利用可溶性CD24治疗类风湿性关节炎的方法技术

本文提供了利用CD24蛋白质治疗类风湿性关节炎的方法。所述CD24蛋白质可包括成熟人或鼠CD24以及哺乳动物免疫球蛋白的N-端或C-端融合部分。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本案是申请号为201180021423. 6,申请日为2011-4-28,题目为"利用可溶性CD24 治疗类风湿性关节炎的方法"的申请的分案。 相关申请的交叉引用 本申请要求与2010年4月28日提交的美国临时专利申请号61/329, 078的权益， 其内容通过参考并入本文。
本专利技术设及用于治疗类风湿性关节炎的组合物和方法。
技术介绍
本章节提供背景信息，其不必是现有技术，而且是对本公开内容的综合概述，该公 开内容不是其全部范围或其所有特征的全面公开。CD24被称为耐热抗原（1)。其表达为糖基憐脂酷肌醇（GPI)-错定分子（2)，并且 在不同谱系中具有广泛的分布（3)。由于CD24倾向于在未成熟细胞上表达，其也已经被用 作部分干细胞标记物W及用于淋己细胞分化。与CD24有关的第一功能是对抗原特异性T 细胞反应的共刺激活性（4-6)。体内试验表明，作为淋己器官中T细胞激活的共刺激因子， CD24是多余的，但是在缺乏CD28时其变成必要的（7,8)。运并不适合并非作为"共刺激因 子富集的"的局部祀器官的情况。与运种概念一致，我们证明了具有CD24定向突变的小鼠 完全抵抗实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE)的诱导巧）（10)。 人CD24的多态现象与数种自身免疫性疾病的风险和进展相关（11-15)，包括多发 性硬化症和类风湿性关节炎（RA)。在多发性硬化症的情况中，我们已经报告了由鼠CD24和 人IgGlFc的胞外部分组成的可溶性CD24改善实验性自身免疫性疾病多发性硬化症的鼠 模型的临床症状巧）。由我们中的一员进行的最近的研究表明，CD24与危险相关分子模式 (DAMPS)的宿主反应相互作用并对其进行抑制（16)。RA影响0.5-1 %的人口数量。尽管很多缓解疾病的抗风湿性药物（DMA畑S)目前 可用，但是根据美国风湿病学改善标准学会，即使生物学DMARDs的金标准，即祀向肿瘤坏 死因子α的治疗法在小于50%的接受该治疗的患者中导致50%改善（ACR50) (17)。不能 达到对RA的治愈。因此，测试另外的RA治疗法的必要的。RA被假定为关节中的自身免疫 性疾病，尽管该疾病的病因很大程度上仍然不明。很多研究在类风湿性关节炎的发病机理 中设及Τ细胞（18)。最近，已经显示，抗体转移能引发小鼠关节炎症的发展（19-21)。损伤 病理学类似于人类类风湿性关节炎。 从RA通过抗体的被动转移的研究中建立的最有趣的概念之一是：即使所述抗体 无所不在被表达的蛋白质具有特异性，也能观察到组织特异性的自身免疫性疾病（19-21)。 运种概念是重要的，因为其表明，尽管具有共同的发病机理，不同器官/组织的自身免疫性 疾病可能需要不同治疗。支持运种概念的是，广泛用于治疗多发性硬化症的干扰素β对治 疗RA显示很小的效果RA(22)。 与人RA相关的动物模型对DMARDs方面治疗发展的进展起着重要作用。例如，在 小鼠和大鼠中胶原诱导的关节病对开发RA治疗法是关键的（23)。最近，已经证实，抗胶原 抗体的适应性转移在小鼠中引发强烈的类似RA的损害（19)。因为在疾病发作之前RA患者 的自身抗体增加（24, 25)，因此胶原特异性抗体的被动转移是人类RA的相关模型。 因为RA的发病机理设及对DAMP的宿主反应（26, 27)，而且因为CD24分子负调节 对DAMP的宿主反应（16)，因此我们研究了利用可溶性CD24治疗RA的可能性。选择RA的 被动转移模型，原因在于其与人类疾病相关且实验设计简单。
技术实现思路
本文提供了通过向需要其的哺乳动物施用CD24蛋白质而治疗类风湿性关节炎的 方法。所述CD24蛋白质可包括成熟小鼠CD24或成熟人CD24的序列或其变体。成熟人CD24 可由沈QIDN0:1或2组成。成熟小鼠CD24可由沈QIDN0:3序列组成。所述CD24蛋白 质还可包括小鼠或人CD24的胞外域，其可与成熟CD24的N-端融合。CD24的胞外域可由 SEQIDN0:4序列组成。所述CD24蛋白质还可包括一部分哺乳动物免疫球蛋白（Ig)，其可 与成熟CD24的N-端或C-端融合。所述Ig部分可W是人Ig蛋白质的Fc部分，其可W是 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4或IgA。该Fc部分可由人Ig蛋白质的较链区和C肥与C册结构域 组成。所述Fc部分还可W由人IgM的较链区和C册与CH4结构域组合。CD24蛋白质可W是可溶性的，而且可W是糖基化的。CD24蛋白质可利用真核蛋白 表达系统生产。该表达系统可包括包含在中国仓鼠卵巢细胞系中的载体或复制缺陷逆转录 病毒载体。所述复制缺陷逆转录病毒载体可稳定地整合到真核细胞的基因组中。 附图简述 图1.CD24融合蛋白CD24IgGlFc(沈QIDN0:5)的氨基酸组成。下划线的26个氨 基酸是CD24的信号肤（SEQIDN0:4)。该序列的框住的黑体部分是融合蛋白中使用的成 熟CD24蛋白质（SEQIDN0:1)。通常存在于成熟CD24蛋白质中的末尾氨基酸（A或V)已 经从构建物中删除W避免免疫原性。非下划线的、非粗体的字母是包含较链区和CH1与C肥 结构域的IgGl化序列（SEQIDN0:6)。 图2.纯化和处理从哺乳动物细胞系表达的CD24IgGlFc的方法。 图3.来自小鼠的成熟CD24蛋白质（SEQIDNO:^与来自人的成熟CD24蛋白质 (SEQIDNO:2)之间的氨基酸序列变化。潜在糖基化位点被加粗，其中N-糖基化位点为红 色。 图4.CD24Ig对RA的治疗效果。使8-10周龄雄性BALB/c小鼠静脉内免疫接种 2mg/小鼠Art虹itoMab诱导关节炎抗体鸡尾酒（M抓ioproducts,StPaul,MN)。2天后，对 小鼠腹腔注射溶于PBS中的9ygLPS。利用下述评分系统每日监控疾病发展。0,无反应， 正常；1，轻微，但明确的踩/腕发红及肿胀或者限于个别趾的表观发红和肿胀，而不管受侵 袭趾的数目；2,中度至严重的踩/腕发红及肿胀；3,整个手爪发红及肿胀；4,包括趾在内 的四肢发炎最大化，设及多个关节。所显示的数据是来自四肢的合成分数（平均值+S巧。 冲<0. 05, *冲<0. 01，**冲<0. 001。两组之间的差异基于费雪化SD测验也是显著的。 图5.CD24IgGl的药物代谢动力学的WinNonlin区室模拟分析。开环代表3只小鼠 的平均值，线条是预期药物代谢动力学曲线，a.静脉注射ImgCD24IgGl。b.皮下注射Img CD24IgGl。c.比较如通过曲线下面积（AUC)、半衰期和最大血液浓度测量的抗体总量。注 意，皮下注射的全部AUC和Cmax是静脉注射的约80%，尽管该差异不是统计学上显著的。 图6.PAMP与DAMP之间的CD24-SiglecG(10)相互作用鉴别。A.对PAMP的宿主反 应不受CD24-SiglecG(10)相互作用的影响。B.CD24-SiglecG(10)相互作用抑制对DAMP 的宿主反应，可能是通过SiglecG/10-结合的甜P-1。[002。 图7.A单次注射CD24FC降低CAIA的临床分数。a.试验图标。BALB/c小鼠（8周 龄）在第一天接受mAbs并结合载体或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗类风湿性关节炎的方法，包括向需要其的哺乳动物施用CD 24蛋白质。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：X郑，W吴，Y刘，P郑，
申请(专利权)人：肿瘤免疫股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US