小麦成熟胚愈伤组织诱导培养及植株再生体系的构建方法技术

本发明专利技术以冬小麦栽培品种京411、Brock和春麦S10鉴-6、春麦津强5号四种小麦成熟胚为外植体，进行愈伤组织诱导、分化及再生体系优化，构建高效脱分化、再生植株以及获得再生籽粒系统：成熟胚采用纵切处理，愈伤组织诱导培养基为MS+2.0mg·L-12,4-D+200mg·L-1CH+100mg·L-1MI+250mg·L-1Glu，分化和植株再生培养基为MS+10mg·L-1ZT+0.1mg·L-1IAA，分化率为100%，成苗率为49.33%，生根培养基为1/2MS，生根后的试管苗经过炼苗、大田移栽及移栽后管理，可以收获再生籽粒。与已有京411再生体系的报道相比，本研究的植株再生率显著提高。本研究建立的京411成熟胚组织培养及再生体系为后续的转基因研究提供了良好的受体材料。

【技术实现步骤摘要】
小麦成熟胚愈伤组织诱导培养及植株再生体系的构建方法国家自然科学基金（编号：31071671）和天津市科委青年基金项目（14JCQNJC14900）天津市科技支撑重点（11ZCKFNC00700）资助。
本专利技术属于农业生物技术工程，涉及小麦成熟胚愈伤组织诱导、再分化、再生植株以及大田移栽、结籽一系列过程，在小麦分子育种及小麦基因转化方面有重要应用。
技术介绍
小麦是我国主要粮食作物之一，在生产上，逆境胁迫和病虫害制约着小麦产量和质量，培育抗逆、抗病、优质的小麦品种是解决这一问题的有效途径之一。目前小麦育种的主要技术有基因工程育种、细胞工程育种、轮回选择育种等，利用基因工程育种能打破种间隔离，缩短育种年限，对小麦进行定向改良具有广阔的应用前景。从方法上来说，转基因技术可分为依赖和不依赖植物组培两类，依赖植物组织培养常见的转基因方法有基因枪法和农杆菌介导法。然而与烟草、大豆和水稻等其它作物相比，小麦组织培养再生率低，遗传转化难度大，这阻碍了转基因技术在小麦育种中的应用。优化小麦再生体系提高其植株再生率是小麦转基因研究的重要基础工作。不同基因型小麦愈伤组织的再生能力差异很大，外植体的选择本文档来自技高网...

【技术保护点】
小麦成熟胚愈伤组织诱导培养及植株再生体系的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）植物材料：选取色泽、大小均匀的冬小麦栽培品种，70%(w/w)酒精处理5min，无菌水冲洗2‑3次，用50%(w/w)次氯酸钠消毒30min，无菌水冲洗3次，4℃冷藏2h后取出再用无菌水冲洗一次；所述的小麦栽培品种指的是：京411；（2）诱导和再生培养基的筛选：通过对6个诱导培养基、8个分化培养基的筛选，获得成熟胚从脱分化到再分化以及形成再生苗的系统为：愈伤组织诱导培养基为MS+2.0mg·L‑12,4‑D+200mg·L‑1CH+100mg·L‑1MI+250mg·L‑1Glu，分化和植株再生培养基为MS+...

【技术特征摘要】
1.小麦成熟胚愈伤组织诱导培养及植株再生体系的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）植物材料：选取色泽、大小均匀的冬小麦栽培品种，70%(w/w)酒精处理5min，无菌水冲洗2-3次，用50%(w/w)次氯酸钠消毒30min，无菌水冲洗3次，4℃冷藏2h后取出再用无菌水冲洗一次；所述的小麦栽培品种指的是：京411；（2）诱导和再生培养基的筛选：通过对6个诱导培养基、8个分化培养基的筛选，获得成熟胚从脱分化到再分化以及形成再生苗的系统为：愈伤组织诱导培养基为MS+2.0mg·L-12,4-D+200mg·L-1CH+100mg·L-1MI+250mg·L-1Glu，分化和植株再生培养基为MS+10mg·L-1ZT+0.1mg·L-1IAA，生根培养基为1/2MS；以上所有培养基均添加30g·L-1蔗糖，琼脂粉8.5g·L-1，PH5.8，在121℃下经1.1kg/cm2高压湿热灭菌20min；（3）成熟胚的处理和诱导：取步骤（1）中消毒并低温处理好的种子，不去掉胚乳，将胚纵向全切但胚乳不完全切开，置于愈伤组织诱导培养基，直径6cm的培养皿，平均每皿接种20个，25℃暗培养，在培养皿上标明品种、培养基、日期和接种外植体数，培养10d后统计出愈率，挑选胚性愈伤组织继代，每周继代一次，继...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振英，刘晓颖，范宝莉，陈宏，刘君，蒋鲁亚，王君雅，
申请(专利权)人：天津师范大学，
类型：发明
国别省市：天津;12