一种植物乳杆菌Lp90及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种植物乳杆菌Lp90及其筛选方法和应用，特别涉及一种具有抑制脂肪积累功效的植物乳杆菌。所述植物乳杆菌，名称为Lp90，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10453。在线虫体外筛选模型获得，该植物乳杆菌能降低线虫的脂肪积累60％，具有防止肥胖的潜在功效，可作为益生菌添加到食品、保健品或药品中。同时，本发明专利技术提供了筛选方法，即线虫培养模型，能够定性和定量地检测线虫脂肪积累数据，从而可以方便快速的筛选出具有抑制脂肪积累功效的菌种，准确率高，且经济成本较低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物乳杆菌及其筛选方法和应用，特别涉及一种具有抑制线虫脂 肪积累功效的植物乳杆菌。属于微生物领域。
技术介绍
随着我国国民经济的发展，人民生活水平普遍提高，处于"亚健康"状态以及患有 "文明病"的人也日益增多，肥胖、三高等"富贵病"的发病率不断上升。这些病症很难通过 药物根治，只有建立起健康的生活方式，特别是遵循健康饮食标准，才能达到预防和减轻的 效果。因此，通过针对性地补充富含益生菌的食品来调节人体内环境平衡与生理节律十分 必要。 益生菌是一类能对人体健康起到促进作用的细菌，常见的益生菌包括乳杆菌、双 歧杆菌和链球菌等。这些益生菌产生的有机酸、多糖、过氧化氢、细菌素和特殊酶系等对人 体有调节肠胃菌群平衡、提高免疫力、延缓衰老、改善便秘、腹泻和过敏症状等功效。 然而，如何从大量的微生物中筛选出我们所需要的有特定功能的益生菌是现在益 生菌研宄面临的主要问题之一。体外模型筛选虽然方便快捷，但是与体内环境差异大，而动 物模型个体差异较大，成本昂贵，所耗的人力、物力较大。因此，从研宄成本、技术可行性和 应用前景考虑，结构简单，繁殖时间短，遗传信息清楚，免疫防御系统高度保守的线虫是一 种较好的动物模型，已经成为研宄最为清晰的体外细胞实验模式生物之一。本专利技术探讨的 就是利用线虫模型筛选出具有特殊功效的植物乳杆菌。 植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)是一种常用于酸奶及发酵乳制品生产的 乳酸菌，安全，被列入卫生部公布的《可用于食品的菌种名单》（卫办监督发65号）。 一些植物乳杆菌菌株在发酵过程中可产生胞外多糖，其作为一种大分子聚合物具有一定的 粘性和持水性，是一种免疫因子。以植物乳杆菌作为基础进行筛选，是一种安全有效的方 式。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能抑制线虫脂肪积累的植物乳杆菌。 本专利技术的技术方案如下： 一种植物乳杆菌，名称为Lp90,属于植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)，保 藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号 院3号，保藏编号为CGMCC No. 10453,保藏日期为2015年1月27日。 本专利技术同时提供了上述植物乳杆菌作为食品添加剂的用途。 本专利技术还提供了一种含上述植物乳杆菌的组合物，其包含所述植物乳杆菌的冻干 菌粉。 本专利技术还提供了一种筛选具有抑制脂肪堆积功效的益生菌筛选方法，通过线虫培 养，获得线虫脂肪染色值评价抑制脂肪堆积功效进行筛选。 进一步，具体包括如下步骤： a、设置成分相同的实验组和空白组的线虫培养基； b、在所述实验组的线虫培养基中加入待筛选益生菌菌株； c、将所述实验组和所述空白组的线虫培养基在相同环境下各培养12~15天，分 别获得实验组线虫和空白组线虫； d、将所述实验组线虫和所述空白组线虫分别进行脂肪染色，并计算出各自的脂肪 染色比值； e、若所述实验组线虫的脂肪染色比值比所述空白组线虫低，则步骤b中所述的待 筛选益生菌菌株为具有抑制脂肪堆积功效；反之则待筛选益生菌菌株不具有抑制脂肪堆积 功效。 进一步，所述益生菌菌株为植物乳杆菌。 进一步，所述待筛选益生菌菌株是经过活化接种培养的，其接种量为体积百分比 1 %~3%，其培养条件为温度30~50°C，时间1~48小时。 更进一步，培养条件为温度37~45°C，时间4~24小时。 进一步，所述步骤b中，线虫培养基中加入益生菌菌株的菌悬液浓度为IO7-IO 8个 /ml〇 进一步，所述步骤a中所述的线虫培养基含有大肠杆菌0p50。 进一步，所述步骤a中所述的线虫培养基包括：3g/L氯化钠、2. 5g/L蛋白胨、17g/ L琼脂、25ml/L缓冲液、lml/L胆固醇溶液、lml/L硫酸镁水溶液和lml/L氯化钙水溶液，其 中缓冲液为浓度为lmol/L的K2HPO4-KH2PO4配置的pH6. 0的水溶液，所述硫酸镁水溶液的浓 度为lmol/L，所述氯化妈水溶液的浓度为lmol/L。 根据本专利技术筛选获得的植物乳杆菌Lp90具有抑制脂肪积累，防止肥胖的潜在功 效，可作为益生菌添加到食品、保健品或药品中。同时，本专利技术提供的筛选方法，即线虫培养 模型，能够定性和定量地检测线虫的脂肪积累数据，从而方便快速的筛选出所需菌株，准确 率高，且成本较低。【附图说明】 图1为实施例2中空白组的线虫脂肪染色对比图； 图2为实施例2中实验组1的线虫脂肪染色对比图。【具体实施方式】 本专利技术的原理是通过线虫模型对植物乳杆菌进行筛选，从而获得能抑制线虫脂肪 积累，即具有防止肥胖的潜在功效的益生菌Lp90。 线虫在生长过程中会积累脂肪。本专利技术利用添加了待筛选植物乳杆菌的培养基对 线虫进行培养，并对获得的线虫进行脂肪染色。若该菌株具备抑制线虫脂肪积累的功效，则 所育线虫的脂肪染色比值将小于未加入菌株直接培养的线虫。 合适的线虫培养基通常含有Na+、K+、Mg2+、Ca2+离子，蛋白胨，胆固醇等。也可由 葡萄糖、蔗糖、乳糖等糖类，各种来源的蛋白胨、酵母浸粉/提取物、氨基酸等氮源物质，磷 酸盐（磷酸氢钾、磷酸氢钠等）、有机酸盐（柠檬酸钠、乙酸钠等）、镁盐（硫酸镁等）、锰盐 (硫酸锰等）等营养成分配制而成。其中可加入大肠杆菌0p50作为线虫食物，所述大肠杆 菌0p50为市购商品。 下面结合实施例，对本专利技术进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的， 不能以下述实施例来限定本专利技术的保护范围。 实施例1 :待筛选植物乳杆菌的培养和分离 植物乳杆菌分离自然发酵泡菜汁样本，用无菌吸管取样稀释加入到55°C左右的含 2 %碳酸钙和MRS培养基中，在厌氧条件下，37°C培养72小时，挑选溶钙圈大活力强的菌落 进行划线纯化培养，纯化菌株继续经过初筛：45°C不生长，15°C生长，pH3. 0不生长，获得待 筛选菌株共计85株低温保藏。 其中MRS培养基：麦芽糖5. 0g，蛋白胨10. 0g，牛肉膏8. 0g，酵母膏4. 0g，葡萄糖 20. 0g，磷酸氢二钾2. 0g，乙酸钠5. 0g，硫酸镁0. 2g，硫酸锰0. 05g，柠檬酸三铵2. 0g，吐温 801. 0g，琼脂20. 0g，碳酸钙2. 0g，ρΗ6· 0~6. 5之间，加蒸馏水至lOOOmL，121°C灭菌20min。 实施例2 :通过线虫模型进行菌株筛选和鉴定： 低温保藏的菌株可通过如下步骤活化和扩大培养：将初筛菌株经MRS液体培养基 活化，再将活化后的菌株以1%~3%体积比接种到10% (W/V)固形物的牛乳中，在43°C下 静置培养6小时，尚心分尚获得待测菌株。 本实施例选择的线虫培当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物乳杆菌，其特征在于，名称为Lp90，属于植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.10453，保藏日期为2015年1月27日。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马凯，方曙光，姜甜，冯胜鹏，
申请(专利权)人：江苏紫石微康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32