细胞疫苗和诱导受试者免疫反应的方法技术

本发明专利技术涉及诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的方法。本发明专利技术进一步包括分离的核酸疫苗、细胞疫苗、融合蛋白、表达载体、疫苗和其中使用的免疫原性组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞疫苗和诱导受试者免疫反应的方法
本专利技术涉及诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的方法。本专利技术进一步包括分离的核酸疫苗、细胞疫苗、融合蛋白、表达载体、疫苗和其中使用的免疫原性组合物。
技术介绍
全世界大概有3300万的个体具有人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。许多个体将因为此感染而死亡，据称已经超过2300万例死亡，且每年有270万人被新感染上(InternationalAIDSvaccineinitiative(IAVI),AIDSvaccineblueprint,Achallengetothefield,Aroadmapforprogress,2008,ISBN#0-9792432-8-9)。超过80％的新HIV-1感染出现在发展中世界中。澳大利亚每年大概有10,000例新的丙型肝炎病毒(HCV)感染，该国中有220,000名HCV阳性个体(RazaliK等人,2007,DrugAlcoholDepend91:228-235)，世界上大概有2亿受感染个体且估计每年新增300-400万感染(Bonner,J.E.,Esserman,D.,Evon,D.M.,2012,Reliabilityandvalidityofaself-efficacyinstrumentforhepatitisCantiviraltreatmentregimens,JViralHep19:316-26)。在发展中国家，许多感染是由差的医疗实践引起(Hauri,A.M,Armstrong,G.L,HutinY.J,2004)。全球的疾病负荷可归因于在保健设置中给出的被污染的注射(Int.J.STDAIDS,15(2004),第7-16页)。需要有效的疫苗来控制这些病原体的蔓延。然而，现有的许可的疫苗常常取决于诱导保护的中和抗体，但中和抗体可能无法有效地控制HCV和HIV的攻击。这些病毒迅速地突变并产生逃脱中和抗体(NAb)的突变体。因为常规的疫苗引起NAb，所以需要一种设计针对这些病毒的疫苗的替代方法。需要HIV和HCV的替代疫苗。本专利技术设法解决或至少改善如上所述的现有技术的一个或多个不足，或为消费者提供有用的或商业的选择。
技术介绍
的以上讨论仅仅是意图有助于理解本专利技术。此讨论并非是承认或认可截至申请的优先日期止，任何所提及的材料是或属于常识。专利技术概述根据本专利技术，提供一种诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的方法。所述方法包括以下：使所述免疫原在细胞中表达，以及向所述受试者施用所述细胞，由此诱导促炎性的免疫反应。细胞可以是体细胞。所述方法可以包括在细胞中诱导细胞死亡(坏死)的另一步骤。诱导细胞死亡(坏死)的步骤可以在向受试者施用细胞的步骤前或后进行。诱导细胞死亡的步骤可以在免疫接种后使细胞溶解。细胞溶解可以在施用后在受试者中发生，由此在受试者的免疫系统加工所溶解的细胞时诱导促炎性的免疫反应。典型地，当所述方法包括在细胞中诱导细胞死亡的另一步骤时，细胞作为非抗原呈递细胞、例如体细胞而提供。细胞可以选自同种异体细胞、HEK293T细胞和重组表达人类白细胞抗原(HLA)I和II类分子和Huh7细胞。优选地，体细胞是同种异体的或者自体的。细胞也可以选自无法表达HLA蛋白质的细胞，例如(但不限于)CIR细胞、K562和LCL721.221细胞。或者细胞可以是抗原呈递细胞(APC)。所述方法可以包括使免疫原在细胞中表达的步骤可以进一步包括在细胞表面上呈递所表达的免疫原的步骤的另一步骤。当细胞是APC时，使免疫原在细胞中表达的步骤可以进一步包括在细胞表面上呈递所表达的免疫原的步骤。在细胞表面上呈递所表达的免疫原的步骤可以通过受试者的免疫系统加工所表达的呈递免疫原的APC，由此在受试者中诱导促炎性的免疫反应。APC可以选自同种异体细胞、树突状细胞(DC)、巨噬细胞、B细胞、郎格罕氏细胞(Langerhanscell)、库柏法细胞(Kupffercell)。优选地，APC是同种异体的或者自体的。细胞可以共同表达HLA。细胞表达HLA可以是自然过程的结果或者归因于HLA的重组表达。也就是说，HLA表达可以是细胞通过内源性过程表达HLA的结果。或者，HLA表达可以因重组工程化和蛋白质产生而发生。免疫原可以来源于HCV。当免疫原来源于HCV时，细胞典型地不共同表达HLA。免疫原可以来源于HIV。当免疫原来源于HIV时，细胞可能或可能不共同表达HLA。在一个优选的实施方案中，免疫反应是针对内源性抗原，使得在细胞溶解后，抗原被免疫系统当做外源性抗原处理，导致抗原交叉呈递。在另一个方面，本专利技术提供一种诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的方法，其包括以下步骤：使所述内源性免疫原在体细胞或APC中表达；在所述细胞中诱导坏死；以及将所述细胞施用所述受试者，由此诱导促炎性的免疫反应。本专利技术的进一步特征提供向受试者施用细胞，由此诱导促炎性的免疫反应的步骤，所述步骤通过受试者的APC经由II类通路加工免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD4+T细胞检测。本专利技术的更进一步特征提供向受试者施用细胞，由此诱导促炎性的免疫反应的步骤，所述步骤通过APC经由I类通路加工免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD8+T细胞检测。在另一个方面，本专利技术提供一种诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的方法，其包括以下步骤：使所述内源性免疫原在细胞中表达，由此呈递内源性免疫原；以及向所述受试者施用内源性免疫原呈递细胞，由此诱导促炎性的免疫反应。在一个实例中，细胞是APC。本专利技术的进一步特征提供使免疫原在APC中表达，由此呈递免疫原的步骤，所述步骤通过APC经由II类通路加工免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD4+T细胞检测。本专利技术的更进一步特征提供使免疫原在APC中表达，由此呈递免疫原的步骤，所述步骤通过APC经由I类通路加工免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD8+T细胞检测。本专利技术的方法的细胞可以选自同种异体或自体细胞、树突状细胞(DC)、外周血单核细胞(PBMC)、巨噬细胞、B细胞、郎格罕氏细胞、库柏法细胞、HEK293T细胞、重组表达HLAI和II类分子的HEK293T细胞以及Huh7细胞。优选地，APC是同种异体的或者自体的。免疫原可以是病毒来源。如以上所讨论，免疫原可以是HIV来源。HIV来源的免疫原可以与例如(但不限于)HLAA*0201、HLAB*0702、HLACw7、DRB1、DRB3、DRB4和DRB5等人类白细胞抗原(HLA)一起呈递。免疫原在来源于HIV时，可以选自(但不限于)HIVgag和/或env蛋白。或者，免疫原可以来源于SIV，例如SIVgag和/或env蛋白。在一个实施方案中，诱导或增强受试者中针对HIV蛋白质的免疫反应的方法包括以下步骤：使HIV蛋白质和人类白细胞抗原(HLA)在细胞中表达；在所述细胞中诱导坏死；以及向所述受试者施用表达HIV蛋白质和人类白细胞抗原(HLA)的所述细胞，由此诱导针对HIV蛋白质和HLA蛋白质的促炎性的免疫反应。优选地，HLA选自HLA-A*0101、HLA-A*0301和HLA-A*2901以及HLADP、DQ和DR。HIV抗原可以是任何来源于HIV本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的方法，其包括以下步骤：a.使所述免疫原在细胞中表达；以及b.向所述受试者施用所述细胞，由此诱导促炎性的免疫反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.16 AU 20129020101.细胞在制备用于诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的药物中的用途，其中：a).具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽在所述细胞中表达，其中所述多肽是突变穿孔素，其中所述突变穿孔素的表达受第一启动子的控制，所述第一启动子是SV40启动子，并且其中所述突变穿孔素的DNA序列是SEQIDNO:7；b).所述免疫原在细胞中表达，其中所述免疫原的表达受第二启动子的控制，所述第二启动子是CMV启动子；以及c).所述细胞诱导促炎性的免疫反应，其中，所述第二启动子比所述第一启动子具有更大的相对功效；其中，通过使用双顺反子载体实现所述具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽和所述免疫原的差异表达；并且其中，坏死在所述细胞中被诱导。2.如权利要求1所述的用途，其中所述细胞是体细胞。3.如权利要求1所述的用途，其中所述细胞是APC。4.如权利要求3所述的用途，其中所述表达的免疫原在所述细胞的表面上被呈递。5.如权利要求1到4中任一项所述的用途，其中所述细胞共同表达人类白细胞抗原(HLA)。6.如权利要求1到4中任一项所述的用途，其中所述免疫原来源于HIV。7.如权利要求1到4中任一项所述的用途，其中所述免疫原来源于HCV。8.细胞在制备用于诱导或增强受试者中针对免疫原的免疫反应的药物中的用途，其中：a).具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽在体细胞或APC中表达，其中所述多肽是突变穿孔素，其中所述突变穿孔素的表达受第一启动子的控制，所述第一启动子是SV40启动子，并且其中所述突变穿孔素的DNA序列是SEQIDNO:7；b).所述免疫原在体细胞或APC中表达，其中所述免疫原的表达受第二启动子的控制，所述第二启动子是CMV启动子；c).细胞死亡在所述细胞中被诱导；以及d).所述体细胞或APC诱导促炎性的免疫反应，其中，所述第二启动子比所述第一启动子具有更大的相对功效；其中，通过使用双顺反子载体实现所述具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽和所述免疫原的差异表达；并且其中，坏死在所述细胞中被诱导。9.如权利要求8所述的用途，其中向所述受试者施用所述细胞由此诱导促炎性的免疫反应的步骤是通过所述受试者的APC经由II类通路加工所述免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD4+T细胞检测。10.如权利要求8所述的用途，其中向所述受试者施用所述细胞由此诱导促炎性的免疫反应的步骤通过所述APC经由I类通路加工所述免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD8+T细胞检测。11.细胞在制备用于诱导或增强受试者中针对内源性免疫原的免疫反应的药物中的用途，其中：a).具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽在所述细胞中表达，其中所述多肽是突变穿孔素，其中所述突变穿孔素的表达受第一启动子的控制，所述第一启动子是SV40启动子，并且其中所述突变穿孔素的DNA序列是SEQIDNO:7；b).所述内源性免疫原在细胞中表达，其中所述免疫原的表达受第二启动子的控制，由此呈递所述内源性免疫原，所述第二启动子是CMV启动子；以及c).所述内源性免疫原呈递细胞诱导促炎性的免疫反应，其中，所述第二启动子比所述第一启动子具有更大的相对功效；其中，通过使用双顺反子载体实现所述具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽和所述免疫原的差异表达；并且其中，坏死在所述细胞中被诱导。12.如权利要求11所述的用途，其中所述细胞是APC。13.如权利要求11或12所述的用途，其中使免疫原在细胞中表达由此呈递所述免疫原的步骤通过所述细胞经由II类通路加工所述免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD4+T细胞检测。14.如权利要求11或12所述的用途，其中使免疫原在细胞中表达由此呈递所述免疫原的步骤通过所述细胞经由I类通路加工所述免疫原来进行，所呈递的免疫原可被首次用于实验的CD8+T细胞检测。15.细胞在制备用于诱导或增强受试者中针对HIV蛋白质的免疫反应的药物中的用途，其中：a).具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽在所述细胞中表达，其中所述多肽是突变穿孔素，其中所述突变穿孔素的表达受第一启动子的控制，所述第一启动子是SV40启动子，并且其中所述突变穿孔素的DNA序列是SEQIDNO:7；b).HIV蛋白质和人类白细胞抗原(HLA)在细胞中表达，并且其中所述HIV蛋白和人类白细胞抗原(HLA)的表达受第二启动子的控制，所述第二启动子是CMV启动子；以及c).表达HIV蛋白质和人类白细胞抗原(HLA)的所述细胞诱导针对所述HIV蛋白质的促炎性的免疫反应，其中，所述第二启动子比所述第一启动子具有更大的相对功效；其中，通过使用双顺反子载体实现所述具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽和免疫原的差异表达；并且其中，坏死在所述细胞中被诱导。16.如权利要求15所述的用途，其中在所述细胞中诱导坏死的步骤通过将所述细胞暴露于坏死诱导条件来进行。17.如权利要求15所述的用途，其中在所述细胞中诱导坏死的步骤通过将所述细胞暴露于坏死诱导剂或使所述坏死剂在所述细胞中表达来进行。18.如权利要求15所述的用途，其中所述细胞是APC。19.细胞在制备用于诱导或增强受试者中针对HCV蛋白质的免疫反应的药物中的用途，其中：a).具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽在所述细胞中表达，其中所述多肽是突变穿孔素，其中所述突变穿孔素的表达受第一启动子的控制，所述第一启动子是SV40启动子，并且其中所述突变穿孔素的DNA序列是SEQIDNO:7；b).HCV蛋白质在细胞中表达，由此呈递所述HCV蛋白质，其中所述HCV蛋白质的表达受第二启动子控制，所述第二启动子是CMV启动子；以及c).表达HCV蛋白质的所述细胞诱导针对HCV的促炎性的免疫反应，其中，所述第二启动子比所述第一启动子具有更大的相对功效；其中，通过使用双顺反子载体实现所述具有非凋亡细胞死亡诱导活性的多肽和免疫原的差异表达；并且其中，坏死在所述细胞中被诱导。20.如权利要求19所述的用途，其中在所述细胞中诱导坏死...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·J·郭宛斯，
申请(专利权)人：阿德莱德研究创新私人有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU