使用可溶性CD24进行神经保护和髓鞘再生的方法技术

本发明专利技术涉及组合物及其在保护和维持少突胶质细胞以及治疗脱髓鞘病症的方法中的用途。

Methods of neuroprotection and myelination with soluble CD24

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用可溶性CD24进行神经保护和髓鞘再生的方法
本专利技术涉及组合物及其在保护和维持少突胶质细胞以及治疗脱髓鞘病症的方法中的用途。
技术介绍
髓鞘是分层的、富含脂质的结构，包裹在轴突周围，以介导沿着它们的跳跃信号传导，并为它们提供营养支持。在中枢神经系统(CNS)中，髓鞘由少突胶质细胞形成。髓磷脂是脱髓鞘疾病的靶标，包括神经免疫病症如多发性硬化症(MS)。髓鞘再生是诱导少突胶质细胞前体细胞(OPC)形成少突胶质细胞的过程，少突胶质细胞能够在中枢神经系统(CNS)的脱髓鞘轴突上产生新的髓鞘。响应于髓鞘变性，称为少突胶质细胞祖细胞(OPC)的多能实质祖细胞被激活并募集到受损区域。这是体内自然调节的过程，在健康的CNS中往往非常有效。但是在患有神经免疫病症的人中，髓鞘再生变得越来越不完全，使轴突永久脱髓鞘，容易变性，并且在许多患者中最终失败，导致更多的疾病进展。在诸如MS之类的疾病中，髓鞘再生失败的原因仍然没有被完全理解，并且被认为是复杂的。几项研究表明，一部分慢性脱髓鞘的MS病变中含有不能分化为再生髓鞘的少突胶质细胞的OPC。少突胶质细胞通过依赖髓鞘再生的机制和不依赖髓鞘再生的机制在神经保护中起关键作用，并在涉及中枢神经系统的炎性和退行性疾病(包括MS、阿尔茨海默氏病和潜在的帕金森氏病)中提供保护(1-4)。因此，对通过促进少突胶质细胞的保护和维持并促进髓鞘形成活性治疗脱髓鞘疾病存在大量未满足的医学需求。
技术实现思路
本文提供了维持少突胶质细胞，促进髓鞘形成和治疗脱髓鞘病症的方法，所述脱髓鞘病症包括涉及中枢神经系统的炎性和退行性疾病。所述方法可以包括将CD24蛋白施用于有需要的受试者。脱髓鞘病症可以是阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、多发性硬化症、急性播散性脑脊髓炎、视神经脊髓炎谱系病症、视神经炎、横贯性脊髓炎或急性弛缓性脊髓炎。CD24蛋白可以维持少突胶质细胞。所述方法可以进一步包括施用促进少突胶质细胞转化或促进少突胶质细胞产生髓磷脂的另一种试剂。CD24蛋白可以包含成熟的人CD24或其变体。成熟的人CD24可以包含SEQIDNO:1或2所示的氨基酸序列。CD24蛋白可以包含人CD24的任何或全部细胞外结构域。CD24蛋白的序列可以包含CD24的信号肽序列，其可以包含SEQIDNO:4所示的氨基酸序列。信号肽序列可以允许从表达蛋白质的细胞分泌。信号肽序列也可以是在另一跨膜或分泌的蛋白质上发现的序列，或者是由本领域已知的现有信号肽修饰的序列。CD24蛋白可以是可溶的。CD24蛋白可以被糖基化。可以使用真核蛋白表达系统产生CD24蛋白，所述真核蛋白表达系统可以包含中国仓鼠卵巢细胞系中所含的载体或复制缺陷型逆转录病毒载体。复制缺陷型逆转录病毒载体可以稳定地整合到真核细胞的基因组中。CD24蛋白可以包含蛋白质标签，其可以在CD24蛋白的N端或C端融合。所述蛋白质可以包含哺乳动物免疫球蛋白(Ig)的一部分，其可以是人Ig蛋白的Fc区。人Ig蛋白可以包含人Ig蛋白的铰链区以及CH2和CH3结构域，并且人Ig蛋白可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgA。Fc区还可以包含IgM的铰链区以及CH2、CH3和CH4结构域。CD24蛋白可以包含SEQIDNO:5、6、8、9、11或12所示的氨基酸序列。附图说明图1A示出了全长CD24融合蛋白CD24Fc(在本文中也称为CD24Ig)的氨基酸组成(SEQIDNO:5)。带下划线的26个氨基酸是CD24的信号肽(SEQIDNO:4)，其在分泌期间从表达所述蛋白质的细胞中被切除，因此从所述蛋白质的加工形式(SEQIDNO:6)中缺失。序列的粗体部分是融合蛋白中使用的成熟CD24蛋白的细胞外结构域(SEQIDNO:2)。为了避免免疫原性，成熟CD24蛋白中通常存在的最后一个氨基酸(A或V)已从构建体中删除。非带下划线的非粗体字母是IgG1Fc的序列，包括铰链区以及CH1和CH2结构域(SEQIDNO:7)。图1B示出了CD24VFc的序列(SEQIDNO:8)，其中成熟的人CD24蛋白(粗体)是SEQIDNO:1的缬氨酸多态性变体。图1C示出了CD24AFc的序列(SEQIDNO:9)，其中成熟的人CD24蛋白(粗体)是SEQIDNO:1的丙氨酸多态性变体。图1B和1C中融合蛋白的各个部分如图1A中所标记，并且变体缬氨酸/丙氨酸氨基酸带双下划线。图2示出了来自小鼠(SEQIDNO:3)和人(SEQIDNO:1)的成熟CD24蛋白之间的氨基酸序列变异。潜在的O-糖基化位点以粗体显示，N-糖基化位点用下划线标出。图3.CD24IgG1(CD24Fc)药代动力学的WinNonlin区室建模分析。空心圆代表3只小鼠的平均值，线是预测的药代动力学曲线。图3A.静脉内注射1mgCD24IgG1。图3B.皮下注射1mgCD24IgG1(CD24Fc)。图3C.通过曲线下面积(AUC)、半衰期和最大血液浓度测量的血液中抗体总量的比较。注意，总体而言，皮下注射的AUC和Cmax约为静脉内注射的80％，尽管差异在统计上并不显著。图4.CD24-SiglecG(10)相互作用可区分PAMP和DAMP。图4A.宿主对PAMP的响应不受CD24-SiglecG(10)相互作用的影响。图4B.CD24-SiglecG(10)相互作用可能通过SiglecG/10相关的SHP-1抑制宿主对DAMP的响应。图5.CD24Fc与髓磷脂相关糖蛋白(MAG)的体外结合图6.人CD24融合蛋白在小鼠EAE中的治疗功效。如图4的图例所述，用MOG肽使C57BL/6j小鼠免疫。免疫后14-21天，将EAE评分在2.5至3.5之间的小鼠随机分为三组，并通过每隔一天注射5次CD24融合蛋白(每次注射200或50μg)或对照蛋白(每次注射200μg)来处理。显示的数据是临床评分的平均值和标准误差。*P<0.05，**P<0.01。总体而言，当施用200μg融合蛋白时，观察到了显著的治疗效果(P＝0.0083)。在两个独立的实验中观察到治疗效果，每组总共有7-12只小鼠。图7.CD24Fc防止被MOG引发的T细胞自身免疫破坏。在第0天，用含MOG肽的CFA使六周龄雌性C57BL/6小鼠免疫。免疫后第7天，当大多数小鼠没有临床症状时，通过每隔一天腹膜内注射对照人IgGFc或CD24Fc(200μg/注射/小鼠)来处理小鼠，共注射5次，如箭头所示。每天检查小鼠以对临床症状评分。所示数据为每组9只和10只小鼠的平均值和SEM。(P＝0.0019，Fisher的PLSD检验)。在另一个实验中已经再现了治疗效果。图8.鉴定小鼠中CD24Fc的最小有效剂量。用MOG使C57BL/6小鼠免疫，并用CD24Fc处理，如在图4的图例中详述。第一个月的累积疾病评分用于计算由CD24Fc引起的抑制百分比。IgG1Fc处理组的评分用作基线。对数曲线拟合用于计算最小有效剂量。图9.SJL模型中复发性缓解型EAE的CD24Fc处理。在第0天，用含PLP肽的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CD24蛋白，其用于治疗受试者的脱髓鞘病症。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170515 US 62/506,1351.一种CD24蛋白，其用于治疗受试者的脱髓鞘病症。


2.根据权利要求1所述使用的CD24蛋白，其中所述脱髓鞘病症选自由以下组成的组：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、多发性硬化症、急性播散性脑脊髓炎、视神经脊髓炎谱系病症、视神经炎、横贯性脊髓炎和急性弛缓性脊髓炎。


3.根据权利要求1所述使用的CD24蛋白，其中所述CD24蛋白维持少突胶质细胞。


4.根据权利要求1所述使用的CD24蛋白，其中向所述受试者施用促进少突胶质细胞转化的另一种药剂。


5.根据权利要求1所述使用的CD24蛋白，其中向所述受试者施用促进少突胶质细胞产生髓磷脂的另一种药剂。


6.根据权利要求1所述使用的CD24蛋白，其中所述CD24蛋白包含成熟的人CD24或其变体。


7.根据权利要求6所述使用的CD24蛋白，其中所述成熟的人CD24包含SEQIDNO:1或2所示的氨基酸序列。


8.根据权利要求6所述使用的CD24蛋白，其中所述CD24蛋白还包含蛋白质标签，其中所述蛋白质标签在所述CD24蛋白的N端或C端融合。


9.根据权利要求8所述使用的CD24蛋白，其中所述蛋白质标签包含哺乳动物免...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y刘，P郑，N李，M德文波特，
申请(专利权)人：肿瘤免疫股份有限公司，国家儿童医疗中心，
类型：发明
国别省市：美国;US