一种昆虫抗冷冻蛋白基因序列及其表达纯化方法技术

技术编号：1717904 阅读：353 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

本发明专利技术公开了一种昆虫抗冷冻蛋白基因，其序列为ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１。本发明专利技术还提供了该昆虫抗冷冻蛋白基因的克隆、蛋白表达及纯化方法，主要包括以下步骤：利用特异性引物扩增该昆虫抗冷冻蛋白基因，与原核生物表达元件ＰＴＹＢ１１连接构建表达载体ＰＴＹＢ１１－ａｆｐ，转化表达菌株ＢＬ２１，加入诱导剂诱导，以及纯化抗冷冻蛋白。运用本发明专利技术所述的方法成功地克隆到了昆虫抗冷冻蛋白基因。诱导表达的抗冷冻蛋白占菌体总蛋白的３０％，通过介质纯化后得到的抗冷冻蛋白纯度达９５％以上，说明本发明专利技术提供的方法是高效的。而且，用本发明专利技术所述的表达系统得到的融合蛋白不需要内切酶即可切除标签蛋白，不含多余的氨基酸序列，更接近天然蛋白活性。