本发明专利技术提供一种兜唇石斛组培快速繁殖的方法，通过将兜唇石斛自交开裂的成熟种子萌发，原球茎的形成及分化，以及生根培养后得到完整植株并移栽成活。与传统的高位芽截取或分株的繁殖方法相比，本发明专利技术采用组培技术进行兜唇石斛繁殖，通过原球茎的途径进行兜唇石斛的组培，其繁殖速度快，能获得大量种苗，苗生长健壮，不仅能在短期内培育大量性状一致的兜唇石斛种苗，移栽成活率高，满足市场需求，而且具有成本低，周期短，产出高等诸多优势。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于植物组织培养
。
技术介绍
5?唇石斛(/--/?.aphyllum (Roxb.) C.E.Fischer)又名天弓石斛、倒垂春石斛， 为兰科石斛属多年生附生草本植物，生于海拔400~1500米，阳光充足的常绿阔叶林中树干上或疏林下岩石上，主要分布于我国云南及印度、緬甸、泰国、老挝、越南、马来西亚等国家。它既是重要的观赏植物，同时又是商品中药材石斛的重要原植物之一，以鲜茎或干燥茎入药，是我国民间习用药用石斛种类之一。兜唇石斛清热除烦，清肝息风，利尿解毒。治热病津伤之烦渴，肝阳上亢证，食物中毒。主治咳嗽、咽喉痛、口干舌燥、烧伤烫伤。随着人们对兜唇石斛的药用需求量的增大，国内野生资源日趋减少，野生植株远远不能满足人们的日常需求，为了能在满足人们需求的同时又能保护野生资源，走可持续发展道路，就迫切需要进行人工栽培途经提供原料。目前，国内繁殖兜唇石斛的方法主要有高位芽截取、分株繁殖等，这些方法对母本材料要求高，用量大，还受到季节的限制，难以进行规模化、标准化生产和优良品种的大面积推广。
技术实现思路
为解决现有技术难以对兜唇石斛进行规模化、标准化生产，且培育周期长等问题， 本专利技术提供了，采用组培技术进行兜唇石斛繁殖，通过原球茎的途径进行兜唇石斛的组织培养能获得大量种苗，不仅能在短期内培育大量性状一致的兜唇石斛种苗，满足市场需求，对兜唇石斛野外资源的保护也具有十分重要的意义。本专利技术通过下列技术方案实现:，其特征在于经过下列步骤:(1)将3?唇石斛自交开裂的 成熟种子用3%的过氧化氢灭菌10~15min后，吸干表面液体，再将种子接种于下列原球茎诱导培养基中:MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.01~0.5mg/L蔡乙酸 NAA0.05 ~0.5mg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/LpH5.8 ~6.0,在光照强度为1500~20001x、温度为25±2°C、光照时间为10~12h/d的条件下，培养20~30天，得到膨大的原球茎，继续培养50~60天，使原球茎分化成小苗；(2)将步骤(1)所得小苗转接到下列增殖培养基中:1/2MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.01~0.5mg/L蔡乙酸 NAA0.05 ~0.5mg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/LpH5.8 ~6.0,在与步骤(1)相同的培养条件下进行继代培养7~10次，每次培养周期为45~60d， 得到丛生芽；(3)当步骤(2)的增殖基数达到生产所需量时，将步骤(2)所得2cm以下的丛生芽返回步骤(2)继续继代培养，2cm以上的健壮丛生芽接种到下列培养基中:1/2MS培养液蔡乙酸 NAA0.1 ~0.5mg/L吲哚丁酸 IBA0.1 ~0.5mg/L鹿糖30000mg/L琼脂5000mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/L活性炭500~1000mg/LpH5.8 ~6.0,在光照强度为1500~20001x、温度为25±2°C、光照时间为10~12h/d的条件下进行生根培养45~60d，得到生根苗；(4)将步骤(3)所得生根苗于室外散射光下进行常规炼苗6~8d后，将生根苗经常规洗净其培养基，置于质量浓度为5~10%的多菌灵溶液中消毒30min，再晾干水分后用细锯木移栽种植于通风温室中，保持湿度为70~80%、温度为15~28°C，即完成兜唇石斛组织培养快速繁殖。所述步骤(2)和(3)中的1/2MS培养基是常规MS培养液中全量元素浓度减半的培养液。 本专利技术具有下列优点和效果:(1)用组培繁殖技术在培养室内即可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了种苗无法周年进行生产的难点；(2)用自然成熟自交开裂的种子进行组培，采用无菌培养，提高了种子组培繁殖的成活率；用过氧化氢代替传统的升汞进行灭菌，减少了对环境的污染；(3)繁殖速度快，45~60天为一个周期，繁殖倍数可达3~5，苗生长健壮；(4)对整个兜唇石斛种苗生产技术流程中的关键环节进行优化整合，对培养基进行改进，分别采用全量元素减半的1/2MS培养液，减少药品用量，节约成本，同步进行芽诱导和增殖培养，简化了组培技术的培养程序，只需两种配方的培养基，不经过愈伤组织的形成， 直接长成新芽，发根多，减少不定芽发生变异的机率，可有效控制变异株的产生，移栽成活率高，可达90%，有利于安排生产计划。具有成本低，周期短，产出高等诸多优势。【具体实施方式】为了更好地说明本专利技术，下面给出本专利技术的实施例，但本专利技术的内容并不仅限于此。实施例1(1)将兜唇石斛自交开裂的成熟种子用3%的过氧化氢灭菌IOmin后，吸干表面液体，再将种子接种于下列原球茎诱导培养基中:MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.2mg/L蔡乙酸 NAA0.lmg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/LpH5.8，`在光照强度为15001x、温度为27°C、光照时间为10h/d的条件下，培养20天，得到膨大的原球茎，继续培养55天，使原球茎分化成小苗；(2)将步骤(1)所得小苗转接到下列增殖培养基中:1/2MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.05mg/L蔡乙酸 NAA0.2mg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/LpH6.0，在与步骤(1)相同的培养条件下进行继代培养7次，每次培养周期为60d，得到丛生芽；(3)当步骤(2)的增殖基数达到生产所需量时，将步骤(2)所得2cm以下的丛生芽返回步骤(2)继续继代培养，2cm以上的健壮丛生芽接种到下列培养基中:1/2MS培养液蔡乙酸 NAA0.3mg/L吲哚丁酸 IBA0.2mg/L鹿糖30000mg/L琼脂5000mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/L活性炭500mg/LpH5.8，在光照强度为20001x、温度为27°C、光照时间为llh/d的条件下进行生根培养50d，得到生根苗；(4)将步骤(3)所得生根苗于室外散射光下进行常规炼苗8d后，将生根苗经常规洗净其培养基，置于质量浓度为8%的多菌灵溶液中消毒30min，再晾干水分后用细锯木移栽种植于通风温室中，保持湿度为80%、温度为25°C，即完成兜唇石斛组织培养快速繁殖。移栽成活率可达90%。实施例2(1)将兜唇石斛自交开裂的成熟种子用3%的过氧化氢灭菌13min后，吸干表面液体，再将种子接种于下列原球茎诱导培养基中:MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.5mg/L蔡乙酸 NAA0.05 ~0.5mg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/L pH5.9在光照强度为18001x、温度为25°C、光照时间为llh/d的条件下，培养25天，得到膨大的原球茎，继续培养50天，使原球茎分化成小苗；(2)将步骤(1)所得小苗转接到下列增殖培养基中:1/2MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.01mg/L蔡乙酸 NAA0.5mg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/LpH5.9，在与步骤(1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种兜唇石斛组培快速繁殖的方法，其特征在于经过下列步骤：（1）将兜唇石斛自交开裂的成熟种子用3%的过氧化氢灭菌10～15min后，吸干表面液体，再将种子接种于下列原球茎诱导培养基中：MS培养液6?苄胺基嘌呤6?BA???????????0.01～0.5mg/L萘乙酸NAA????????????????0.05～0.5mg/L蔗糖???????????????????????30000mg/L琼脂???????????????????????4500mg/L香蕉???????????????????????50000mg/L土豆???????????????????????25000mg/LpH?????????????????????????5.8～6.0，在光照强度为1500～2000lx、温度为25±2℃、光照时间为10～12h/d的条件下，培养20～30天，得到膨大的原球茎，继续培养50～60天，使原球茎分化成小苗；（2）将步骤（1）所得小苗转接到下列增殖培养基中：1/2MS培养液6?苄胺基嘌呤6?BA???????????0.01～0.5mg/L萘乙酸NAA????????????????0.05～0.5mg/L蔗糖???????????????????????30000mg/L琼脂???????????????????????4500mg/L香蕉???????????????????????50000mg/L土豆???????????????????????25000mg/LpH????????????????????????5.8～6.0，在与步骤（1）相同的培养条件下进行继代培养7～10次，每次培养周期为45～60d，得到丛生芽；（3）当步骤（2）的增殖基数达到生产所需量时，将步骤（2）所得2cm以下的丛生芽返回步骤（2）继续继代培养，2cm以上的健壮丛生芽接种到下列培养基中：1/2MS培养液萘乙酸NAA?????????????????0.1～0.5mg/L吲哚丁酸?IBA????????????????0.1～0.5mg/L蔗糖????????????????????????30000mg/L琼脂????????????????????????5000mg/L香蕉???????????????????????50000mg/L土豆???????????????????????25000mg/L活性炭???????????????????500～1000mg/LpH??????????????????????????5.8～6.0，在光照强度为1500～2000lx、温度为25±2℃、光照时间为10～12h/d的条件下进行生根培养45～60d，得到生根苗；（4）将步骤（3）所得生根苗于室外散射光下进行常规炼苗6～8d后，将生根苗经常规洗净其培养基，置于质量浓度为5～10%的多菌灵溶液中消毒30min，再晾干水分后用细锯木移栽种植于通风温室中，保持湿度为70～80%、温度为15～28℃，即完成兜唇石斛组织培养快速繁殖。...
【技术特征摘要】
1.一种兜唇石斛组培快速繁殖的方法，其特征在于经过下列步骤:(1)将3?唇石斛自交开裂的成熟种子用3%的过氧化氢灭菌10~15min后，吸干表面液体，再将种子接种于下列原球茎诱导培养基中:MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.01~0.5mg/L蔡乙酸 NAA0.05 ~0.5mg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/LpH5.8 ~6.0,在光照强度为1500~20001x、温度为25±2°C、光照时间为10~12h/d的条件下，培养20~30天，得到膨大的原球茎，继续培养50~60天，使原球茎分化成小苗；(2)将步骤(1)所得小苗转接到下列增殖培养基中:1/2MS培养液6-苄胺基嘌呤6-BA0.01~0.`5mg/L蔡乙酸 NAA0.05 ~0.5mg/L鹿糖30000mg/L琼脂4500mg/L香蕉50000mg/L土豆25000mg/LpH5.8 ~6.0,在与步骤(1)相同的培养条件下进行继代培养7~10次，每次培养周期为45~60d， 得到丛生芽；(...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹桦，李绅崇，杨春梅，王继华，汪国鲜，吴丽芳，赵培飞，单芹丽，阮继伟，许凤，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：
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