本发明专利技术公开了一种SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，以及包含该序列的重组病毒、转基因细胞。本发明专利技术还公开了转基因细胞的用途。本发明专利技术制备得到了重组腺病毒Ad-PTN-Fc，将其感染间充质干细胞后，间充质干细胞可以有效表达PTN蛋白，将感染了重组腺病毒Ad-PTN-Fc的间充质干细胞作为滋养层细胞，可以有效提高造血干/祖细胞的扩增效率，应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种重组腺病毒Ad-PTN-Fc。
技术介绍
多效生长因子（pleiotrophin，PTN指蛋白，Ptn指基因）是一种可同肝素结合的分 泌性的生长/分化因子，具有刺激细胞粘附、迀移、存活、生长和分化等功能，最早是在1989 年由华盛顿医学中心发现，其蛋白分子量大小约为17kD，对肝素有很高的亲和性。 Ptn基因位于染色的提7q33_q34区域，长度大于100kb，由168个氨基酸组成，主 要包括一个与分泌有关的信号序列，其中赖氨酸比例很大，约为21 %。在哺乳动物，如牛， 鼠，人中，PTN的蛋白序列高度保守。PTN蛋白主要表达与发育的胚胎期，在健康的成年组织 中则主要存在于大脑中，其他组织较为罕见。除此之外，在子宫，睾丸Leydig细胞中也能够 检测到一定水平的表达。PTN蛋白具有两个β折叠结构域，通过一折叠的linker连接，而 每个β折叠又含有3个反向平行的β链。在蛋白的两段，分布有大量的赖氨酸，形成于肝 素结合的结构，当结合发生时，蛋白构象会发生改变。有研宄表明这种结构域可以和细胞外 基质的TSR结构域结合，从而接到细胞与胞外基质的相互作用。由于PTN蛋白的序列高度 保守，因此其在细胞生长，分化和发育过程中有十分重要的作用。目前的研宄证实，PTN蛋 白对于血管生成，神经突出生长，诱导细胞迀移和细胞有丝分裂方面都有促进作用。 2010年，美国杜克大学的细胞治疗实验室通过基因芯片筛选的方法发现PTN蛋白 在造血干祖细胞的扩增中有重要的促进作用。他们是通过基因芯片筛选的方法筛选不同基 质细胞中蛋白表达的差异，发现在人脑内皮细胞中，PTN的表达水平比其他细胞高很多，相 比其他非脑内皮细胞多出25倍之多。接下来，他们利用骨髓分离的造血干细胞对PTN在造 血干细胞的扩增中的作用进行了深入的研宄。通过向造血干/祖细胞（HSPC)的培养体系 中加入PTN蛋白，能极大的提高HSPC的扩增倍数。这一发现对于解决HSPC在现有的研宄 水平下的扩增难的问题具有非常深远的意义。 然而，现有促进HSPC扩增的方法，均是在培养体系中直接加入PTN蛋白，由于蛋白 在培养环境下半衰期短，促进HSPC扩增效果难以持续。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种可以表达PTN的重组腺病毒及转基因细 胞，用于培养HSPC。 本专利技术提供了 SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列。 本专利技术还提供了一种重组病毒，它包括SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列。其中，所 述重组病毒是重组腺病毒。其核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。 本专利技术提供了一种包含转基因的细胞，其中，转入的基因是前述的重组病毒。 优选地，所述细胞是包含前述重组病毒的间充质干细胞。 进一步优选地，所述间充质干细胞是脐带间充质干细胞。 本专利技术还提供了前述细胞在制备造血干/祖细胞的滋养层细胞中的用途。 滋养层细胞，也叫饲养层细胞，指可以通过分泌蛋白或者接触促进目标细胞生长， 增殖的细胞层。 本专利技术制备得到了重组腺病毒Ad-PTN-Fc，将其感染间充质干细胞后，间充质干细 胞可以有效表达PTN蛋白，将感染了重组腺病毒Ad-PTN-Fc的间充质干细胞作为滋养层细 胞，可以有效提高造血干/祖细胞的扩增效率，应用前景良好。 显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容 所实现的技术均属于本专利技术的范围。【附图说明】 图1本专利技术重组腺病毒的结构示意图； 图2本专利技术腺病毒感染脐带间充质干细胞后48小时，提取细胞蛋白进行western blot检测蛋白表达水平； 图3本专利技术腺病毒载体感染后的间充质干细胞与CD34+分选的脐带血造血干细胞 共培养扩增示意图； 图4本专利技术腺病毒载体感染后的间充质干细胞与CD34+分选的脐带血造血干细胞 共培养扩增获得的细胞集落形成能力检测。【具体实施方式】 实施例1重组腺病毒的制备 -、重组腺病毒的制备 1.重组腺病毒质粒Ad-PTN-Fc的构建 a.首先查找PTN蛋白序列，在不改变氨基酸序列的情况下对其核酸序列进行 优化，并按照优化的序列通过基因公司合成PTN-Fc序列（SEQ ID NO. 1)，再进一步合成 pShuttle-PTN-Fc 载体。 PTN-Fc 序列（SEQ ID NO. 1): CCACCATGCAGGCACAGCAGTACCAGCAGCAGCGGAGGAAGTTCGCCGCTGCATTTCTGGCCTTCATCT TTATTCTGGCCGCTGTGGACACCGCAGAGGCAGGCAAGAAAGAGAAGCCAGAAAAGAAAGTCAAGAAAAGCGACTGC GGGGAATGGCAGTGGAGCGTGTGCGTCCCAACTTCCGGCGACTGTGGACTGGGAACCAGAGAGGGGACCCGCACAGG TGCTGAATGTAAACAGACCATGAAGACACAGCGGTGCAAAATCCCTTGTAACTGGAAGAAACAGTTCGGCGCCGAGT GCAAGTATCAGTTTCAGGCTTGGGGAGAATGTGACCTGAACACAGCTCTGAAAACTCGAACCGGGTCTCTGAAGAGG GCTCTGCACAATGCAGAGTGCCAGAAGACAGTGACTATTTCTAAACCCTGTGGCAAGCTGACTAAACCCAAGCCTCA GGCAGAGAGTAAGAAAAAGAAAAAGGAGGGAAAAAAGCAGGAAAAGATGCTGGATACAGGTAAGTGGATCCGGAGGG AGGGTHTCTGCTGGAAGCAGGCTCAGCGCTCCTGCCTGGACGCATCCCGGCTATGCAGCCCCAGTCCAGGGCAGCAA GGCAGGCCCCGTCTGCCTCTTCACCCGGAGGCCTCTGCCCGCCCCACTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTGGCTTT TTCCCCAGGCTCTGGGCAGGCACAGGCTAGGTGCCCCTAACCCAGGCCCTGCACACAAAGGGGCAGGTGCTCGGCTC AGACCTGCAAGAGCCATATCCGGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCCACCCCAAAGGCCAAACTCTCCACTCCCT CAGCTCGGACACCTTCTCTCCTCCCAGATTCCAGTAACTCCCAATCTTCTCTCTGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAA AACTCACACATGCCCCACCGTGCCCAGGTAAGCCAGCCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTGCCCT AGAGTAGCCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCCGGGTGCTGACACGTCCACCTCCATCTCTTCCTCAGCACCTGAAC T本文档来自技高网...
【技术保护点】
SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗茂文，陈强，张博，吴文桥，陈瑶瑶，
申请(专利权)人：四川新生命干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。