本发明专利技术涉及一种超声辅助固定化碱性蛋白酶制备菜籽多肽的方法，属于菜籽多肽的加工领域。包括:(1)固定化碱性蛋白酶的制备工艺(2)超声辅助酶解：一定质量的菜籽蛋白配成0.25%~2.50%的蛋白溶液，调节初始pH至9.5，加酶量为1100~2400 U/g，放入功率密度20-70 W/L，多频扫频超声设备中60℃条件下酶解30~90min，制得菜籽蛋白酶解液，过滤，回收固定化酶，冻干上清液制得菜籽多肽。通过酶的固定化技术实现酶的重复利用，并且在工业生产多肽工艺中无需灭酶，简化了生产流程；并且通过超声辅助酶解，提高了菜籽蛋白的水解度，缩短了酶解时间。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种超声辅助固定化碱性蛋白酶制备菜籽多肽的工艺，属于菜籽多肽的加工领域。
技术介绍
我国油菜籽的种植面积和产量均位列世界之首，菜籽柏作为菜籽油加工的副产物，其蛋白含量较高，约为35%?42%。菜籽蛋白氨基酸组成合理，是重要的蛋白质资源。我国是蛋白质资源严重匮乏的国家，开发利用丰富、廉价的菜籽饼柏，将其转化为人类优质的食用蛋白源无疑具有非常重要的社会意义和经济意义。目前，酶水解法是我国制备菜籽肽的主要方法。近些年，我国对酶法制备菜籽肽的研宄越来越多，同时研宄技术也逐渐成熟。但传统的酶解制备菜籽多肽技术仍存在很多不足，如酶的利用率低、酶解时间长、底物转化率低等。通过酶的固定化技术可以实现酶的重复利用，并且在工业生产多肽工艺中无需灭酶，简化了生产流程；通过超声辅助酶解技术，可以提高蛋白的水解度，缩短酶解时间，提高多肽产率。为了解决上述问题，越来越多的科研人员转向了固定化酶技术和超声辅助酶解技术，以降低工业生产多肽的成本。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供，达到提高产物得率、酶制剂可重复回收利用、降低成本、酶解过程连续、不需进行灭酶处理的生产的目的。为了实现上述目的，其具体的技术方案如下: ，按照以下步骤进行: (I)将质量分数为3%的海藻酸钠与碱性蛋白酶混合均匀后，逐滴滴入质量分数为3%的氯化钙溶液中，形成海藻酸钠固定化碱性蛋白酶。(2)将海藻酸钠固定化碱性蛋白酶与料液比0.25%~2.50%菜籽蛋白溶液混合，加酶量为1100~2400 U/g，调节初始pH至9.5，置于脉冲扫频多频超声设备中于60°C反应条件下酶解30~90min。(3)将酶解液离心，取上清液冻干，得到菜籽多肽。其中所述的超声辅助酶解过程采用一种超声模式:脉冲扫频多频超声设备的功率密度 20-70 W/L，脉冲间歇比为 10:3，频率为 33±2/33±2、40±2/33±2、68±2/33±2、28 ± 2/33 ± 2、22 ± 2/33 ± 2、22 ± 2/40 ± 2、28 ± 2/40 ±2、40± 2/40 ±2、68± 2/40 ±2、68±2/68±2、28±2/68±2、22±2/68±2、22±2/28±2、28±2/28±2、22±2/22±2kHz，超声辅助酶解时间为30~90min。本专利技术提供了一种超声辅助固定化碱性蛋白酶制备菜籽多肽的工艺，通过提供超声辅助酶解技术和固定化酶技术相结合的方法酶解菜籽蛋白，不仅保留了蛋白酶原有的优点，而且可反复使用，易于反应液分离，避免杂质混入并能延长酶的使用期和保管期，超声辅助酶解技术的使用大大降低酶解时间，提高产物得率，该方法具有反应条件温和、能耗低、产物性能佳、酶试剂能够重复使用、生产成本低等优点，同时可获得高质量的菜籽多肽。【附图说明】图1为超声辅助固定化碱性蛋白酶制备菜籽多肽的方法工艺路线图； 图2为本专利技术使用的脉冲扫频多频超声设备。【具体实施方式】图1为本专利技术使用的脉冲扫频多频超声设备，为江苏大学自主研制。超声发生器8能发出等频和扫频两种模式的超声波，单台超声波发生器功率为600w。在超声池I中上下对称放置超声波振板上板4和超声波下板5，通过超声波发生器8控制超声波振板上板4和超声波下板5 ;电脑控制器7设定超声波各参数后，控制超声波发生器8，发出符合要求的超声波；3为本专利技术中设备的恒温水浴池，通过温度计2实时监控温度，并根据工作需要调节介质温度；将需要处理的液原料置于样品袋中置于处理液区域6中进行超声波处理。对照例1:未作处理 将料液比为0.50%菜籽蛋白溶液与加酶量为2100 U/g的固定化碱性蛋白酶混合，调节初始pH至9.5，60 °C条件下酶解60 min。此时，菜籽蛋白的水解度为5.36 %，回收酶备用。实施例1 将料液比为0.50%菜籽蛋白溶液与加酶量为2100 U/g的固定化碱性蛋白酶混合，调节初始pH至9.5，超声辅助酶解过程采用一种超声模式:超声功率为60 W/L，脉冲间歇比为10: 3，超声频率为68±2/33±2kHz，60°C条件下超声辅助酶解60 min。此时，菜籽蛋白的水解度为17.42%，比对照例提高了 2.25倍。实施例2 将料液比为0.75%菜籽蛋白溶液与加酶量为2100 U/g的固定化碱性蛋白酶混合，调节初始pH至9.5，超声辅助酶解过程采用一种超声模式:超声功率为70 W/L，脉冲间歇比为10:3，超声频率为68±2/33±2 kHz,60 °C条件下超声辅助酶解60 min。。此时，菜籽蛋白的水解度为11.93%，比对照例提高了 1.23倍。实施例3 将料液比为0.75%菜籽蛋白溶液与加酶量为2100 U/g的固定化碱性蛋白酶混合，调节初始pH至9.5，超声辅助酶解过程采用一种超声模式:超声功率为50 W/L，脉冲间歇比为10: 3，超声频率为68±2/33±2kHz，60°C条件下超声辅助酶解60 min。此时，菜籽蛋白的水解度为12.58%，比对照例提高了 1.35倍。实施例4 将对照例I中的酶与料液比0.50%菜籽蛋白混合，加酶量为2100 U/g，调节初始pH至9.5，超声辅助酶解过程采用一种超声模式:超声功率为60 W/L，脉冲间歇比为10:3，超声频率为68±2/33±2kHz，60°C条件下超声辅助酶解60 min。此时，菜籽蛋白的水解度为10.45%，比对照例高近一倍，说明回收的固定化蛋白酶有一定的酶活力。通过对照例I和实施例1、2、3、4可以看出，菜籽蛋白通过超声辅助酶解后，可以有效提高菜籽蛋白的水解度，从而提高菜籽多肽的产率，并且固定化碱性蛋白酶可以重复利用，降低生产成本。【主权项】1.一种超声辅助固定化酶制备菜籽多肽的方法，其特征在于按照以下工艺步骤进行: (1)将质量分数为3%的海藻酸钠与碱性蛋白酶混合均匀后，逐滴滴入质量分数为3%的氯化钙溶液中，形成海藻酸钠固定化碱性蛋白酶； (2)将海藻酸钠固定化碱性蛋白酶与菜籽蛋白溶液混合，调节初始pH至9.5，放入多频扫频超声设备中于60°C条件下酶解一定时间； (3 )将酶解液离心，取上清液冻干，得到菜籽多肽。2.根据权利要求1所述的一种超声辅助固定化酶制备菜籽多肽的方法，其特征在于步骤(2)中所述菜籽蛋白料液比为0.25%~2.50%ο3.根据权利要求1所述的一种超声辅助固定化酶制备菜籽多肽的方法，其特征在于步骤(2)中所述加酶量为1100~2400 U/g，酶解时间为30~90 min。4.根据权利要求1所述的一种超声辅助固定化酶制备菜籽多肽的方法，其特征在于步骤(2)中功率密度为20~70 ff/Lo5.根据权利要求1所述的一种超声辅助固定化酶制备菜籽多肽的方法，其特征在于步骤(2)中超声频率为 33±2/33±2、40±2/33±2、68±2/33±2、28±2/33±2、.22 ± 2/33 ± 2、22 ± 2/40 ± 2、28 ± 2/40 ± 2、40 ± 2/40 ±2、68± 2/40 ±2、68± .2/68 ±2、.28±2/68±2、22±2/68±2、22±2/28±2、28±2/28±2、22±2/22±2kHz。【专利摘要】本专利技术涉及，属于菜本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种超声辅助固定化酶制备菜籽多肽的方法，其特征在于按照以下工艺步骤进行：（1）将质量分数为3%的海藻酸钠与碱性蛋白酶混合均匀后，逐滴滴入质量分数为3%的氯化钙溶液中，形成海藻酸钠固定化碱性蛋白酶；（2）将海藻酸钠固定化碱性蛋白酶与菜籽蛋白溶液混合，调节初始pH至9.5，放入多频扫频超声设备中于60℃条件下酶解一定时间；（3）将酶解液离心，取上清液冻干，得到菜籽多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马海乐，孟廷廷，任晓锋，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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