天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用制造技术

本发明专利技术公开了天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用。本发明专利技术首次发现天冬氨酸能作为抗微生物药物的增效剂，特别是作为硫酸新霉素的协同增效剂杀灭嗜水气单胞菌。体内外实验表明，天冬氨酸与硫酸新霉素的联合使用能极大提高对嗜水气单胞菌的消灭或清除效果，注射或口服这两种组合物能提高鱼体嗜水气单胞菌感染的治疗效果，大幅增加鱼体存活率。因此，本发明专利技术提供的天冬氨酸可用作硫酸新霉素的增效剂，与硫酸新霉素联合应用制备复方抗菌药剂，既可提高抗菌药物药效，又可大幅减少药物的使用量，进而减少药物的毒副作用和药物残留。

Application of aspartic acid as neomycin sulfate synergist

The invention discloses the application of aspartic acid as a synergist for neomycin sulfate. The invention is the first to discover that aspartic acid can be used as a synergist for antimicrobial agents, especially as a synergistic synergist of neomycin sulfate to kill Aeromonas hydrophila. In vivo experiments showed that, the combined use of aspartic acid and neomycin sulfate can greatly improve the Aeromonas hydrophila to destroy or remove the effect of the two kinds of injection or oral composition can improve the Aeromonas hydrophila infection treatment effect of fish, the fish survival rate increased significantly. Therefore, aspartic acid can be used as a synergist of neomycin sulfate provided by the invention, combined with neomycin sulfate preparation of compound antibacterial agent, can improve the drug efficacy, and can significantly reduce the amount of drug use, thereby reducing the side effects and drug residues.

【技术实现步骤摘要】
天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用
本专利技术属于医药
，具体涉及天冬氨酸作为抗菌药物硫酸新霉素增效剂的应用。
技术介绍
嗜水气单胞菌在河流、湖泊、池塘、食物、动物及人体等自然环境中广泛存在。嗜水气单胞菌属于条件性致病菌，可引起多种水生动物和陆生动物患病，是一种典型的人-畜-鱼共患病病原菌，当环境条件恶劣，机体抵抗力下降可导致鱼类、两栖类、爬行类等冷血动物和哺乳动物发病，引发水生动物细菌性出血病、体表溃疡症以及哺乳动物腹泻等，是鱼类、爬行类和人类的一种致命传染源。为了预防和治疗病原菌引起的疾病，多采用抗生素的方法，而长期滥用抗生素导致抗菌药物出现多重耐药、交叉耐药现象严重，给水产动物疾病防治带来极大的困难。因此，针对当前水产养殖业中嗜水气单胞菌感染引起的问题，开发一种防治水产养殖动物嗜水气单胞菌的药物防治策略，以提高防治效果、降低嗜水气单胞菌耐药性和避免抗菌药物的残留问题，促进水产养殖业的健康和可持续发展。硫酸新霉素为氨基糖苷类抗生素，可抑制细菌蛋白质合成，对葡萄球菌属、需氧革兰氏阴性杆菌、部分结核分支杆菌有较好的抗菌活性，常用于畜禽、养殖鱼类细菌性病害的防治。由于该药物具有较强的耳毒性和肾毒性，残留在食品中的硫酸新霉素是潜在的安全隐患。因此，在具有相同杀菌效果的情况下，大幅降低或控制该药物在水产养殖中的使用量，对于水产品安全和生态环境保护具有重要的意义。天冬氨酸又称天门冬氨酸，是一种α-氨基酸，分子式为C4H7NO4，分子量为133.1，具有旋光性，是构成蛋白质的20种氨基酸之一。天冬氨酸普遍存在于生物合成作用中，是生物体内赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸等氨基酸及嘌呤、嘧啶碱基的合成前体。现有技术中已公开的天冬氨酸的作用有：L-天冬氨酸广泛用作氨解毒剂、肝机能促进剂、疲劳恢复剂等医药用品和各种清凉饮料的添加剂；DL-天冬氨酸可用于合成DL-天冬氨酸钾镁盐，用于治疗心律失常、心动过速、心力衰竭、心肌梗塞、心绞痛、肝炎和肝硬化等疾病；DL-天冬氨酸还可作为合成多肽的原料。综上所述，天冬氨酸的食品、化工、医药等领域具有较大的市场开发潜力，但其作为抗菌药物增效剂的研究尚未见报道。在水产养殖中，天冬氨酸是一种非必需氨基酸，虽然鱼体可以自行合成天冬氨酸，但天冬氨酸的缺乏会导致体内绝大多数蛋白质都无法正常形成，同时造成机体营养不良、代谢紊乱等症状。有研究表明，天冬氨酸对牙鲷等鱼类有诱食效果。因此，天冬氨酸作为一种常见的氨基酸代谢物，当其用作药物或饲料添加剂时，应当与药物或饲料具有同等的安全性。本专利技术提供的一种联合用药方式，用于防治水产养殖中容易出现的病害，既可提高抗菌药物药效，又可大幅减少药物的使用量，进而减少药物的毒副作用和药物残留，完全符合无公害水产业、生产绿色水产品的疾病防治准则，尤其适用于当前水产业集约化、规模化生产的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用，天冬氨酸与硫酸新霉素联合使用能够大幅增强硫酸新霉素的杀菌效果，提高鱼体感染细菌后的存活率，为硫酸新霉素的使用提供了一种新方法，天冬氨酸与硫酸新霉素的联合使用能够大幅度降低抗生素的使用量，同时提高鱼体对细菌感染的防治水平。本专利技术为实现上述目的采用如下技术方案：天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用，其特征在于：通过天冬氨酸与硫酸新霉素的联合使用以增强抗菌药物硫酸新霉素的药效，进而减少硫酸新霉素的用药量。进一步优选，所述的天冬氨酸与硫酸新霉素的重量比为0.26-332.8:1。进一步优选，所述的天冬氨酸作为增效剂用于增加硫酸新霉素在体外杀灭细菌的能力。进一步优选，所述的天冬氨酸作为增效剂用于增加硫酸新霉素在体内清除细菌的能力。进一步优选，所述的天冬氨酸作为增效剂用于与硫酸新霉素联合使用以提高鱼体感染细菌的存活率。进一步优选，所述的细菌为嗜水气单胞菌。本专利技术经体外、体内实验证实，天冬氨酸能够增强硫酸新霉素的杀菌效果；其联合运用能提高鱼体嗜水气单胞菌感染的治疗效果，大幅增加鱼体存活率。在水产养殖业病原菌耐药性日趋普遍、耐药程度日趋严重的情况下，大幅降低抗菌药物硫酸新霉素的使用量，同时提高抗菌药物硫酸新霉素的防治效果，有助于无公害水产养殖技术的推广。附图说明图1是10mM天冬氨酸添加前后不同硫酸新霉素作用后的细菌存活率图；图2是不同剂量天冬氨酸联合硫酸新霉素作用后的细菌存活率图；图3是10mM天冬氨酸添加前后硫酸新霉素杀菌的时间依赖关系图；图4是天冬氨酸联合硫酸新霉素作用后淇河鲫肝脏、脾和肾脏中细菌含量图；图5是细菌攻毒后注射天冬氨酸或/和硫酸新霉素对鱼体的保护作用对比图；图6是细菌攻毒后口服天冬氨酸或/和硫酸新霉素对鱼体的保护作用对比图。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本专利技术上述内容实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1天冬氨酸增加硫酸新霉素在体外杀灭细菌的能力1、细菌培养与生存率体外实验方法（1）挑取嗜水气单胞菌单菌落接种于100mLLB培养基中，28℃振荡培养过夜；（2）取适量的菌液于12000rpm、5min离心收集菌体，用质量浓度为0.85%的生理盐水洗涤菌体2次，悬浮于含10mM乙酸钠的M9培养基中，调OD600值至0.6；（3）加入相应的代谢物和适量的抗生素于试管中，加M9培养基至5mL体系，28℃培养6h；（4）在特定的时间点，取100uL样品，采用系列稀释法，取10uL进行点板计数，计算细菌cfu/mL（菌落形成单位/毫升）。不经过抗生素和代谢物处理的样品作为起始细菌数，细菌菌落数在20-200的数据可用于统计分析。细菌存活率（percentsurvival）是抗生素和代谢物处理后的细菌cfu与起始细菌cfu的百分比。2、天冬氨酸在提高硫酸新霉素杀菌效果方面具有抗生素浓度依赖效应10mM天冬氨酸能显著提高硫酸新霉素的杀菌作用，随着抗生素浓度的增加其增效作用也越来越明显。天冬氨酸提高硫酸新霉素对嗜水气单胞菌的杀菌倍数，分别增加1.8、22、157.5、428、813.8和1976倍（图1）。从图中虚线标识可以看出，单独使用40μg/mL硫酸新霉素，与天冬氨酸联合8μg/mL硫酸新霉素的杀菌效果相似，即使用天冬氨酸后，可降低5倍硫酸新霉素使用量。3、天冬氨酸在提高硫酸新霉素杀菌效果方面具有物质剂量依赖效应选择细菌存活率在50%左右的抗生素浓度，进一步探讨天冬氨酸物质梯度的作用效果。结果发现，0.078mM的天冬氨酸也明显提高硫酸新霉素的杀菌作用。对嗜水气单胞菌来说，在8μg/mL硫酸新霉素条件下，0.078-10mM天冬氨酸的增效作用达5.8、7.7、9.5、12.2、52.7、77.3、213.6和651.1倍（图2）。4、天冬氨酸在提高硫酸新霉素杀菌效果方面具有作用时间依赖效应进一步研究了天冬氨酸协同硫酸新霉素杀菌作用与时间的关系。对于嗜水气单胞菌，采用10mM天冬氨酸分别与8μg/mL硫酸新霉素协同杀菌；对于嗜水气单胞菌，10mM天冬氨酸分别与16μg/mL硫酸新霉素协同杀菌。在0、2、4、6、8、10h取样，并点板计数，结果可以看到，随着时间延长，同时添加硫酸新霉素和天冬氨酸的试验组生存率下降越来越显本文档来自技高网...

【技术保护点】
天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用。

【技术特征摘要】
1.天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用。2.根据权利要求1所述的天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用，其特征在于：通过天冬氨酸与硫酸新霉素的联合使用以增强抗菌药物硫酸新霉素的药效，进而减少硫酸新霉素的用药量。3.根据权利要求1或2所述的天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用，其特征在于：所述的天冬氨酸与硫酸新霉素的重量比为0.26-332.8:1。4.根据权利要求1所述的天冬氨酸作为硫酸新霉素增效剂的应用，其特征在于：所述的天冬氨酸作为增效...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔祥会，赵贤亮，李莉，陈鹤，郭胜喜，杨潇，巴新霞，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：河南,41