一种鸡胚活性肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种鸡胚活性肽及其制备方法与应用。本发明专利技术提供的鸡胚活性肽，包括鸡胚活性肽和游离氨基酸；其中，鸡胚活性肽的分子量小于10kDa。本发明专利技术提供的鸡胚活性肽能够保护人成纤维细胞的活性，与不添加本发明专利技术鸡胚活性肽的对照组相比，添加鸡胚活性肽的实验组人成纤维细胞的活性得到保护。与不进行紫外照射的空白组相比，实验组的人成纤维细胞活性与之持平甚至略有升高。本发明专利技术提供的鸡胚活性肽的制备方法操作简便，通过匀浆、冻融和超声破碎，最大程度上的破碎了细胞膜，使胞内的活性肽得到良好的溶出，再经离心和超滤等生物技术提取工艺，从而提高了提取效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及生物
，尤其设及一种鸡胚活性肤及其制备方法与应用。
技术介绍
氨基酸是含有氨基和簇基的一类有机化合物的通称。其中，甘氨酸（GU0具有提 高肌肉活力，对人体有补益等营养作用；亮氨酸（LEU)有促进皮肤、伤口愈合的作用；蛋氨 酸（MET)具有去脂的功能，能促进皮肤蛋白质的合成；酪氨酸（TYR)有治疗神经性炎症效 果，参与修复皮肤的炎症。与色素形成有关系，缺乏时会利白化症；组氨酸（HI巧对过敏性 皮肤有修复效果；苏氨酸（THR)人体必需，缺乏时会使人消瘦；丙氨酸（ALA)能促进血液中 酒精的代谢（分解）作用增强肝功能；异亮氨酸（IL巧能维持机体平衡，有促进食欲的增 加的作用；色氨酸（TR巧促进血红蛋白的合成，防治皮肤病，促进细胞生长；脫氨酸（CY巧 有修复皮肤的损伤，对脱发有疗效；赖氨酸（LYB)参与结缔组织、微血管上皮细胞间质的形 成，并保持正常的渗透性；天口冬氨酸（AS巧对肌肉和皮肤有保护作用；鄉氨酸（VAL)促使 神经系统功能正常，如果缺乏时，会造成触觉敏感度特别提高；苯丙氨酸（PH巧在机体内转 变为酪氨酸，促进甲状腺素和肾上腺素的合成；脯氨酸（PRO)对高血压有疗效作用；丝氨 酸（SER)能降低血液中的胆固醇浓度，有抗菌作用；谷氨酸（GLU)有保护皮肤湿润，如配制 的化妆品，对皮肤、粘膜元及细胞复苏有很好的作用，适于幼儿及皮肤病患者使用；精氨酸 (ARG)可增加肌肉活力，保持机体的正常功能。 肤是α-氨基酸W肤键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间 产物。多肤与蛋白质之间并无明显的界限，通常，根据氨基酸残基的数量，2~10个氨基酸 组成的肤称为寡肤（或称小分子肤）；10~50个氨基酸组成的肤称为多肤；由50个W上的 氨基酸组成的肤为大肤或称为蛋白质。 鸡胚即鸡的胚胎，是受精鸡蛋解化至一定天数后，还未破壳可食用的完整的生命 体。研究表明，鸡胚中包含的营养成分包括蛋白质、多肤、氨基酸、碳水化合物（葡萄糖、果 糖、半乳糖、阿拉伯糖、巧喃糖等）、脂类、脂肪酸等。另外，鸡胚中还包括抗感染成分和生物 活性物质。所述的抗感染成分有球蛋白、干扰素、胎儿蛋白、溶菌酶和憐酸二醋酶；所述的生 物活性物质有唾液酸、儿苯酪胺、膜岛素样生长因子-1、膜岛素、激肤酶、组胺酶、胆碱、红细 胞生成素、脱氧核糖核酸酶和核糖核酸酶等。相对于未解化的鸡蛋，鸡胚中营养成分，特别 是小分子蛋白或多肤和氨基酸的含量更加丰富，而对人体不利的脂肪、胆固醇等含量则大 幅下降。 鸡胚营养丰富，具有潜在的护肤保健和药用价值。但目前对鸡胚中肤的研究目前 还较少，应对其进行在化妆品、保健品和药品的研究中进一步的开发和利用。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种鸡胚活性肤及其制备方法与应 用。本专利技术提供的鸡胚活性肤具有良好的抗紫外效果，能够保护细胞在紫外照射下正常生 长，且对细胞生长有促进作用。 本专利技术提供的鸡胚活性肤，包括鸡胚活性肤和游离氨基酸；其中，鸡胚活性肤的分 子量小于lOkDa。 本专利技术制得的鸡胚活性肤中，共检测到活性肤300条，分别来自69种不同的 蛋白质。根据PSMs任eptide-SpectralMatch)，运些蛋白质主要为：0va化umin(登录 号P01012)、ApolipoproteinB(登录号Q197X2)、Ovotransfe;r;rin(登录号E1BQC2)、 Histone册.2 (登录号P84229)、Apovitellenin-l(登录号P02659)、0voglobulinG2type AB(登录号I0J174)、0voglobulinG2 (登录号I0J170)、Vitellogenin-2 (登录号P02845)、 A1 地a-1-acidglycoprotein(登录号A7肥B0)和HistoneH4(登录号P62801)。 本专利技术的鸡胚活性肤中，鸡胚活性肤的浓度为0.1 g/yL。 本专利技术提取得到的鸡胚活性肤中包括18种游离氨基酸，其中包括7种必需氨基 酸，分别为苏氨酸、鄉氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和色氨酸。另外还包括11 种非必需氨基酸，分别为天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、组氨 酸、精氨酸、脫氨酸和脯氨酸。 本专利技术的鸡胚活性肤中，游离氨基酸的浓度为14. 3mg/mL。 本专利技术提供的鸡胚活性肤的制备方法包括：将鸡胚去壳、匀浆后，冻融破碎细胞； 经膜酶酶解后，离屯、收集上清液，超滤截留分子量小于lOkDa的组分。 本专利技术所采用的鸡胚为解化至14~19天的健康鸡胚。 具体的，鸡胚的获取方式为，取SPF级受精鸡蛋，放入解化箱内进行解化，解化溫 度控制在37. 5°C，相对湿度60%，每2小时自动翻蛋一次，待解化至14~19天。 作为优选，采用解化至16~17天的鸡胚。 受精鸡胚解化至14天~19天的鸡胚的胚胎处于干细胞高度增殖期，各种器官基 本形成。在鸡胚的解化过程中，蛋白质的代谢十分剧烈，解化期间，蛋白质和多肤的含量呈 持续上升状态。研究表明，在解化的第14天~19天，鸡胚中蛋白质和多肤的增加幅度最大， 游离氨基酸的含量也在此期间达到最高。 制备鸡胚活性肤前，解化的鸡胚停止解化。具体为，将解化鸡胚放置于-20°c停止 解化。 本专利技术中，所述匀浆采用组织匀浆机。 具体为：将解化至14d~19d的鸡蛋表面消毒，去除蛋壳后W组织匀浆机匀浆。作 为优选，匀浆的溫度为4°C，时间为20min转速为2500r/min。 经组织匀浆，鸡胚组织粉碎，细胞在匀浆机的机械作用下初步破碎。为了进一步破 碎细胞，进行冻融和超声破碎。 在本专利技术实施例中，破碎细胞包括冻融和超声破碎的步骤； 冻融的冷冻溫度为-20°C~-40°C，时间为60h~80h;溶解溫度为4°C~8°C; 超声破碎的溫度为0°C~8°C，功率为800W~1200W，时间为15min~25min。 在一些实施例中，破碎细胞包括冻融和超声破碎的步骤；冻融的冷冻溫度为-30°C，时间为72h;溶解溫度为4°C;超声破碎的溫度为4°C，功率为1000W，时间为20min。 冻融使细胞在冷冻-融化的过程中，由于细胞内形成冰粒而使剩余胞液的盐浓度 增高而引起细胞破碎。本专利技术中，溶解的溫度为4°C，溶解至细胞匀浆融化。经冻融后，细胞 膜进一步的破裂，再进行超声波破碎，从而使细胞膜的破碎程度更加完全，提高了活性肤的 提取效率。在本专利技术中，经过超声破碎的组织匀浆与等体积的水混合后，进行酶解。所述酶解指在组织匀浆与膜酶共同解育，使蛋白质发生分解的过程。本专利技术中，酶解时膜酶的质量分数为2. 5%。即将膜酶加入组织匀浆至质量分数为 2. 5%。在本专利技术中，膜酶的酶活力为37000u/g。[003引在本专利技术中，酶解的溫度为45°C~55°C，抑值为7. 3~7. 7,酶解时间为40min~ 80min。在一些实施例中，酶解的溫度为50°C，抑值为7. 5,酶解时间为比。 离屯、后，弃除组织碎片，收集上清液。该上清液中富含蛋白质、活性肤和游离氨基 酸。在本专利技术的实施例中，离屯、的转速为4500r/min，离屯、的时间为20min，离屯、的溫 度为4°C。超滤截留具体指使上清液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡胚活性肽，其特征在于，包括鸡胚活性肽和游离氨基酸；其中，所述鸡胚活性肽的分子量小于10kDa。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：耿威，金英花，战铁楠，李杨，耿晓宇，王莉红，王笑琳，耿利，
申请(专利权)人：耿威，
类型：发明
国别省市：吉林;22