药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及在由神经原纤维缠结引起或与神经原纤维缠结相关的疾病和障碍的治疗中用于治疗和诊断用途的方法和组合物。具体而言，本发明专利技术涉及包含抗原肽的药物组合物，尤其是模拟tau蛋白的主要病理磷酸化表位的抗原磷酸肽的药物组合物，其在包括阿尔茨海默病的tau病的治疗中用于治疗和诊断用途。

【技术实现步骤摘要】
药物组合物本申请是申请人于2010年4月1日提交的题为“药物组合物”的中国专利申请201080024398.2的分案申请。本专利技术涉及在由神经原纤维缠结引起或与神经原纤维缠结相关的疾病和障碍的治疗中用于治疗和诊断用途的方法和组合物。具体而言，本专利技术涉及在包括阿尔茨海默病(AD)的tau病(tauopathy)的治疗中用于治疗和诊断用途的方法和组合物。神经原纤维缠结是AD中主要的神经病理学标志。它们通过超磷酸化tau蛋白及其构象异构体的聚集而发生。AD与许多神经变性tau病，尤其是与指定类型的额颞痴呆(FTD)共享此病理。Tau蛋白是积极与微管(MT)结合来促进它们的组装和稳定性的易溶、“天然未折叠”的蛋白质。MT对神经元的细胞骨架完整性具有重要意义──从而对神经元回路的正确形成和执行功能具有重要意义，因此对学习和记忆具有重要意义。如主要在体外和在非神经元细胞中所表明，tau与MT的结合受动态的磷酸化和去磷酸化控制。由于许多可能的磷酸化位点(>80)，基本上仍未在体内确定各位点的确切贡献和负责的激酶的同一性。在AD脑中，tau病理发展晚于淀粉状蛋白病理，并因此很可能响应于淀粉状蛋白病理，这构成淀粉状蛋白级联假说的精髓。这基于AD和唐氏综合症患者中的研究并由这些研究显示，并为具有组合的淀粉状蛋白病理和tau病理的转基因小鼠中的研究所证明(Lewis等,2001；Oddo等,2004；Ribe等,2005；Muyllaert等,2006；2008；Terwel等,2008)。两种病理在人AD患者中的精确计时以及将淀粉状蛋白病理与tau病理相联系的机制基本上仍未知，但已提出其涉及神经元信号传导途径的活化，该途径作用于作为主要“tau激酶”的GSK3和cdk5，或者通过GSK3和cdk5发挥作用(Muyllaert等,2006,2008的综述)。tau病不是AD中无害的副作用而是主要的病理执行者的假说基于彼此充分证实的可靠的遗传、病理和实验观察：■在由淀粉状蛋白前体(APP)或早老蛋白中的突变引起的早发型家族性AD病例中，专性病因是淀粉状蛋白累积，但与迟发型散发性AD病例中的情况一致，病理毫无例外地包含并发的tau病；■最近通过几项临床1期和2期研究例证，认知功能障碍和痴呆的严重度与tau病相关，而不与淀粉状蛋白病理相关，该研究包括淀粉状蛋白的PIB-PET成像，并鉴定了许多“假阳性”：具有高脑淀粉状蛋白负荷的认知正常个体；■在家族性FTD中，tau病由突变体tau引起，并在无淀粉状蛋白病理的情况下直接引起神经变性；■在实验小鼠模型中，tau蛋白的存在几乎完全缓解了由淀粉状蛋白病理引起的认知缺陷(Roberson等,2007)。组合的论据支持tau蛋白是AD和相关神经变性tau病中的认知死亡中的主要参与者的假说。突出涌现的AD治疗是通过使用特异性mAb的被动免疫治疗来清除推测具有神经毒性或突触毒性的淀粉状肽和它们的聚集物。预期此处提出的靶向tau病理的免疫治疗对抗已知或推测引起神经变性的病理tau蛋白构象异构体。已提出AD中的淀粉状蛋白病理和神经元内超磷酸化tau蛋白聚集物在导致从轻微认知损伤(MCI)至AD的严重痴呆的病理事件的认知和变性级联中协同作用。因此，定向tau的药疗法与定向淀粉状蛋白(或任意其他)的药疗法的组合将构成优选的，且基本上更有效的AD治疗。靶向tau蛋白的其他治疗途径少见，且主要包括：■认为其将tau的磷酸化增加至病理水平的激酶的抑制剂；■阻断超磷酸化tau蛋白的胞质聚集的化合物。这些途径具有特异性和功效的多种缺点，这是它们与修饰APP和淀粉状蛋白的代谢的尝试所共有的问题，这些全都强调继续寻找包括针对tau的免疫治疗的其他治疗选择的重要性。实际上，尚未致力于在体内确定——更不必说靶向——病理tau构象异构体。在Aβ42的II期临床试验中，似乎未很好地考虑也未较深入地分析缠结病理(Nicoll等,2003；Masliah等,2005)。另一方面，虽然tau聚集物存留，但在具有组合的AD样病理的临床前小鼠模型中靶向淀粉状蛋白的实验性免疫治疗也显示对tau病理的作用(Oddo等,2004)。已对通过免疫治疗接近胞内tau蛋白的可行性提出了一些质疑。Asuni和同事最近在tau病小鼠模型中的实验研究(Asuni等,2007)反击了这些质疑。他们通过用tau蛋白衍生的磷酸肽接种显示了缠结病理的减少和功能改善。这些数据支持之前的报道：在帕金森综合症(PD)模型中靶向α-突触核蛋白(Masliah等,2005)和在肌萎缩性侧索硬化(ALS)模型中靶向超氧化物歧化酶(Urushitiani等,2007)的免疫治疗。这两种疾病是通过尚未充分了解的机制导致神经变性的胞内蛋白质的实例。另一方面，在细菌中产生并从细菌分离的全长重组tau蛋白质似乎不适合作为疫苗，虽然所使用的佐剂，即完全弗氏佐剂和百日咳毒素可以促成该研究的阴性结果(Rosenmann等,2006)。存在对有效对抗病理蛋白质构象异构体的被动和/或主动免疫治疗的未得到满足的需要，已知——或推测——该病理蛋白质构象异构体引起神经变性障碍，如由例如神经元内的超磷酸化tau蛋白聚集物引起的AD中的淀粉状蛋白病理，该聚集物对AD而言与淀粉状蛋白一样典型。可以通过提供使用基于脂质体的疫苗(Nicolau等,2002；Muhs等,2007)和基于模拟tau蛋白的主要病理磷酸化表位的磷酸肽的mAb的被动和主动免疫方法来在本专利技术的范围内满足此未得到满足的需要。这些组合作用产生针对被认为在包括AD的tau病中负责突触毒性和神经毒性的tau蛋白上的线性和构象、简单和复杂的磷酸化表位的新的特异性mAb。本专利技术提供用于在生物中，但尤其是在动物，尤其是哺乳动物或人内引出高特异性，尤其是构象特异性免疫应答的新方法，及根据本专利技术的抗原肽和如本文中所述的抗原肽及其功能片段，包括含有该抗原肽或其片段的组合物，其高度有效，且能够预防或缓解tau病或与tau病相关的症状，tau病是与神经原纤维损伤的形成相关的一组疾病和障碍，神经原纤维损伤的形成是此组神经变性障碍中的主要脑病理。本专利技术还涉及用于预防或缓解tau病或与tau病相关的症状的抗体，尤其是单克隆抗体，包括其功能部分，及包含该抗体的药物组合物，该抗体通过根据本专利技术的抗原肽和如本文中所述的抗原肽或其功能片段及包含该抗原肽或其片段的组合物的施用产生自生物中的高特异性，尤其是构象特异性免疫应答，tau病是与神经原纤维损伤的形成相关的一组疾病和障碍，神经原纤维损伤的形成是此组神经变性障碍中的主要脑病理。此组神经变性障碍可以进一步划分为两个亚类。第一类中包含显示tau病理和淀粉状蛋白病理的共存的疾病和障碍，其包括但不限于阿尔茨海默病、克-雅综合症、拳击员痴呆、唐氏综合症、格-施-沙病、包涵体肌炎、阮病毒蛋白脑淀粉样血管病和外伤性脑损伤。第二类中包含无明显的淀粉状蛋白病理的疾病或障碍，其包括但不限于肌萎缩性侧索硬化/帕金森综合症-痴呆综合症、嗜银颗粒性痴呆、皮层基底节(corticobasal)变性、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、17号染色体连锁额颞痴呆伴帕金森综合症、哈-施病(Hallevorden-Spatzdisease)本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗原肽或其功能片段，所述肽可获自tau蛋白并通过附着于载体上和/或重构在载体中来修饰。

【技术特征摘要】
2009.04.03 EP 09157303.01.产生抗原构建体的方法，其包括i)获得肽或其功能片段，所述肽或其功能片段是模拟tau蛋白的病理磷酸化表位的磷酸肽或其功能片段，ii)通过与便于插入脂质体的脂双层的亲脂或疏水部分与抗原肽或其功能片段的每个末端共价连接修饰所述肽，所述亲脂或疏水部分是含有C12和C24之间的碳链的脂肪酸、甘油三酯或磷脂；且iii)ii)的修饰的肽重构在脂质体中，由此所述肽呈递在脂质体的表面上，其中所述抗原肽具有如下所示的氨基酸序列：a.SEQIDNO:2，其中对应于SEQIDNO:2的氨基酸残基18(P-Tyr18)的氨基酸残基是磷酸化的；或b.SEQIDNO:3，其中对应于SEQIDNO:3的氨基酸残基212(P-Thr212)和214(P-Ser214)的氨基酸残基中的至少一个是磷酸化的；或c.SEQIDNO:4，其中对应于SEQIDNO:4的氨基酸残基202(P-Ser202)和205(P-Thr205)的氨基酸残基中的至少一个是磷酸化的；或d.SEQIDNO:5，其中对应于SEQIDNO:5的氨基酸残基396(P-Ser396)和404(P-Ser404)的氨基酸残基中的至少一个是磷酸化的；或e.SEQIDNO:6，其中对应于SEQIDNO:6的氨基酸残基404(P-Ser404)和409(P-Ser409)的氨基酸残基中的至少一个是磷酸化的；或f.SEQIDNO:7，其中对应于SEQIDNO:7的氨基酸残基202(P-Ser202)、205(P-Thr205)、212(P-Thr212)和214(P-Ser214)的氨基酸残基中的至少一个是磷酸化的；或g.SEQIDNO:8，其中对应于SEQIDNO:8的氨基酸残基409(P-Ser409)的氨基酸残基是磷酸化的；或h.SEQIDNO:9，其中对应于SEQIDNO:9的氨基酸残基404(P-Ser404)的氨基酸残基是磷酸化的。2.权利要求1的方法，其中所述i)的抗原肽或其功能片段通过固相肽合成获得，其中将序列的C端氨基酸与不可溶支持物连接，然后连续添加序列中的其余氨基酸。3.权利要求1或2的方法，其中亲脂或疏水部分与抗原肽或其功能片段的每个末端的共价连接通过氨基酸残基介导，所述氨基酸残基在N端和C端末端延伸抗原肽或其功能片段的氨基酸序列。4.权利要求2或3的方法，其中包括：i)用标准Fmoc/tBu化学，通过固相肽合成逐步组装抗原肽，ii)去除末端氨基酸的正交保护基团，和iii)用棕榈酸酰化自由侧链基团。5.权利要求1-4中任一项的方法，其中i)的抗原肽或其功能片段通过重组核酸法获得，所述重组核酸法包括：i)产生编码权利要求1中定义的肽或其片段的核酸序列，ii)将核酸放置在表达盒的特定启动子控制下，iii)在宿主中表达肽或其功能片段，iv)分离所表达的肽或其片段，并根据需要v)复性肽或其片段。6.权利要求1-5中任一项的方法，其中通过与抗原肽的N端和C端末端共价结合至少两分子棕榈酸，来修饰所述抗原肽或其功能片段。7.权利要求6的方法，其中抗原肽或其功能片段偶联四分子棕榈酸。8.权利要求1-7中任一项的方法，其中脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·普法伊费尔，A·穆斯，F·范勒旺，M·皮尔格伦，
申请(专利权)人：AC免疫有限公司，鲁汶大学，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH