一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法技术

本发明专利技术提供一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，所述检测方法为HPLC-ELSD法，所述方法包括下述步骤：（1）样品溶液的制备；（2）HPLC-ELSD法同时检测步骤（1）中样品溶液中脂肪酸和维生素E的含量，HPLC的条件为：色谱柱为：C18；流动相是：甲醇和稀酸水的混合或乙腈和稀酸水的混合；色谱柱柱温为20℃～50℃等；ELSD检测器的检测条件为：漂移管温度为50～80℃；气流量：2.0～3.5L/min，采用分流模式，分流比为：1:4～2:3。该方法首次提出了采用HPLC-ELSD法测定山桐子中脂肪酸和维生素E的含量，所得结果稳定性好，精密度高，操作简便。

【技术实现步骤摘要】
一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法
本专利技术涉及山桐子中特征成分的检测
，具体的涉及一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法。
技术介绍
山桐子(IdesiapolycarpaMaxim)是大风子科山桐子属落叶乔木，该属在全球仅有1种，主产于日本、朝鲜、俄罗斯远东地区与中国，在我国分布于秦岭、淮河以南各省．山桐子属于木本油料树种，其果实含油量较高，山桐子油为半于性油，经精炼后是优良的食用油，且富含油酸、亚油酸、亚麻酸、棕榈酸等不饱和油料成分，食用不饱和脂肪酸有降低血脂、预防动脉粥状硬化、抗心律失常、保证胎儿大脑发育等作用．山桐子油中还含有可食用的维生素E，具有抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老、降低脂质过氧化、预防心脑血管疾病等功效。山桐子中脂肪酸和维生素E的检测对评价山桐子重量具有重要作用，但目前对山桐子研究主要集中在山桐子繁殖研究、栽培技术及山桐子油提取、利用方面，而关于山桐子油中主要特征成分检测报道较少，有关报道均使用GC法或者GC-MS法对山桐子中脂肪酸进行分析，如：陈福民，山桐子脂肪酸提取及成分分析，《江苏科技信息》，2013(16):74-75；吴志文等，不同种源山桐子种子含油率和脂肪酸GC/MS分析，《经济林研究》2011年02期等，GC或GC/MS法检测之前要进行比较复杂的衍生化，操作中可能会存在衍生不完全，导致检测结果不准确。这是目前采用GC或GC/MS法分析原材料中脂肪酸普遍存在的问题，一篇授权公告号为CN103091406B的专利中公开了油菜花粉中脂肪酸类化合物和/或甾醇类化合物的检测方法，该专利采用HPLC-ELSD法检测油菜花粉中的脂肪酸，检测之间无需衍生化，为油菜花粉中脂肪酸检测提供了更简单、准确的检测手段，但是不同的原料药中需要检测的特征成分不同，检测方法也不相同，如山桐子中的检测的特征成为脂肪酸和维生素E，而且经实践证明，上述油菜花粉中的脂肪酸检测方法并不能有效，准确的检测出山桐子中脂肪酸，特别是维生素E的检测。因此需要一种能解决现有GC或GC/MS法检测山桐子中脂肪酸存在的问题，又能准确，有效的检测出山桐子中脂肪酸和维生素E的方法。
技术实现思路
本专利技术旨在解决现有技术中，采用GC或GC/MS法检测山桐子中脂肪酸存在的：检测前要进行比较复杂的衍生化、衍生不完全导致检测结果不准确的问题，提供一种适用于山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，采用HPLC-ELSD法进行检测，通过严格控制进样溶液的提取、HPLC分离过程及ELSD检测过程，同时检测出山桐子中维生素E和脂肪酸，不需进行柱前衍生，避免了繁琐的前处理，所得结果稳定性好，精密度高，操作简便，实现了通过HPLC-ELSD法来评价山桐子的质量优劣。为解决上述技术问题，本专利技术通过以下技术方案实现。一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，其特征在于：所述检测方法为HPLC-ELSD法，所述方法包括下述步骤：（1）样品溶液的制备：将山桐子提物加入3～15倍甲醇超声溶解，冷却至10～30℃后离心取上清液为样品溶液；（2）HPLC-ELSD法同时检测步骤（1）中样品溶液中脂肪酸和维生素E的含量，所述HPLC-ELSD法中HPLC的条件为：色谱柱为：C18；流动相是：甲醇和稀酸水的混合或乙腈和稀酸水的混合；流动相流速：0.5-1.5ml/min；色谱柱柱温为20℃～50℃；样品溶液进样量：5-20ul；所述HPLC-ELSD法中ELSD检测器的检测条件为：漂移管温度：50～80℃；气流量：2.0～3.5L/min；采用分流模式，分流比为：1:4～2:3。在步骤（1）中，所述山桐子提取物采用索氏提取法、超声提取法中的任意一种制备。在步骤（2）中所述脂肪酸为α-亚麻酸、亚油酸、油酸、棕榈酸、棕榈烯酸和硬脂酸。在步骤（2）中，在步骤（2）中，所述甲醇和稀酸水的混合或乙腈与稀酸水的混合中，所述甲醇与稀酸水或乙腈与稀酸水在的体积比为80～100：0～20的体积比混合，所述稀酸水的体积浓度为0.01～0.5%。所述甲醇与稀酸水在0～32min时的体积比为80～95:5～20，在33～44min时的体积比为96～100:0～4，所述乙腈与稀酸水在0～39min时的体积比为80～95:5～20，在40～50min时的体积比为96～100：0～4。所述稀酸可采用稀酸为三氟乙酸、甲酸和乙酸中的任意一种。本专利技术进一步优化了ELSD检测过程，在步骤（2）中，所述漂移管温度为65℃，所述气流量为3.0L/min，所述分流比为1:2。所述索氏提取方法如下：取山桐子粉末适量，加入3～20倍有机溶剂，在50～100℃回流至浸出液呈无色，得提取液，提取液浓缩至干得山桐子提取物。所述超声提取方法如下：取山桐子粉末适量，加入3～20倍甲醇，超声15～60min，置于暗处继续浸泡2～8h得提取液，提取液浓缩至干得山桐子提取物。索氏提取和超声提取的机溶剂均可采用甲醇、正己烷、乙醇和丙酮中的任意一种。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点。本专利技术首次提出了采用HPLC-ELSD法测定山桐子中脂肪酸和维生素E的含量，为山桐子质量的评价提供了新的手段，为比较不同产地或采收时期山桐子的质量评价提供依据。避免了采用GC或GC/MS法检测山桐子中脂肪酸存在的检测前要进行比较复杂的衍生化、衍生不完全导致检测结果不准确的问题。同时本专利技术通过长期的实践研究，确定了能同时检测山桐子中脂肪酸和维生素E的检测步骤中样品溶液的制备方法、HPLC条件及ELSD条件，设计一个方案就能检测出脂肪酸和维生素E，避免了采用不同方法检测脂肪酸和维生素E出现的操作繁琐，检测时间长，浪费原料等问题，且本专利技术方法所得结果稳定性好，精密度高，操作简便。本专利技术首次提出了采用HPLC-ELSD法测定山桐子中脂肪酸和维生素E的含量，为山桐子质量的评价提供了新的手段，为比较不同产地或采收时期山桐子的质量评价提供依据。附图说明图1为本专利技术实施例2、实施例3色谱图及对照品色谱图；图2为本专利技术实施例4色谱图。横坐标为时间(min)、纵坐标为振幅（mVolts）；1α-亚麻酸、2棕榈烯酸、3亚油酸、4棕榈酸、5硬脂酸、6维生素E、7实施例2色谱图、8实施例3色谱图、9油酸。具体实施方式下面结合具体实施方式说明本专利技术。本专利技术中对照品来源及配制方法如下表1表1上述对配制好的各照品过0.45um微孔滤膜后进样或离心取上清液进样，进样量为20uL，得图谱如图1所示。实施例1一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，所述检测方法为HPLC-ELSD法，所述方法包括下述步骤：（1）样品溶液的制备：取山桐子提取物10g，加入30mL甲醇超声溶解，冷却至20℃后离心，取上清液为样品溶液；本实施例山桐子提取物采用索氏提取法提取，方法如下：取适量山桐子粉末，用滤纸包好，置于索氏提取器中，加10倍体积量的正己烷，70℃回流至浸出液呈无色，将提取液浓缩至干得山桐子提取物。（2）HPLC-ELSD法同时检测步骤（1）中样品溶液中脂肪酸和维生素E的含量，检测仪器：Agilent(1260)所述HPLC-ELSD法中HPLC的条件为：色谱柱为：C18；流动相是：甲醇（MEOH）和稀酸水的混合；稀酸水为体积浓度为0.1%三氟乙酸的稀酸水（0.1%TFA），洗脱过程按下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，其特征在于：所述检测方法为HPLC‑ELSD法，所述方法包括下述步骤：（1）样品溶液的制备：将山桐子提物加入3～15倍有甲醇超声溶解，冷却至10～30℃后离心取上清液为样品溶液；（2）HPLC‑ELSD法同时检测步骤（1）中样品溶液中脂肪酸和维生素E的含量，所述HPLC‑ELSD法中HPLC的条件为：色谱柱为：C18；流动相是：甲醇和稀酸水的混合或乙腈和稀酸水的混合；流动相流速：0.5‑1.5ml/min；色谱柱柱温为20℃～50℃；进样量：5‑20ul；所述HPLC‑ELSD法中ELSD检测器的检测条件为：漂移管温度为50～80℃；气流量：2.0～3.5L/min，采用分流模式，分流比为：1:4～2:3。

【技术特征摘要】
1.一种山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，其特征在于：所述检测方法为HPLC-ELSD法，所述方法包括下述步骤：（1）样品溶液的制备：将山桐子提物加入3～15倍有甲醇超声溶解，冷却至10～30℃后离心取上清液为样品溶液；（2）HPLC-ELSD法同时检测步骤（1）中样品溶液中脂肪酸和维生素E的含量，所述HPLC-ELSD法中HPLC的条件为：色谱柱为：C18；流动相是：甲醇和稀酸水的混合或乙腈和稀酸水的混合；流动相流速：0.5-1.5ml/min；色谱柱柱温为20℃～50℃；进样量：5-20ul；所述HPLC-ELSD法中ELSD检测器的检测条件为：漂移管温度为50～80℃；气流量：2.0～3.5L/min，采用分流模式，分流比为：1:4～2:3；在步骤（2）中所述脂肪酸为α-亚麻酸、亚油酸、油酸、棕榈酸、棕榈烯酸和硬脂酸。2.根据权利要求1所述的山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，其特征在于：在步骤（1）中，所述山桐子提取物采用索氏提取法、超声提取法中的任意一种制备。3.根据权利要求1所述的山桐子中脂肪酸和维生素E的检测方法，其特征在于：在步骤（2）中，所述甲醇和稀酸水的混合或乙腈与稀酸水的混合中，所述甲醇与稀酸水或乙腈与稀酸水在的体积比为80～100：20～0的体积比混合，所述稀酸水的体积浓度为0.01～0.5%。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖斌，陈冲，朱甜甜，夏柯，刘丁，
申请(专利权)人：成都普思生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51