一种食品中4-甲基咪唑的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种食品中4-甲基咪唑的检测方法，它采用固相萃取法与液相色谱法相结合的方法检测食品中4-甲基咪唑。与现有技术相比，本发明专利技术方法通过对pH的调节、洗脱剂的选择和样品冷处理的应用，具有检测准确度高，易于操作，且无需大量有机物的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属食品化学领域，尤其涉及。
技术介绍
4-甲基咪唑是一种重要的有机中间体，主要用于合成大宗胃药西咪替丁，也可用 作环氧树脂固化剂、金属表面防护剂和抗溃疡、抗菌素等，其在动物试验中显示能导致动物 长肿瘤，有可能给人体带来致癌风险。焦糖色素是一种在食品工业中应用十分广泛的添加 剂，其能使可乐饮料变成棕褐色，师姐卫生组织允许在食品中添加含有4-甲基咪唑的焦糖 色素，且对于4-甲基咪唑的剂量有所界定，即每公斤不能超多200毫克。 目前，4-甲基咪唑的测定方法有：紫外可见光谱法，薄层色谱法，纸层析法，气相 色谱法，高效液相色谱法等，前述3中方法定量效果较差，后1中方法需要柱前衍生，操作步 骤复杂，而气相色谱法选用的是磷氮检测器，一般实验室很少配备使用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种操作简单，定量准确的食品中4-甲基咪唑 的检测方法，以解决现有技术存在的操作复杂，设备要求高且测量误差大的问题。 为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下： ，它包括如下步骤： (1)将5g固态食物或3g液态食物溶于10~30ml水中，加入10~30ml 10%质 量分数的碳酸钠水溶液后，移至分液漏斗中，加三氯甲烷-无水乙醇混合液40~60ml后， 震荡5~10分钟，静置，完全分层后，将三氯甲烷-无水乙醇萃取液收集得到食品样品，即 有机层，用lmol/L氢氧化钠水溶液调节pH值至8~12 ; (2)依次用乙腈和水活化固体萃取柱后，加入食品样品，用洗脱剂洗脱萃取柱得到 洗脱液，洗脱液干燥后备用； (3)用液相色谱法对洗脱物进行测定，液相色谱条件为： 色谱柱：Polaris C18-A 柱； 测定波长为210~230nm ; 柱温：30°C; 测定波长为210~230nm ; 流动相：乙腈和0· 02mol/L乙酸铵水溶液； 进样量：20 ~30yL; 流速：0· 5 ~1mT,/mi η ； 其中，三氯甲烷-无水乙醇混合液中，三氯甲烷和无水乙醇的体积比为4:1。 所述的固相萃取柱为Chromabond XTR固相萃取柱，基质为硅胶，规格为lOOOmg， 70ml ;其中，固相萃取柱预处理的方法为依次用乙腈和水活化固体萃取柱。 步骤（1)中，三氯甲烷-无水乙醇混合液中，三氯甲烷和无水乙醇的体积比为4 : Io 步骤⑵中，洗脱所用的洗脱剂为二氯甲烷；其中，洗脱剂和食物样品的体积比为 8 ~16 :1〇 步骤（2)中，洗脱液干燥的方法为抽真空干燥。 将食物样品加入固相萃取柱前，可以对食物样品进行冷处理，具体步骤为：将食品 样品加入乙腈中，离心1~30min后于-30~-40°C下保存1~3h。 有益效果：本专利技术与现有技术相比，具有如下优势： 1、本专利技术方法中，在固相萃取前，先将食物样品的pH调节至碱性。由于4-甲基咪 唑存在一对孤对电子，在酸性中易得到质子而变成离子，从而易溶于水；而在碱性中以分子 形式存在，从而易溶于有机溶剂。因此，将样品PH调节为碱性可显著提高4-甲基咪唑的萃 取率。 2、本专利技术方法选用二氯甲烷为洗脱剂，有效减少了有机物质的使用，降低了检测 成本，4-甲基咪唑为低极性，选择极性相近的二氯甲烷，4-甲基咪唑在二氯甲烷中溶解性 好，且不易挥发，可有效减少有机物质的使用。 3、本专利技术方法中，可选择对食物样品进行冷处理。该方法可有效减少有机物质的 用量，去除杂质率低，进一步提升萃取率。 4、选用乙腈和0. 02mol/L乙酸铵水溶液作为流动相，流速为2. Oml/min时，分析时 间较短，峰形尖锐对称，可使样品中有效成分和杂质得到较好分离。【具体实施方式】 标准储备液制备： 准确称取0. 02g4-甲基咪唑标准品于50ml容量瓶中，加入20ml流动相溶解，流动 相为乙腈和0. 02mol/L乙酸铵水溶液，此标准溶液储备液的质量体积浓度为400 μ g/ml。 将标准溶液进行液相色谱检测，检测波长为220nm，仪器基线稳定后连续注入数针 标准溶液，直至相邻2针的峰面积变化小于1. 5%时标准溶液、试样溶液、试样溶液、标准溶 液的顺序进彳丁测定。 计算：将测得的2针试样溶液和试样溶液前后2针标准溶液中的4-甲基咪唑的峰 面积分别进行平均，试样中4-甲基咪唑的质量分数X(% )按下式计算： Aix mix P X =- A\xnn A1 :标准溶液中4-甲基咪唑峰面积的平均值 A2 :试样溶液中4-甲基咪唑峰面积的平均值 Iii1:4-甲基咪挫标样的质量，g m2:试样的质量，g P:标准品种4-甲基咪唑的质量分数，％。 实施例一： 称取4-甲基咪唑标准样品0. 02g于50ml容量瓶中，加入20ml流动相溶解，流动 相为乙腈和0. 02mol/L乙酸铵水溶液，选用乙腈和0. 02mol/L乙酸铵水溶液作为流动相，流 速为2. Oml/min时，分析时间较短，峰形尖锐对称，可使样品中有效成分和杂质得到较好分 离；将容量瓶于超声波浴槽中10分钟，取出后放置室温待用。 称取5g固态食物，加15ml水溶解，加10%碳酸钠20ml，置于250ml分液漏斗中， 加三氯甲烷-无水乙醇（80 :20, v/v)混合液60ml，剧烈震荡6分钟，静置，完全分层后，将 二氣甲烧_无水乙醇萃取液收集得到食品样品，取3. 5ml食品样品，以IOmoΙ/LNaOH溶液调 节其PH至11，然后采用5ml乙腈和5ml水预处理萃取柱，再以40ml二氯甲烷洗脱萃取柱上 的4-甲基咪唑，收集洗脱液干燥处理。 将洗脱液进行液相色谱检测，检测波长为220nm。 实施例1中，4-甲基咪唑回收率为94%，检出限为0. 06mg/L。 实施例2 称取4-甲基咪唑标准样品0. 02g于50ml容量瓶中，加入25ml流动相溶解，流当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中4‑甲基咪唑的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将5g固态食物或3g液态食物溶于10～30ml水中，加入10～30ml 10％质量分数的碳酸钠水溶液后，移至分液漏斗中，加三氯甲烷‑无水乙醇混合液40～60ml后，震荡5～10分钟，静置，完全分层后，将有机层用1mol/L氢氧化钠水溶液调节pH值至8～12；(2)依次用乙腈和水活化固体萃取柱后，加入食品样品，用洗脱剂洗脱萃取柱得到洗脱液，洗脱液干燥后备用；(3)用液相色谱法对洗脱物进行测定，液相色谱条件为：色谱柱：Polaris C18‑A柱；测定波长为210～230nm；柱温：30℃；测定波长为210～230nm；流动相：乙腈和0.02mol/L乙酸铵水溶液；进样量：20～30μL；流速：0.5～1mL/min；其中，三氯甲烷‑无水乙醇混合液中，三氯甲烷和无水乙醇的体积比为4：1。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈健，
申请(专利权)人：上海浩登材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31