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株，该菌株为DZSY21；保藏名称为枯草芽孢杆菌；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年11月27日；保藏编号:CGMCC NO.11749。所述枯草芽孢杆菌的16S rDNA基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述枯草芽孢杆菌的gyrB基因序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；本发明专利技术具有生长速度快、产孢量大，抗逆性强，抗菌性强，在玉米植株的叶片中能够定量定殖。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及枯草芽孢杆菌及其在防治玉米小斑病方面的应用。
技术介绍
玉米小斑病(Southerncornleafblight)是世界玉米产区普遍发生的重要病害之一。目前，对小斑病的防治主要采用种植抗性品种和化学防治等方法。其中化学防治是控制玉米病害的关键技术之一，然而，过度使用化学杀菌剂容易引起生态环境污染和食品安全等问题。因此生物防治已逐步发展成为玉米，尤其是鲜食玉米的重要绿色防控技术。近年来，植物内生菌重要的生理、生态作用，在农业和医药领域中的巨大应用潜力，逐渐引起人们的广泛关注和重视。因此，以植物内生菌及其代谢产物作为农用价值的菌株和化合物所开展的研究正在兴起，由此而开发新的生物农药正在成为研究的热点和重点。植物内生菌是自然界微生物的一个重要类群，其数量庞大且与宿主植物以及其他生物之间具有紧密的生态关系。由于内生菌生境的特殊性，其次生代谢产物非常丰富，从中筛选能够产生生物活性的代谢产物的菌株将具有更大的可行性，对于解决农作物病害的发生发展以及提高其抗逆能力等也提供了新的思路。目前，植物内生菌的研究主要集中在药用植物、农作物以及特殊生境植物等，从药用植物中筛选内生菌或其次生代谢产物来控制植物病害，仍是当前内生菌研究的主流之一。已有多项研究表明植物内生菌或其代谢产物在玉米小斑病病害防治中发挥着重要的作用。如马佳等人将哈茨木霉SH2303孢子悬浮液均匀喷施在玉米叶片，能有效防治玉米小斑病。王霞等人在玉米小斑病发病前喷洒青霉TS67菌株的发酵液，对盆栽玉米小斑病的防治效率达到53.34％。叶云峰等人在番茄中分离的内生枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，能分泌出环脂抗菌多肽，该物质对植物炭疽病菌和番茄青枯病菌等多种植物病原真菌和病原细菌有较强抑制作用。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，能产生多种抗菌素和酶,具有显著的抗菌活性和极强的抗逆能力，是土壤和植物微生态优势种群之一，较其他微生物更具有开发为生物防控菌剂的潜力。目前，缺乏一种抗菌性强的枯草芽孢杆菌及其在防治玉米小斑病方面的应用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种抗菌性强的枯草芽孢杆菌及其在防治玉米小斑病方面的应用。为了实现上述目的，本专利技术通过如下技术方案实现：本专利技术的一种枯草芽孢杆菌菌株，该菌株为DZSY21；保藏名称为枯草芽孢杆菌；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年11月27日；保藏编号:CGMCCNO.11749。进一步地，所述枯草芽孢杆菌的16SrDNA基因序列为SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，所述枯草芽孢杆菌的gyrB基因序列为SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；所述芽孢杆菌菌株的单菌落在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上为圆形，暗白色，不透明，边缘整齐，表面粗糙有褶皱，在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，35-37℃培养18-24h后，镜检，菌体细胞呈短杆状，能运动；经革兰氏染色呈紫色，为阳性。本专利技术所述的枯草芽孢杆菌株制备的枯草芽孢杆菌菌剂。进一步地，其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：(a)权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵培养物；(b)权利要求1所得枯草芽孢杆菌细胞的超声裂解上清；(c)权利要求1所得枯草芽孢杆菌细胞的超声裂解沉淀。本专利技术所述枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，包括如下步骤：(1)枯草芽孢杆菌种子液制备：将枯草芽孢杆菌DZSY21接种于培养液中，将培养液50mL置于250mL三角锥形瓶中，搅拌速率为160r/min，于35-37℃培养12-16小时，至培养液OD600为0.8-1.0，获得种子液；(2)发酵菌剂制备：将上述枯草芽孢杆菌DZSY21种子液接种于发酵液体培养基中，将培养液350mL置于1L三角锥形瓶中，所述种子液的接种量为1.5％-2.5％，搅拌速率为160r/min，于35-37℃培养8-10小时，调节发酵液中枯草芽孢杆菌DZSY21的菌体浓度至1.0×106-107CFU/mL，获得枯草芽孢杆菌菌剂。进一步地，在步骤(1)中，所述培养液为：10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠、蒸馏水1L，pH7.2；在步骤(2)中，所述液体培养基配方为：20g葡萄糖，5gL-谷氨酸，0.5g硫酸镁，0.5g氯化钾，1g磷酸二氢钾，0.15mg六水硫酸亚铁，5.0mg一水合硫酸锰，0.16mg五水硫酸铜，1L蒸馏水，pH7.0；所述枯草芽孢杆菌DZSY21的菌体具有与玉米叶片共生的特点。本专利技术所述的枯草芽孢杆菌DZSY21在生产用于防治玉米小斑病的产品中的应用。本专利技术所述的枯草芽孢杆菌菌剂在生产用于防治玉米小斑病的产品中的应用。进一步地，所述玉米小斑病是由玉蜀黍平脐蠕孢Bipolarismaydis引起的。本专利技术所述的枯草芽孢杆菌菌剂的使用方法，其特征在于：每片健康玉米叶片上喷洒枯草芽孢杆菌菌剂，所述含菌量为1.0×106-107CFU/mL，体积为5mL。有益效果：本专利技术所公布的枯草芽孢杆菌DZSY21具有生长速度快、产孢量大，抗逆性强，抗菌性强，在玉米植株的叶片中能够定量定殖，能够与玉米叶片共生的特点，具有良好的应用前景。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：(1)枯草芽孢杆菌DZSY21菌体具有与玉米叶片共生的特点，比暴露于如强烈的日光、紫外光、暴风雨等恶劣环境的附生细菌具有稳定的生存环境，可以减缓寄主植物的防卫反应作用，作用更稳定持久。(2)通过体外植物活体试验表明，本专利技术所述的枯草芽孢杆菌制剂对防治玉米小斑病害方面有较好的作用，可以有效地控制玉米小斑病的发生，减少损失。(3)本专利技术最显著的特征是该菌株对植物病原真菌玉米小斑病菌(Bipolarismaydis)生长有明显的抑制作用，该菌株发酵菌剂在施用对象表面能形成一层保护膜阻止玉米小斑病菌侵入，有效减少玉米小斑病的发生。附图说明图1为本专利技术所述的枯草芽孢杆菌DZSY21(BacillussubtilisstrainDZSY21)的菌落图片，在牛肉膏蛋白胨培养基上；图2为本专利技术所述的枯草芽孢杆菌DZSY21(BacillussubtilisstrainDZSY21)同源性的系统发育树图；图3为本专利技术所述的枯草芽孢杆菌DZSY21(BacillussubtilisstrainDZSY21)对玉米小斑病菌菌丝生长的抑制作用的图片；A为玉米小斑病菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于：该菌株为DZSY21；保藏名称为枯草芽孢杆菌；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年11月27日；保藏编号:CGMCC NO.11749。
【技术特征摘要】
1.一种防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于：该菌株为
DZSY21；保藏名称为枯草芽孢杆菌；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普
通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日
期：2015年11月27日；保藏编号:CGMCCNO.11749。
2.根据权利要求1所述的防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株，其特征在
于：所述枯草芽孢杆菌的16SrDNA基因序列为SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，
所述枯草芽孢杆菌的gyrB基因序列为SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；
所述芽孢杆菌菌株的单菌落在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上为圆形，暗白色，
不透明，边缘整齐，表面粗糙有褶皱，在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，35-37℃
培养18-24h后，镜检，菌体细胞呈短杆状，能运动；经革兰氏染色呈紫色，为
阳性。
3.权利要求1所述的防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株制备的枯草芽孢
杆菌菌剂。
4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌菌剂，其活性成分为如下(a)(b)
(c)中的至少一种：
(a)权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵培养物；
(b)权利要求1所得枯草芽孢杆菌细胞的超声裂解上清；
(c)权利要求1所得枯草芽孢杆菌细胞的超声裂解沉淀。
5.权利要求3所述枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步
骤：
(1)枯草芽孢杆菌种子液制备：将枯草芽孢杆菌DZSY21接种于培养液中，
将培养液50mL置于250mL三角锥形瓶中，搅拌速率为160...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁婷，苏博，顾双月，江海洋，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。