高效的胰酶药物组合物制造技术

本公开内容提供高效的药物组合物，所述药物组合物包含高活性胰酶。本发明专利技术还涉及生产HA‑胰酶及其组合物或剂型的方法，以及它们的使用方法。

Efficient pancreatin pharmaceutical compositions

The present disclosure provides an efficient pharmaceutical composition comprising a highly active pancreatin. The invention also relates to a method for producing HA enzyme and its compositions or formulations, and methods of using the same.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关交叉申请本申请根据35USC§119(e)要求2013年11月5日提交的美国临时专利申请系列号：61/900,092的权益，其公开内容通过引用为所有目的完整并入本文。领域本公开内容涉及高效的药物组合物，所述药物组合物包含高活性胰酶(highactivitypancreatin，HA-胰酶)酶。本公开内容还涉及生产HA-胰酶酶及其组合物或剂型的方法，及它们的使用方法。背景FDA估计超过200,000美国人患有胰腺外分泌不足(EPI)，胰腺外分泌不足(EPI)包括生理紊乱，其中个体由于缺少由他们的胰腺产生的消化酶而不能很好地消化食物。这种消化酶的丧失导致诸如营养消化不良和吸收不良的紊乱，这导致营养不良及与其相关的其他后续和不良的生理状况。这些紊乱在患有囊性纤维化(CF)和损伤胰腺的外分泌功能的其它状况的患者中常见，所述其它状况诸如胰腺癌、胰切除术和胰腺炎。如果放置不理，营养不良能够危及生命，尤其是在婴儿和CF患者中。紊乱能够导致生长受损、妥协的免疫反应及缩短预期寿命。能够施用消化酶，诸如胰脂肪酶酶和其它胰腺酶产物(pancreaticenzymeproduct，PEP)，从而至少部分补救EPI。施用的消化酶允许患者更有效地消化他们的食物。用于治疗EPI的胰脂肪酶酶主要是三类酶同其它酶及多种辅因子和辅酶的组合，所述三类酶是脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶，所述其它酶，除了其他以外，包括弹性蛋白酶、磷脂酶、和胆固醇酯酶。这些酶在胰腺中天然产生并对于脂肪、蛋白质和碳水化合物的消化十分重要。这些酶催化脂肪水解成甘油和脂肪酸，淀粉水解成糊精和糖，及蛋白质水解成氨基酸和衍生物质。然而，消化是涉及许多其它酶和底物的复杂过程，所述酶和底物有助于正确的消化功能和生产全范围的消化产物。胰脂肪酶酶可以从猪胰腺制备。其它胰脂肪酶来源包括牛胰腺和/或胰液。这些酶的天然哺乳动物来源产生具有与由人类胰腺分泌的相似的酶组成的产物。还能够使用其它非哺乳动物来源，例如，在U.S.6,051,220、U.S.2004/0057944、2001/0046493和/或WO2006044529中描述的那些。虽然包含胰脂肪酶的产物能够提供有效的治疗，问题也随之而来。每餐需要多个(4-9)相当大的胶囊(高药物负载)降低了患者对给药的坚持。还注意到高药物负载带来的潜在的微生物和病毒污染是不希望的。所有这些问题都与酶提取物的低纯度有关。纯度问题是已经使用多年的酶提取方法的结果，所述酶提取方法包括原液混合液或浆液的形成、用酒精的沉淀、离心和过滤。这样的提取方法生产的最终产物可以具有仅25％的蛋白质。例如，脂肪酶，这些胰脂肪酶提取物中一种在效力方面重要的酶，具有大约100USPIU/mg的活性。这与纯的猪脂肪酶活性有差距，纯的猪脂肪酶具有约25,000IU/mg的活性(诸如可获得自SigmaAldrich的猪脂肪酶)。使用这个近似值作为计算的基础，能够估算产物包含少于0.5％的活性脂肪酶。进一步讲，过量非活性物质存在的另外后果是，任何传染性污染可能不可避免地是这一团块(bulk)的一部分并也随混合物的期望的活性成分一同被摄取。非活性物质的过量还干扰旨在减少生物负担的技术，例如通过阻塞膜过滤器或过滤柱及遮蔽提取物不受电离辐射，所述电离辐射可用于降低其潜在的传染性负担。在一个情形中，一些纯的单个酶或三种单个酶的混合物已经进入用于治疗EPI的临床开发。这些是重组胆汁盐刺激的脂肪酶(BSSL)(EXINALDATM/)；包含在母乳中的重组人类脂肪酶重组犬胃脂肪酶MS1819；重组脂肪酶和liprotamase；由化学交联的重组细菌脂肪酶组成的混合物；及提取自微生物来源的蛋白酶和淀粉酶。所有这些实验治疗方法目前都不能证明与来自猪胰脏的商业酶提取物诸如或相当的治疗效率水平。相似的，FDA咨询委员会会议在2011年1月12日投票反对批准liprotamase，这是由于其与之前用胰脂肪酶提取产物获得的相比在脂肪吸收系数(CFA)增加方面更低的效率。对相比现有的包含胰脂肪酶的产品更浓缩和纯净，还要保持其对于治疗EPI的功效的产品存在明显需要，因为这将允许生产更好、更便利且潜在地更安全的产品。有一些文献报道描述使用胰脂肪酶作为用于分离蛋白酶、脂肪酶或淀粉酶的起始材料。然而，没有在PEP中发现的胰脂肪酶类型或相似产品被纯化以用于制造用于治疗用途的改良产品的报道。在每个情形中，之前的努力是要相对于其它级分纯化特定酶或酶级分或移除某些成分而不实质性地增加总体的酶活性。在所有的情形中，还没有对生产用作治疗剂的HA-胰酶产品的指导。用于蛋白质纯化的现有技术方法目标是以提取并分离简单的蛋白质富集级分，如通过胰脂肪酶举例的，或目标是以分离单个蛋白质或单个的蛋白质类，如脂肪酶或蛋白酶。例如，Hwang等(Ind.Eng.Chem.Res.2007,46,4289)，通过引用并入本文，公开了胰腺酶溶解度和溶剂极性之间的关系，并报道了脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶从胰腺蛋白的选择性沉淀。Hwang等展示了，当使用具有降低的极性的溶剂时胰酶沉淀被提高，且当溶剂具有28(MPa)0.5以下的Hildebrand溶解度参数时被最大化。淀粉酶和蛋白酶的选择性沉淀随着溶剂极性降低到34(MPa)0.5以下而增加，而脂肪酶的选择性沉淀与溶液极性无关，且混合物中存在的脂肪酶的不多于65％被回收。从这些结果，不存在一起纯化胰腺酶混合物以获得HA-胰酶的动机，且对于本领域技术人员不存在在纯化期间维持不同类酶的混合物的动机。胰脂肪酶已经被在治疗性产品中使用远超过60年，没有纯化胰脂肪酶的尝试的事实是这种操作的益处还没有被设想或意识到的强烈指示。所有改善胰脂肪酶产品的尝试都聚焦在来自非胰来源的单个酶上，进一步强调了使用胰脂肪酶作为用于改善的产品的制造的更纯的和/或更浓缩的酶的来源之前没有被意识到。因胰脂肪酶目前被用于药学和清洁应用，没有动机或原因去纯化胰脂肪酶，所述纯化以生产以数倍更高的酶浓度的具有酶活性的实质上相似的定性和定量属性的产品为目的。事实上，目前的产品充分地满足它们的角色并已经如此保持超过60年没有实质上的改变，且似乎在本领域没有对本文描述的显著改进的产品或相关制备方法的描述。包含用于治疗EPI的纯酶的这些产品都是基于来自重组技术或微生物来源的单个酶或，在一个情形中，三种纯的并化学修饰的单个酶的混合物。没有纯化来自粗胰腺提取物的包含蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的混合物用于EPI的治疗、清洁和组织消化的努力。相似的，没有单独纯化并随后重组来自胰来源的酶的动机或报道。这样的方法与实现分离的酶或酶类的目的背道而驰。概述本公开内容涉及HA-胰酶及其高效的药物组合物或剂型。本公开内容还涉及生产HA-胰酶的高产量方法及使用该产品的方法。附图简述图1示出胰酶提取物的UV吸收光谱。图2示出产生自在实施例15中描述的胰酶的硫酸铵沉淀的上清液(A)和再溶解的沉淀(B)的UV吸收光谱。图3示出实施例15的未洗涤和洗涤的硫酸铵沉淀的UV吸收光谱。图4示出实施例15的硫酸铵级分的洗脱曲线。级分4-8表现出在280nm的吸收，指示了蛋白质的存在。图5示出实施例15的级分6和10的UV吸收光谱。图6示出实施例17的硫酸铵级分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高活性胰酶(HA‑胰酶)，其中所述胰酶具有至少约120USP IU/mg的脂肪酶比活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.05 US 61/900,0921.一种高活性胰酶(HA-胰酶)，其中所述胰酶具有至少约120USPIU/mg的脂肪酶比活性。2.根据权利要求1所述的胰酶，所述胰酶具有至少约150USPIU/mg的脂肪酶比活性。3.根据权利要求1所述的胰酶，所述胰酶具有至少约200USPIU/mg的脂肪酶比活性。4.根据权利要求1所述的胰酶，所述胰酶具有至少约500USPIU/mg的脂肪酶比活性。5.一种高效的药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1、2、3或4所述的HA-胰酶。6.根据权利要求1、2、3、4或5所述的组合物，其中所述胰酶是源自猪的。7.根据权利要求5或6所述的组合物，其中所述组合物包含每剂量单位至少约9,000、约20,000、约40,000、约60,000、约80,000或约100,000USPIU脂肪酶。8.根据权利要求7所述的组合物，所述组合物包含多个HA胰酶的包衣的颗粒，所述包衣的颗粒包含用至少一种肠溶的聚合物包衣的核心。9.根据权利要求5、6、7或8所述的组合物，所述组合物为粉末、丸剂、微球、胶囊、袋剂、片剂、液体悬浮剂或液体溶液的形式。10.一种用于制备HA-胰酶的方法，所述HA-胰酶具有至少约120USPIU/mg的脂肪酶比活性，所述方法包括用具有包含在28和45(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数的溶剂处理胰酶，其中所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物或至少一种有机溶剂和水性溶剂的混合物，且所述方法的温度低于室温。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在28和38(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在28和34(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数。13.根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在34和38(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数。14.根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在34和45(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数。15.根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在38和45(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数。16.根据权利要求10、11、12、13、14或15所述的方法，所述方法用于制备具有至少约150USPIU/mg的脂肪酶比活性的胰酶。17.根据权利要求10、11、12、13、14或15所述的方法，所述方法用于制备具有至少约200USPIU/mg的脂肪酶比活性的胰酶。18.根据权利要求10、11、12、13、14或15所述的方法，所述方法用于制备具有至少约250USPIU/mg的脂肪酶比活性的胰酶。19.根据权利要求10所述的方法，所述方法包括以下步骤：a1)在溶剂中悬浮胰酶并沉淀不可溶部分，所述溶剂具有包含在34和45(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数；a2)将步骤a1的所述不可溶部分从可溶部分分离；a3)干燥步骤a2的所述不可溶部分。20.权利要求19所述的方法，其中步骤1a)在约4℃的温度进行约60分钟。21.根据权利要求10、19或20所述的方法，所述方法包括以下步骤：a1.1)在搅拌下在水性溶剂中悬浮胰酶；a1.2)通过向步骤a1.1的悬浮液添加至少一种有机溶剂或其混合物来沉淀不可溶部分；a2)将步骤a1.2的所述不可溶部分从可溶部分分离；a3)干燥步骤a2的所述不可溶部分。22.根据权利要求21所述的方法，所述方法包括以下步骤：a1.1)在搅拌下在水性溶剂中悬浮胰酶；a1.2)将步骤a1.1的可溶部分从不可溶部分分离；a1.3)通过向步骤a1.2的所述可溶部分添加至少一种有机溶剂或其混合物来沉淀不可溶部分；a2)将步骤a1.3的所述不可溶部分从可溶部分分离；a3)干燥步骤a2的所述不可溶部分。23.根据权利要求22所述的方法，其中步骤a1.3进行约30分钟，且方法温度是4℃。24.根据权利要求19所述的方法，所述方法包括以下步骤：a1.1)在溶剂中悬浮胰酶并沉淀不可溶部分，所述溶剂具有包含在38和45(MPa)0.5之间的Hildebrand溶解度参数；a1.2)将步骤a1.1的可溶部分从所述不可溶部分分离；a1.3)通过向步骤a1.2的可溶部分添加至少一种有机溶剂或其混合物以获得具有包含在28和36之间的Hildebrand溶解度参数的混合物来沉淀不可溶部分；a2)将步骤a1.3的不可溶部分从可溶部分分离；a3.1)干燥步骤a1.2的不可溶部分；a3.2)干燥步骤a2的不可溶部分；a4)将步骤a3.1的不可溶部分与步骤a3.2的不可溶部分混合在一起。25.根据权利要求21、22、23或24所述的方法，其中步骤a1.1的胰酶是以包含在0.05和0.3g/ml之间的量。26.根据权利要求21、22或23所述的方法，其中步骤a.1的水性溶剂和步骤a1.2或步骤a1.3的有机溶剂所包含的溶剂具有38(MPa)0.5的Hildebrand溶解度参数。27.根据权利要求24或25所述的方法，其中步骤a1.1的溶剂具有38(MPa)0.5的Hildebrand溶解度参数且步骤a1.3的溶剂具有36(MPa)0.5的Hildebrand溶解度参数。28.根据权利要求10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27所述的方法，其中所述有机溶剂选自以下的组：正戊烷、正己烷、正庚烷、乙醚、环己烷、四氯化碳、乙酸乙酯、四氢呋喃、氯仿、三氯乙烯、丙酮、二甲基甲酰胺、正丙醇、异丙醇、乙醇、二甲亚砜丁醇、甲醇、乙腈、二噁烷和methylenchloride。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述有机溶剂选自丙酮、异丙醇和乙醇的组。30.根据权利要求10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27所述的方法，其中所述水性溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·佩雷特，罗伯特·贝克尔，路易吉·波尔特里，路易吉·吉多斯，保拉·阿尔祖菲，温琴扎·皮隆蒂，迈克尔·托塔，威廉·沃德，
申请(专利权)人：阿勒根制药国际有限公司，
类型：发明
国别省市：爱尔兰;IE