本发明专利技术公开了一种结球甘蓝胚状体诱导方法，包括无菌苗诱导、胚状体诱导、再生植株诱导、炼苗和移植过程，本发明专利技术解决了现有技术中以小孢子为外植体直接诱导再生植株或诱导胚状体或诱导出芽，诱导率不高的问题；本发明专利技术以下胚轴作为诱导胚状体的外植体，诱导率可达90%，胚状体诱导再生植株的诱导率可以达到90%；通过胚状体诱导再生植株，形成的再生植株遗传稳定性高，与母体没有生理隔离现象发生，增值系数高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种结球甘蓝胚状体再生植株的培养方法，属于植物组织培养领域。
技术介绍
结球甘蓝oleracea L.var.capitata L.)是十字花科、芸薹属的植物，为甘蓝(Ara1S1Sica oleracea L.)的变种,又名卷白菜、洋白菜和圆白菜等。甘蓝具有耐寒、抗病、适应性强、易贮存、产量高、品质好，是我国北方的主要蔬菜之一。传统的育种方法是用优良品种进行自交分离，此种育种方法周期长、获得优质品种的概率较低。自1982年Lichter首次报道油菜游离小孢子培养获得再生植株以来，芸薹属作物在出胚率、出胚量、胚培养及再生植株方面都获得了很大的成功。小孢子育种方法可以在1-2年内快速的获得植株，与传统育种方法相比，育种时间大大缩减，提高了育种的进程和育种效率。然而，以小孢子为外植体直接诱导再生植株或诱导胚状体或诱导出芽，诱导率不高，如中国专利ZL201010018236.X—种结球甘蓝游离小孢子培养获得再生植株的方法，最佳组合的出胚率为10.9胚/花蕾，小孢子的诱导率低。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种结球甘蓝再生植株的诱导方法，以结球甘蓝无菌苗的胚轴为外植体，通过诱导胚状体的发生，进而诱导再生植株的发生，胚状体的诱导率和再生植株的发生率极高。本专利技术采用 的技术方案是: 1、无菌苗诱导:挑选结实饱满的结球甘蓝种子，消毒后清洗干净，接种于无菌苗诱导培养基中，在无菌培养室中进行培养:培养条件为温度18-22°c，光照1500-2000LX，空气湿度50%-60%，无菌苗培养至5-8cm时，将无菌苗从培养室中取出，冷却的高压灭菌水清洗干净； 2、胚状体的诱导:在无菌操作台中，选取结球甘蓝无菌苗的下胚轴作为外植体，将下胚轴切成3-4_的小段，接种于胚状体诱导培养基中，于无菌环境中在18-22°C、1000-2000Lx、空气湿度65%-70%条件下诱导胚状体发生； 3、再生植株诱导:外植体形成胚状体后，于无菌条件下，将长有胚状体的外植体用冷却的无菌水清洗干净后转移到再生植株诱导培养基中，于22-25°C，3000-4000 Lx、空气湿度65%-70%条件下诱导再生植株发生； 4、炼苗、移植:将装有再生植株的培养瓶转移到室温大棚中，打开瓶塞培养5-7d，将再生植株从培养瓶中取出、洗净根部琼脂，将再生植株移入蛭石炼苗培养基中培养7-10d后移入大棚土壤中培养。优选的，所述的的甘蓝种子消毒过程为:种子用自来水清洗干净后，先于70-75%的乙醇中消毒15s，在于体积浓度为3%的次氯酸钠溶液中消毒lOmin，最后用高压灭菌冷却后的自来水清洗种子。优选的，所述的无菌苗诱导培养基配方为:每IL B5培养基中添加20-40 g/L蔗糖、5-8g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用。所述的胚状体诱导培养基配方为:每IL MS培养基中添加l_2mg/L吲哚乙酸、.0.1-1 mg/L 6-糖基氨基嘌呤、20-40g/L蔗糖、5_8g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用。所述的再生植株培养基配方为:每IL MS培养基中添加l_2mg/L萘乙酸、0.1-1mg/L 6-糖基氨基嘌呤、20-40g/L蔗糖、5_8g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用。本专利技术所述的结球甘蓝胚状体再生植株的培养方法，以下胚轴作为诱导胚状体的外植体，诱导率可达90%，胚状体诱导再生植株的诱导率可以达到90% ;通过胚状体诱导再生植株，形成的再生植株遗传稳定性高，与母体没有生理隔离现象发生，增值系数高。【具体实施方式】下面结合具体的实施方式对本专利技术做进一步详细的说明。实施例1: 1、无菌苗诱导:挑选结实饱满的结球甘蓝种子，种子用自来水清洗干净后，先于70-75%的乙醇中消毒15s，在于体积浓度为3%的次氯酸钠溶液中消毒lOmin，最后用高压灭菌冷却后的自来水清洗种子；将消毒后的种子接种于无菌苗诱导培养基中，在无菌培养室中进行培养:培养条件为温度18-22°C，光照1500-2000LX，空气湿度50%_60%，无菌苗培养至5-8cm时，将无菌苗从培养室中取出，冷却的高压灭菌水清洗干净； 2、胚状体的诱导:在无菌操作台中，选取结球甘蓝无菌苗的下胚轴作为外植体，将下胚轴切成3-4mm的小段，接种于胚状体诱导培养基中，每瓶培养基接种5块外植体，共接种40瓶，于无菌环境中在18-22°C、1000-2000 Lx、空气湿度65%_70%条件下诱导胚状体发生，其中有180块外植体上形成胚状体，胚状体的诱导率为90% ； 3、再生植株诱导:外植体形成胚状体后，于无菌条件下，将长有胚状体的外植体用冷却的无菌水清洗干净后转移到再生植株诱导培养基中，每瓶接种5块长有胚状体的外植体，于22-25°C，3000-4000 Lx、空气湿度65%_70%条件下诱导再生植株发生，其中有162块胚状体形成再生植株，再生植株的诱导率为90% ； 4、炼苗、移植:将装有再生植株的培养瓶转移到室温大棚中，打开瓶塞培养5-7d，将再生植株从培养瓶中取出、洗净根部琼脂，将再生植株移入蛭石炼苗培养基中培养7-10d后移入大棚土壤中培养。无菌苗诱导培养基配方为:每IL B5培养基中添加30 g/L蔗糖、7g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用。胚状体诱导培养基配方为:每IL MS培养基中添加2mg/L吲哚乙酸、0.5 mg/L6-糖基氨基嘌呤、30g/L蔗糖、7g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用。再生植株培养基配方为:每IL MS培养基中添加2mg/L萘乙酸、1 mg/L 6-糖基氨基嘌呤、30g/L蔗糖、7g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用。实施例2: 诱导过程同实施例1，所不同的是:胚状体诱导培养基配方为:每IL MS培养基中添加lmg/L吲哚乙酸、0.lmg/L 6-糖基氨基嘌呤、30g/L蔗糖、7g/L琼脂；再生植株培养基配方为:每IL MS培养基中添加lmg/L萘乙酸、0.5mg/L 6-糖基氨基嘌呤、30g/L蔗糖、7g/L琼脂。胚状体的诱导率为85%，再生植株的诱导率为88%。实施例3: 诱导过程同实施例1，所不同的是:胚状体诱导培养基配方为:每IL MS培养基中添加1.5mg/L吲哚乙酸、lmg/L 6-糖基氨基嘌呤、30g/L蔗糖、7g/L琼脂；再生植株培养基配方为:每IL MS培养基中添加1.5mg/L萘乙酸、lmg/L 6-糖基氨基嘌呤、30g/L蔗糖、7g/L琼脂。胚状体的诱导率为80%，再生植株的诱导率为75%。实施例4: 诱导过程同实施例1，所不同的是:胚状体诱导培养基配方为:每IL MS培养基中添加2mg/L吲哚乙酸、0.5 mg/L 6-糖基氨基嘌呤、20g/L蔗糖、5g/L琼脂。再生植株培养基配方为:每IL MS培养基中添加2mg/L萘乙酸、I mg/L 6-糖基氨基嘌呤、20g/L蔗糖、5g/L琼脂。胚状体的诱导率为80%，再生植株的诱导率为75%。实施例5: 诱导过程同实施例1，所不同的是:胚状体诱导培养基配方为:每IL MS培养基中添加2mg/L吲哚乙酸、0.5 mg/L 6-糖基氨基嘌呤、40g/L蔗糖、8g/L琼脂。再生植株培养基配方为:每IL本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种结球甘蓝胚状体再生植株的培养方法，其特征在于，步骤如下：（1）无菌苗诱导：结球甘蓝种子消毒后清洗干净，接种于无菌苗诱导培养基中，在无菌培养室中进行培养：温度18?22℃，光照1500?2000Lx，空气湿度50%?60%，无菌苗培养至5?8cm时，将无菌苗从培养室中取出，冷却的高压灭菌水清洗干净；（2）胚状体的诱导：在无菌操作台中，以无菌苗的下胚轴作为外植体，将下胚轴切成3?4mm的小段，接种于胚状体诱导培养基中，于无菌环境中在18?22℃、1000?2000?Lx、空气湿度65%?70%条件下诱导胚状体发生；（3）再生植株诱导：外植体形成胚状体后，于无菌条件下，将长有胚状体的外植体用冷却的无菌水清洗干净后转移到再生植株诱导培养基中，于22?25℃，3000?4000?Lx、空气湿度65%?70%条件下诱导再生植株发生；（4）炼苗、移植：将装有再生植株的培养瓶转移到室温大棚中，打开瓶塞培养5?7d，将再生植株从培养瓶中取出、洗净根部琼脂，将再生植株移入蛭石炼苗培养基中培养7?10d后移入大棚土壤中培养。
【技术特征摘要】
1.一种结球甘蓝胚状体再生植株的培养方法，其特征在于，步骤如下: (1)无菌苗诱导:结球甘蓝种子消毒后清洗干净，接种于无菌苗诱导培养基中，在无菌培养室中进行培养:温度18-22°c，光照1500-2000LX，空气湿度50%_60%，无菌苗培养至5-8cm时，将无菌苗从培养室中取出，冷却的高压灭菌水清洗干净； (2)胚状体的诱导:在无菌操作台中，以无菌苗的下胚轴作为外植体，将下胚轴切成3-4_的小段，接种于胚状体诱导培养基中，于无菌环境中在18-22°C、1000-2000 Lx、空气湿度65%-70%条件下诱导胚状体发生； (3)再生植株诱导:外植体形成胚状体后，于无菌条件下，将长有胚状体的外植体用冷却的无菌水清洗干净后转移到再生植株诱导培养基中，于22-25°C，3000-4000 Lx、空气湿度65%-70%条件下诱导再生植株发生； (4)炼苗、移植:将装有再生植株的培养瓶转移到室温大棚中，打开瓶塞培养5-7d，将再生植株从培养瓶中取出、洗净根部琼脂，将再生植株移入蛭石炼...
【专利技术属性】
技术研发人员：张亚丽，
申请(专利权)人：张亚丽，
类型：发明
国别省市：
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