肠道微生物紊乱精神分裂症动物模型的构建方法技术

本发明专利技术涉及肠道微生物紊乱精神分裂症动物模型的构建方法。本发明专利技术通过人粪便灌胃的方式，将精神分裂症患者紊乱的肠道微生物移植至无菌小鼠，行为学分析发现移植精神分裂症患者肠道微生物的无菌小鼠表现出典型的精神分裂症样行为，即精神运动性兴奋症状。该模型的成功构建为研究肠道微生物在精神分裂症发生中的作用机制提供了新的研究载体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物模型构建领域，具体是一种通过人肠道微生物移植方式构建精神 分裂症动物模型的方法。
技术介绍
精神分裂症是一种高患病率、高复发率、高致残率的慢性迀延性疾病，多起病于青 壮年，表现为情感、思维、意志行为等多方面障碍及精神活动与周围环境不协调。据世界卫 生组织统计，全球精神分裂症患病率约为3. 8%。-8. 4%。，我国约有780万的患者正在遭受精 神分裂症的折磨。精神分裂症不仅严重损害患者的生活质量及社会功能，且给个人、家庭以 及社会带来巨大压力和沉重的精神及经济负担。我国卫生部调查显示，未来20年，包括精 神分裂症在内的精神疾病将造成约100万亿元人民币的经济损失，这将给全球经济带来巨 大冲击。现今，我国精神疾患占疾病总负担的20%，预计到2020年，这一比率将升至25%。因 此，加强精神分裂症的防治已成为亟待解决的重大公共健康问题。但迄今为止，精神分裂症 的发病机制不清，严重制约了该病的有效防治。肠道微生物是人体最大、最直接的外环境， 对维持人体健康发挥着重要作用。研宄表明，肠道微生物可通过"微生物-肠-脑"轴影响 脑功能与行为，成为现今解析神经精神疾病机制新的热点与前沿。临床研宄发现，精神分裂 症患者伴有肠道微生物紊乱。因此，专利技术一种新的精神分裂症动物模型来研宄肠道微生物 在精神分裂症发生中的作用及其分子机制十分必要。
技术实现思路
本专利技术的目的主要是通过人粪便灌胃移植方法，将精神分裂症患者肠道微生物植 入无菌小鼠，并采用多种精神分裂症相关的行为评价方法评价所构建的模型。 为了实现上述目的本专利技术采用的技术方案，肠道微生物紊乱精神分裂症动物模型 的构建方法步骤如下： (1) 分别采集n例精神分裂症患者与n例健康人的中段粪便，液氮速冻，-80°c冰箱保 存，n为正整数； (2) 分别将步骤（1)处理后的粪便于4°C复融，然后分别称取0.Ig分别溶于I. 5mL无 菌PBS溶液，震荡5min，静置5min后取上层悬浮液； (3) 将步骤（2)得到的n例精神分裂症患者的粪便悬浮液，分别取等量混合，取200uL 混合后的精神分裂症患者粪便悬浮液通过灌胃针注入无菌小鼠胃内；同理，取等量的n例 健康人粪便悬浮液混合，取200uL混合后的健康人粪便悬浮液通过灌胃针注入无菌小鼠胃 内； (4) 将步骤（3)粪便灌胃操作2周后的小鼠进行行为学评价。通过采用以上方法构建动物模型本专利技术具有如下的有益效果：无菌鼠是采用无菌 繁殖、无菌饲养培育出新型模式动物，其体内不带有任何的微生物，是目前研宄菌群与疾病 相互关系的最理想模式动物。通过粪便灌胃方式，可将精神分裂症患者及健康对照人群的 肠道微生物分别植入无菌鼠体内，可明确肠道微生物在精神分裂症发生中的作用及其分子 机制。【附图说明】 图1为本专利技术的实施流程图； 图2为本专利技术的行为学结果统计图。【具体实施方式】 纳入精神分裂症患者及健康对照； 诊断标准：由两名主治级别以上的精神科医师独立诊断，所有候选者均需符合DSM-IV精神分裂症发作的诊断标准。 实验动物：实验动物选用4-6周龄无菌昆明小鼠。 主要试剂：磷酸盐缓冲液（PBS)。 主要仪器：12号灌胃针，振荡器。 实验流程参见图1。 1精神分裂症患者与健康对照的纳入标准与排除标准 精神分裂症患者纳入与排除标准 纳入标准：所有纳入的精神分裂症患者均需符合DSM-IV精神分裂症发作的诊断标准。 年龄大于18岁，小于60岁。近期未服用抗生素、益生菌、泻剂等药物。 排除标准：现伴有其它精神疾病或既往有其它精神疾病病史者。合并躯体性疾病 者。实验室常规检查(如肝功能、血常规、尿常规、大便常规）异常者。处于妊娠、哺乳、月经 期的女性研宄对象。药物及物质滥用史。 健康对照纳入与排除标准：无神经精神疾病病史，无药物滥用史或依赖史，无躯体 疾病；常规实验室检测无明显异常。近期未服用抗生素、益生菌、泻剂等药物。 2粪便采集方法与储存方法 采集方法：在避免与尿液混合的情况下取中段粪便，置于15mL无菌离心管内。液氮速 冻。 储存方法：储存于_80°C冰箱内。 3粪便处理以及灌胃移植方法 粪便处理：粪便于4°C复融，每个供体的粪便称取0.Ig分别溶于I. 5mL无菌PBS溶液， 震荡5min，静置5min后取悬浮液。 灌胃移植：每例精神分裂症患者的粪便悬浮液取等量混合，将200uL混合后的精 神分裂症患者粪便PBS悬浮液通过灌胃针注入无菌小鼠胃内。同样，每例健康对照人群的 粪便悬浮液取等量混合，取200uL混合后的健康对照粪便PBS悬浮液以同样方式注入对照 无菌小鼠胃内。 4行为学评价方法 情绪异常及精神运动紊乱是精神分裂症的核心特征。为评估该模型是否成功复制了精 神分裂症患者的行为表型，对植入精神分裂症患者或健康对照人群粪便的无菌小鼠进行旷 野实验(反映运动能力及焦虑情绪)及强迫游泳实验（反映抑郁情绪）。所有行为学均在灌 胃2周后进行，并采用视频监控系统（SMART)记录。 旷野实验：记录小鼠在旷场（45cm*45cm)中30min的运动总距离，中心区域（旷场 内25%区域）运动距离百分比和中心区域(旷场内25%区域）运动时间百分比。其中，运动 总距离反映小鼠的运动能力，该值越大，说明运动能力越强；中心区域运动距离百分比和中 心区域运动时间百分比反映小鼠的焦虑情绪，该值越大，说明焦虑情绪越弱。 旷野实验数据如下：强迫游泳：将小鼠置于水(游泳容器15cm*20cm)中适应lmin，继续记录并分析小鼠后 5min内累计不动时间。强迫游泳的累计不动时间反映小鼠的抑郁情绪，该值越大，说明抑郁 情绪越重。 强迫游泳（FST)实验数据如下：注：以上行为学数据均以均值土标准误表示。 参见图2,本专利技术的行为学结果：与对照组（CON)小鼠相比，精分组（SCZ)小鼠运动 能力增强（图中A)、焦虑行为减少（图中B-C)、抑郁行为减少（图中D)。【主权项】1. ，其特征在于，包括如下步骤： (1) 分别采集n例精神分裂症患者与n例健康人的中段粪便，液氮速冻，-80°C冰箱保 存，n为正整数； (2) 分别将步骤（1)处理后的粪便于4°C复融，然后分别称取0.Ig分别溶于I. 5mL无 菌PBS溶液，震荡5min，静置5min后取上层悬浮液； (3) 将步骤（2)得到的n例精神分裂症患者的粪便悬浮液，分别取等量混合，取200uL 混合后的精神分裂症患者粪便悬浮液通过灌胃针注入无菌小鼠胃内；同理，取等量的n例 健康人粪便悬浮液混合，取200uL混合后的健康人粪便悬浮液通过灌胃针注入无菌小鼠胃 内； (4) 将步骤（3)粪便灌胃操作2周后的小鼠进行行为学评价。2. 根据权利要求1所述，其特征在 于：所述行为学评价包括，对小鼠进行旷野实验和强迫游泳实验。3. 根据权利要求1或2所述，其特征 在于：所述小鼠为4-6周龄无菌昆明小鼠。4. 根据权利要求2所述，其特征在 于：所述旷野实验为记录小鼠在旷场中，30min内运动总距离，中心区域运动距离百分比和 中心区域运动时间百分比。5. 根据权利要求2所述，其特征在 于：所述强迫游泳实验为将小鼠置于水中适应lmin，继续记录并分析小鼠后5min内累计不 动时间。【专利摘要】本专利技术涉及。本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
肠道微生物紊乱精神分裂症动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）分别采集n例精神分裂症患者与n例健康人的中段粪便，液氮速冻，‑80℃冰箱保存，n为正整数；（2）分别将步骤（1）处理后的粪便于4℃复融，然后分别称取0.1g分别溶于1.5mL无菌PBS溶液，震荡5min，静置5min后取上层悬浮液；（3）将步骤（2）得到的n例精神分裂症患者的粪便悬浮液，分别取等量混合，取200uL混合后的精神分裂症患者粪便悬浮液通过灌胃针注入无菌小鼠胃内；同理，取等量的n例健康人粪便悬浮液混合，取200uL混合后的健康人粪便悬浮液通过灌胃针注入无菌小鼠胃内；（4）将步骤（3）粪便灌胃操作2周后的小鼠进行行为学评价。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢鹏，魏泓，刘美玲，曾本华，郑鹏，徐雪娇，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85