一种5，6-二甲基苯并咪唑含量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种5，6二甲基苯并咪唑含量检测方法,其特征在于采用高效液相色谱法进行检测。本发明专利技术采用高效液相色谱法进行5，6-二甲基苯并咪唑的含量检测，无滴定法所使用的强腐蚀性，强刺激性溶剂，安全可靠。且通过外标法对样品中5，6-二甲基苯并咪唑含量进行定量，方法准确，简单、重复性好，灵敏度高，当5,6二甲基苯并咪唑在0.1mg/ml-2.0mg/ml之间时，均有较好的线性关系，其线性相关系数为0.9996。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术本方法属于化学分析领域，尤其涉及一种高效液相法测定5，6-二甲基苯并咪唑含量的方法。
技术介绍
5，6-二甲基苯并咪唑作为维生素B12合成的外源前体物，加入到发酵培养基中，通过微生物的生物合成过程直接结合到VB12分子结构中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是VB12的产量却因加入5，6-二甲基苯并咪唑而有很大的提高。因此5，6-二甲基苯并咪唑含量的高低直接影响了VB12的产量。5，6-二甲基苯并咪唑结构如下：现有技术中，5，6-二甲基苯并咪唑的含量测定采用的是高氯酸滴定法，在检测过程中使用冰乙酸、高氯酸等试剂，具有强腐蚀性，强刺激性，对人体会有灼伤，因此开发一种能够安全、准确测定5，6二甲基苯并咪唑的含量的方法一直是有待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种安全可靠，且方法简易于操作，结果准确，重复性好的5，6-二甲基苯并咪唑含量检测方法。为实现上述专利技术目的所采取的的技术方案为：一种5，6二甲基苯并咪唑含量检测方法,其特征在于采用高效液相色谱法进行检测。所述高效液相色谱法进行检测的具体过程为：采用流动相为溶剂制备标准品溶液和供试品溶液，以10-20ul的进样量进样后，按照外标法计算含量；其中高效液相色谱条件为：色谱柱：C8或C18色谱柱，检测器：DAD检测器，流动相：甲醇：磷酸氢二钠溶液(10g/L)(pH2.5-3.5)＝(25.0:75.0)，甲醇的比例为20.0-30.0％；流速：0.60-1.20ml/min；检测波长：265-276。所述标准品溶液和供试品溶液浓度为0.1mg/ml-2.0mg/ml。本专利技术采用高效液相色谱法进行5，6-二甲基苯并咪唑的含量检测，无滴定法所使用的强腐蚀性，强刺激性溶剂，安全可靠。且通过外标法对样品中5，6-二甲基苯并咪唑含量进行定量，方法准确，简单、重复性好，灵敏度高，当5,6二甲基苯并咪唑在0.1mg/ml-2.0mg/ml之间时，均有较好的线性关系，其线性相关系数为0.9996。附图说明图1为5,6-二甲基苯并咪唑对照品的HPLC检测图谱；图2为5,6-二甲基苯并咪唑的HPLC检测图谱；图3为5,6-二甲基苯并咪唑的线性关系图与回归方程。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好的理解专利技术的技术方案，下面结合具体实施方法对本专利技术所述技术方案作进一步的详细说明。实施例15，6-二甲基苯并咪唑分析样品的制备：标准品溶液的制备：称取5,6-二甲基苯并咪唑标准品50mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀。用1ml注射器取溶液经0.45um的有机滤头过滤，得标准品溶液。供试品溶液的制备：称取5,6-二甲基苯并咪唑样品50mg，精密称定，置于100ml容量瓶中,加流动相适量，溶解后定容至刻度，摇匀。用1ml注射器取溶液经0.45um的有机滤头过滤，得供试品溶液。标准品溶液和供试品溶液各制得5份。色谱分析条件：岛津LC-20A液相色谱仪，Waters C18色谱柱(250*4.6,5um)；流动相：甲醇：磷酸氢二钠溶液(10g/L)(pH3.0)＝(25.0:75.0)；流速：0.80ml/min；检测波长：270nm；进样量10ul，检测器：紫外检测器；柱温箱35℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积为1500428，RSD为0.15％；供试品溶液的5个样品所得峰面积平均值为1454257，RSD为0.09％。根据公式：5,6-二甲基苯并咪唑的含量：a＝A样M标/A标M样*100％。采用外标法将标准品和供试品平均代入即可得供试品5,6-二甲基苯并咪唑的含量为99.55％。本专利技术实施例1所述检测方法的方法学考察：(1)精密度实验称取同一5,6-二甲基苯并咪唑样品，进行6次重复试验，峰面积表1：表1 5,6-二甲基苯并咪唑重复试验的面积次数123456峰面积145523714539701454068145485314533711452912峰面积RSD为0.06％，结果表明，本方法检测5,6-二甲基苯并咪唑含量精密度高，重现性好。(2)线性关系考察根据专利技术所述方法，用50ml的容量瓶配制浓度为10mg/ml的储备液，加流动相分别稀释成0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml的标准溶液，按照本方法，对样品浓度(X)和峰面积(Y)进行数据回归分析，线性回归方程为Y＝2.84143×106+24645，线性关系如图3所示，R＝0.9996，结果表明5,6-二甲基苯并咪唑在0.1mg/ml-2.0mg/ml浓度范围内，峰面积和浓度呈良好的线性关系。(3)加样回收实验准确称取已知含量的5,6-二甲基苯并咪唑适量，再分别精密加入一定量的5,6-二甲基苯并咪唑样品80％，100％，120％，使供试品溶液中的5,6-二甲基苯并咪唑浓度在5,6-二甲基苯并咪唑标准曲线的高、中、低区域各3份，按照本发明项下的操作，依法测定，计算回收率，结果平均回收率为99.58％，RSD为0.58％，表明该方法加样回收率好。综上表明本专利技术所述含量检测方法稳定性好，精密度高，适合5,6-二甲基苯并咪唑的含量测定。实施例2样品及标准品配制同实施例1。色谱分析条件：岛津LC-20A液相色谱仪，Waters C8色谱柱(150*4.6,3.5um)；流动相：甲醇：磷酸氢二钠溶液(10g/L)(pH3.0)＝(20.0:80.0)；流速：0.60ml/min；检测波长：260nm；进样量10ul，检测器：紫外检测器；柱温箱30℃。按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，如图1所示，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积为1558746，RSD为0.25％；供试品溶液的5个样品所得峰面积平均值为1498754，RSD为0.31％。根据公式：5,6-二甲基苯并咪唑的含量：a＝A样M标/A标M样*100％。采用外标法将标准品和供试品平均代入即可得供试品5,6-二甲基苯并咪唑的含量为99.52％。实施例3样品及标准品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种5，6二甲基苯并咪唑含量检测方法,其特征在于采用高效液相色谱法进行检测。

【技术特征摘要】
1. 一种5，6二甲基苯并咪唑含量检测方法,其特征在于采用高效液相色谱法进行检测。
2. 按照权利要求1所述的5，6二甲基苯并咪唑含量检测方法,其特征在于所述高效液相色谱法进行检测的具体过程为：采用流动相为溶剂制备标准品溶液和供试品溶液，以10-20ul的进样量进样后，按照外标法计算含量；
其中高效液相色谱条件为：
色谱柱：C8或C18色谱柱，
检测器：DA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈红丽，
申请(专利权)人：宁夏泰瑞制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：宁夏;64