本发明专利技术公开了一种利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物及其制备方法，该组合物为三叶青发酵亚临界萃取物Ⅰ和链霉菌发酵产物Ⅲ，具有良好的降血脂功能。其制备包括：将巴西蘑菇液体种子液接入含有三叶青和白芨的三叶青固态发酵培养基中培养，然后置于交变磁场环境中再培养，得三叶青固态发酵产物，再经亚临界水萃取，得到三叶青发酵亚临界萃取物Ⅰ；将链霉菌种子液接入含有萃取剩余物Ⅱ的链霉菌液体发酵培养基中培养，得到链霉菌发酵产物Ⅲ；该方法能够有效地将三叶青中的营养成分和有效成分进行生物降解和利用、有助于提高最终产品中活性成分的含量和活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及=叶青的加工利用领域，具体设及一种利用食药真菌发酵=叶青获得 的组合物及其制备方法。
技术介绍
S叶青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)为葡萄科崖爬藤属植物，風I 名:金线吊葫芦、石老鼠、蛇附子、属鼠李目，葡萄科草质藤本。学名叶崖爬藤，是浙江、福 建等地区传统习用青草药，W地下块根和果实的药用效果最好。在浙江民间用=叶青治疗 肿瘤较为久远，=叶青是地方性药材，极为珍稀，分布在浙江、江西、福建、安徽、广东、广西、 云南等地，=叶青具有散热、理气、活血、补脾、解毒、桂风、消炎的作用，民间用来治疗小儿 高热、慢性咽喉炎、扁桃体炎、肝炎、肺炎、胃炎、淋己结核及蛇咬伤等有奇效。现代药理研究 表明=叶青具有抗炎、镇痛及解热、抗肿瘤、抗病毒、调节免疫等作用。 目前，=叶青中的活性成分多采用传统的提取、分离方法得到，如中国专利 化200510050649.5中公开的用于预防和治疗肿瘤的中药S叶青，其采用的是由S叶青为原 料的水和/或醇提取物作活性成分。中国专利申请CN201110264176.4中公开的超临界二氧 化碳萃取=叶青总黄酬的方法，将=叶青药材粉碎60-80目，加入超临界二氧化碳萃取罐， 通入液态二氧化碳和夹带剂，在压力20-30MPa、溫度40-50°C条件下，萃取2-3小时，分离器 中减压解析萃取物，回收试剂，干燥得S叶青总黄酬。中国专利化200810120750.7公开了一 种从=叶青中高效提取黄酬类化合物的工艺，其工艺流程为:原料=叶青，风干，切碎，加入 水于超声波提取器中提取，将提取液浓缩至一定体积，再用活性炭进行吸附脱色。接着利用 空化混悬萃取分离装置，先用乙酸乙醋萃取，回收乙酸乙醋，将水溶液部分用氯仿萃取，回 收氯仿，将水溶液部分浓缩至无有机试剂味，通过大孔吸附树脂，依次用水和50 %乙醇洗 脱，收集50 %乙醇洗脱液，回收溶剂至干，即得到=叶青提取物。 =叶青中含有多糖、黄酬、多酪等活性成分和淀粉、蛋白质等营养成分，传统的提 取、分离其活性成分工艺中，淀粉、蛋白质、刺激性成分等成分会一道提取出，增加了分离中 的处理步骤，导致最终产品中的活性成分含量偏低、活性偏低。
技术实现思路
本专利技术提供了一种利用食药真菌发酵=叶青获得的组合物，该组合物中活性成分 的含量和活性高，具有良好的降血脂功能。 本专利技术还提供了一种利用食药真菌发酵=叶青获得的组合物的制备方法，利用多 种真菌发酵=叶青，有助于提高最终产品中活性成分的含量和活性，得到具有降血脂功能 的发酵组合物。 本专利技术发现，根据=叶青营养成分和有效成分特点，通过本专利技术特定的真菌发酵 及特定的工艺，并向培养基中添加白巧，能够有效地将=叶青中的营养成分和有效成分进 行生物降解和利用、有效地将=叶青中的刺激性成分去除和转化，使=叶青资源得到充分 的利用，有助于提高最终产品中活性成分的含量和活性。 本专利技术采用的技术方案是： -种利用食药真菌发酵=叶青获得的组合物的制备方法，包括步骤： (1)取活化后的己西磨茹菌种接种到液体MRS培养基中培养2天-8天，离屯、收集第 一菌体;将第一菌体悬浮在含胆盐的液体MRS培养基中于18°C-30°C解育化-2化，离屯、收集 第二菌体;将第二菌体经PBS缓冲液清洗干净后重新悬浮于液体MRS培养基中，震荡摇匀得 到第二菌体液，将第二菌体液接种到含胆盐的液体MRS培养基中于18°C-30°C再培养1天-10 天，得到己西磨茹液体种子液； (2)取活化后的链霉菌菌种接种到液体MRS培养基中培养化-3化，离屯、收集第S菌 体，将第S菌体悬浮在含化Cl的液体MRS培养基中于20°C -30°C解育0.化-1化，离屯、收集第 四菌体;将第四菌体经PBS缓冲液清洗干净后重新悬浮于液体MRS培养基中，震荡摇匀得到 第四菌体液，将第四菌体液接种到含化Cl的液体MRS培养基中于20°C -30°C培养化-3化，得 到链霉菌种子液； (3)将步骤（1)的己西磨茹液体种子液接入=叶青固态发酵培养基中，在18°C-30 °C培养2天-20天，然后置于交变磁场环境中再培养5天-30天，培养产物经真空冷冻干燥、粉 碎后得=叶青固态发酵产物;所述=叶青固态发酵培养基中含有=叶青和白巧； (4)将步骤(3)的=叶青固态发酵产物经亚临界水萃取，得到=叶青发酵亚临界萃 取物I，萃取后所剩的残渣经真空冷冻干燥后得到萃取剩余物n。 (5)将步骤(2)的链霉菌种子液接入链霉菌液体发酵培养基中，在2(TC-3(rC培养 1化-I20h，离屯、，得到链霉菌发酵产物m;所述链霉菌液体发酵培养基中含有萃取剩余物 n; 所述利用食药真菌发酵=叶青获得的组合物为=叶青发酵亚临界萃取物I和链霉 菌发酵产物m。 本专利技术进行S叶青固态发酵时，直接采用经含胆盐的液体MRS培养基两步解育处 理的己西磨茹液体种子液，并向培养基中添加白巧，能够有效地将=叶青中的营养成分和 有效成分进行生物降解和利用、有效地将=叶青中的刺激性成分去除和转化，有助于提高 最终产品中活性成分的含量和活性。步骤(4)和步骤(5)中，将=叶青固态发酵产物进行亚 临界水萃取，使萃取物中有效成分的活性得W最大程度保留、含量得W大幅提高;再将萃取 后的残渣作为链霉菌液体发酵主要的培养基，且采用经含化Cl的液体MRS培养基两步解育 处理的链霉菌种子液，通过一体化循环利用，使=叶青资源得到充分的利用，进一步提高了 最终产品中活性成分的含量和活性。为了达到更好的效果，优选： 步骤（1)中，所述含胆盐的液体MRS培养基中胆盐的质量百分含量为0.0 5 % -0.5%。 所述第一菌体与用于悬浮第一菌体的含胆盐的液体MRS培养基的体积比为1:1-3， 第二菌体与用于悬浮第二菌体的液体MRS培养基的体积比为1:1-3,第二菌体液的接种量为 5%。 步骤(2)中，所述含NaCl的液体MRS培养基中NaCl的质量百分含量为0.5 % -8 %。 所述第S菌体与用于悬浮第S菌体的含化Cl的液体MRS培养基的体积比为1:1-3， 第四菌体与用于悬浮第四菌体的液体MRS培养基的体积比为1:1-3,第四菌体液的接种量为 3%。 步骤(3)中，所述=叶青采用=叶青块根;所述白巧采用白巧块根。所述=叶青固 态发酵培养基每IL中含有6.5g-9.5g =叶青块根和0.5g-3.5g白巧块根。所述=叶青固态发 酵培养基由=叶青块根、白巧块根和发酵基础培养基组成，所述发酵基础培养基采用本领 域常规的发酵基础培养基，可采用市售产品，也可采用现有配制方法配制。 所述=叶青固态发酵培养基的制备方法，包括:将新鲜=叶青块根、白巧块根在自 来水下冲洗干净，惊干，切分为lcm-2cm长片状或小块;再将6.5g-9.5gS叶青块根和0.5g-3.5g白巧块根用发酵基础培养基定容至1L，混合均匀，pH值自然，得到=叶青固态发酵培养 基。 所述己西磨茹液体种子液的接入量为=叶青固态发酵培养基体积的5%-25%。 目前真菌固态发酵技术普遍存在发酵周期长、菌丝生长萌发慢、特征次生代谢代 谢产物含量低等问题。本专利技术发现将交变磁场处理技术应用于固态发酵中，通过特定培养 时期的适当处理等外界因素有效刺激，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：(1)取活化后的巴西蘑菇菌种接种到液体MRS培养基中培养2天‑8天，离心收集第一菌体；将第一菌体悬浮在含胆盐的液体MRS培养基中于18℃‑30℃孵育1h‑20h，离心收集第二菌体；将第二菌体经PBS缓冲液清洗干净后重新悬浮于液体MRS培养基中，震荡摇匀得到第二菌体液，将第二菌体液接种到含胆盐的液体MRS培养基中于18℃‑30℃再培养1天‑10天，得到巴西蘑菇液体种子液；(2)取活化后的链霉菌菌种接种到液体MRS培养基中培养3h‑30h，离心收集第三菌体，将第三菌体悬浮在含NaCl的液体MRS培养基中于20℃‑30℃孵育0.5h‑15h，离心收集第四菌体；将第四菌体经PBS缓冲液清洗干净后重新悬浮于液体MRS培养基中，震荡摇匀得到第四菌体液，将第四菌体液接种到含NaCl的液体MRS培养基中于20℃‑30℃培养3h‑30h，得到链霉菌种子液；(3)将步骤(1)的巴西蘑菇液体种子液接入三叶青固态发酵培养基中，在18℃‑30℃培养2天‑20天，然后置于交变磁场环境中再培养5天‑30天，培养产物经真空冷冻干燥、粉碎后得三叶青固态发酵产物；所述三叶青固态发酵培养基中含有三叶青和白芨；(4)将步骤(3)的三叶青固态发酵产物经亚临界水萃取，得到三叶青发酵亚临界萃取物Ⅰ，萃取后所剩的残渣经真空冷冻干燥后得到萃取剩余物Ⅱ；(5)将步骤(2)的链霉菌种子液接入链霉菌液体发酵培养基中，在20℃‑30℃培养10h‑120h，离心，得到链霉菌发酵产物Ⅲ，所述链霉菌液体发酵培养基中含有萃取剩余物Ⅱ；所述利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物为三叶青发酵亚临界萃取物Ⅰ和链霉菌发酵产物Ⅲ。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：程俊文，贺亮，程诗明，杨华，卢庭高，胡传久，魏海龙，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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