可口革囊星虫纤溶酶基因、可口革囊星虫重组纤溶酶及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种可口革囊星虫纤溶酶基因、可口革囊星虫重组纤溶酶及其应用，所述可口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQ ID NO：1所示；通过蛋白表达系统对所述的可口革囊星虫纤溶酶基因进行重组蛋白诱导表达，得到所述可口革囊星虫重组纤溶酶，所述可口革囊星虫重组纤溶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；一种所述的可口革囊星虫重组纤溶酶的应用，所述可口革囊星虫纤溶酶基因用于制备溶栓药物，以及用于治疗血栓性疾病。本发明专利技术的可口革囊星虫纤溶酶基因和可口革囊星虫重组纤溶酶具有直接溶解血块中纤维蛋白的能力，降解纤维蛋白时，首先降解α链，然后降解β链，最后降解γ链，为α-纤溶酶，并且对肿瘤细胞有一定的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及一种可口革囊星虫纤溶酶基因，特别指一种口革囊星虫重组纤溶酶及 其应用。
技术介绍
血栓栓塞性疾病是一种常见的屯、脑血管疾病，常表现为屯、肌梗死、缺血性脑梗死、 静脉血栓栓塞。随着我国人民生活水平的提高和人口老龄化的到来，血栓栓塞性疾病现已 成为我国发病率，致残率和死亡率最高的疾病。因此寻找新型高效抗栓药物迫在眉睫，溶栓 药物的研发已经成为抗血栓药物的研发热点。截止目前，已经从生物中得到196条用于开 发溶栓药物的基因，寻找和开发一种新型的海洋溶栓物质，能够用来治疗血栓性疾病。通过 对其溶栓性质的研究，用基因工程的手段进一步研究其活性位点，从而研发出抗血栓效果 更好，副作用更低的溶栓药物。可口革囊星虫（Phascolosomaesculenta)俗称"泥蒜"、海姐、沙虫、海下、±算，福 建安海著名小吃±算冻就是由其制做而成的。隶属于星虫动物口（Sipunculoidea)、星虫纲 (Sipuncula)、革囊星虫属（Phascolosoma)。该种为我国特有，也是我国星虫中种群数量较 大的一个种，分布于我国东南沿海，广布于广西、广东、海南岛、福建和浙江，栖息于潮间带、 高潮区的泥滩内，营底栖穴居生活。W废屑和动植物碎片为食料，对溫度和盐度的适应能力 较强，因此，具有许多海洋生物不具有的特征，同样也具有很多不为人知的功能因子，为了 充分利用海洋生物资源，开发更多的功能食品。 目前，可口革囊星虫主要还是供人食用，其科学研究利用价值还有待进一步的研 究探讨。国内主要是对可口革囊星虫的营养成分及增养殖方面进行研究。展望未来，随着 现代分子生物学技术，生物下游工程等技术的不断发展，可口革囊星虫的研究利用价值会 逐步被发掘出来，其体内重要的活性物质也会被逐一探明。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一，在于提供一种可口革囊星虫纤溶酶基因。 本专利技术是运样实现上述技术问题之一的：一种可口革囊星虫纤溶酶基因，所述可 口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQIDNO:1所示。 本专利技术要解决的技术问题之二，在于提供一种可口革囊星虫重组纤溶酶。 本专利技术是运样实现上述技术问题之二的：一种可口革囊星虫重组纤溶酶，通过蛋 白表达系统对所述的可口革囊星虫纤溶酶基因进行重组蛋白诱导表达，得到所述可口革囊 星虫重组纤溶酶，所述可口革囊星虫重组纤溶酶的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。 本专利技术要解决的技术问题之Ξ，在于提供一种所述的可口革囊星虫重组纤溶酶的 应用。 本专利技术是运样实现上述技术问题之Ξ的：一种所述的可口革囊星虫重组纤溶酶的 应用，其特征在于：所述可口革囊星虫纤溶酶基因用于制备溶栓药物，w及用于治疗血栓性 疾病。 本专利技术的优点在于：可口革囊星虫纤溶酶基因和可口革囊星虫重组纤溶酶具有直 接溶解血块中纤维蛋白的能力，降解纤维蛋白时，首先降解α链，然后降解β链，最后降解 丫链，为α-纤溶酶，并且对肿瘤细胞有一定的抑制作用。【附图说明】 下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的说明。 图1是本专利技术中可口革囊星虫天然纤溶酶序列模式图。 图2是本专利技术中克隆可口革囊星虫重组纤溶酶3'-FullRACE Core Set Ver.2. 0 实验原理图。 图3是本专利技术中重组纤溶酶Western-Blot检测结果原始图 图4是本专利技术中可口革囊星虫重组纤溶酶对小鼠全血凝块溶解率实验结果的示 意图。 图5是本专利技术中可口革囊星虫重组纤溶酶利用纤维平板法进行纤溶活性的检测 结果的示意图。【具体实施方式】 一种可口革囊星虫纤溶酶基因，所述可口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQIDNO: 1所示。编码区分别为804bp，编码多肤长度为268个氨基酸。可口革囊星虫纤溶酶基因的 获取，是从福建沿海的海洋生物可口革囊星虫的肠组织中寻找和分离到的天然纤溶蛋白质 进行N端7个氨基酸测序，序列为畑4-1VGGRDV-0H，根据序列比对丝氨酸超家族酶的保守序 列设计引物对，初步克隆基因，3'RACE和5'RACE技术和生物信息学分析得到其基因序列。 具体的实施方法如下：[001引1实验耗材； 1.1实验材料巧口革囊星虫仰asolosmaesculenta)，雄性昆明种小鼠，大肠埃 希氏菌D册α、BL21 (DE3)，pET-22b质粒，毕赤酵母GS115,巧ic9质粒。 1.2、仪器 高速冷冻离屯、机；台式离屯、机；磁力揽拌器；精密抑计；电泳仪；凝胶成像仪；微 波炉；电子天平；微量移液器；恒溫摇床；脱色摇床；冻干机；制冰机；恒溫水浴锅DK-S24; 恒溫干燥箱；酶标仪；核酸蛋白检测系统；N3000色谱工作站；恒流累；数码照相机；分光 光度计；超纯水仪；组织匀浆器；洁净工作台；立式自动压力蒸汽灭菌器；架盘药物天平； 满旋振荡器；超低溫冰箱；普通冰箱；PCR仪；数显电热培养箱；超声波细胞破碎仪；基因导 入仪。1. 3药物与试剂凝血酶；牛纤维蛋白原；戊己比妥钢，角叉菜胶，注射用尿激酶；考马斯亮蓝 R-250;低分子量标准蛋白（2KDa-220KDa) 径基氨基甲烧；美国陶氏分装丙締酷胺；甲 叉双丙締酷胺；甘氨酸；过硫酸锭；十二烷基横酸钢（SDS);β-琉基乙醇；TEMED;甲醇； 氯化钢；憐酸氨二钟；憐酸二氨钟；氨氧化钢；氯化巧；氯化钟；二乙基焦碳酸醋己氯甲 烧；乙酸；无水乙醇；琼脂糖；漠化乙锭；N，N，N，N，-四甲基乙二胺；蛋白腺；酵母浸出物； 甘油；氨节青霉素；异丙醇；漠酪蓝；二甲苯青；醋酸钢；琼脂粉；限制性内切酶BgLII， )(hoI，BamHI，NcoI;dNTPMix(lOmM) ;10XReactionBuffer;TaqDNA聚合酶；Platinum pfxDM聚合酶；M拆 04; 10XpfxBuffer; 10XLoadingBuffer;乳糖；PrecisionPlus ProteinTMStandardsDualColor; ;Tween-20;脱脂奶粉；苯甲基横酷氣；PVDF膜 0. 22μ; mHis-tag(27E8)MousemAb；StabilizedPeroxidaseConjugatedGoatAnti-mouse(H+L)； 尿素；硫酸儀；咪挫；YNB;生物素；D-葡萄糖；山梨醇；TritonX-100;NiSe地aroseTM 6FastFlow;BCA蛋白浓度测定试剂盒；UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒（生工 生物工程（上海）有限公司）；Reve;rtAid?FirstStrandcDNASynthesisKit(美国 F'ermentas) 山e饭PCR化rificationKit(德国QIAGEN);新型pUM-T快速克隆试 剂盒（北京百泰克生物技术有限公司）；TIANprepMiniPlasmidKit(天根生化科技（北 京）有限公司）；3，-FullRACECoreSetVer. 2.0(日本Takara) ;5'RACESystemfor RapidAmplificationofcDNABinds,Version2. 0(美国Invitrogen) ;CI〇neEZ祭:重组克 隆试剂盒（南京金斯瑞生物科技有限公司）；TIANprepMiniPlasmidKit(天根生化科技 (本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可口革囊星虫纤溶酶基因，其特征在于：所述可口革囊星虫纤溶酶基因序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许瑞安，王秋艳，熊亚楠，李招发，吴雅清，马国兴，蔡双凤，崔秀灵，
申请(专利权)人：华侨大学，
类型：发明
国别省市：福建;35