一种菱角果壳多酚提取物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种菱角果壳多酚提取物及其制备方法与应用。该菱角果壳多酚提取物以菱角果壳为原料，经过醇提取及大孔树脂纯化方法制备得到。本发明专利技术制备的菱角果壳多酚提取物具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制作用，可作为辅助治疗糖尿病的保健品或药物而进一步研究开发。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术具体涉及，属于生物

技术介绍
α -葡萄糖苷酶专一性地催化含α -葡萄糖苷的蔗糖或麦芽糖水解，α -葡萄糖苷酶抑制剂可抑制小肠上段α -葡萄糖苷酶的活性，阻断碳水化合物分解成单个葡萄糖，从而降低糖尿病病人的餐后血糖。α -葡萄糖苷酶抑制剂作为一种作用独特的口服降糖药物，对于采用饮食控制及运动疗法效果不满意的2型糖尿病患者，可改善糖代谢紊乱，延迟或预防糖尿病慢性血管并发症的发生。菱角为菱科菱属一年生水生植物菱的果实，在我国淡水水域中广泛种植。菱角成熟采收后除少量以鲜果食用直接上市外，大部分去壳以菱角仁加工成各种产品，而果壳则直接弃去。每年在菱角加工过程中会产生大量的废弃菱角果壳。据报道菱角果壳动物实验证明其具有显著的降血糖作用(Kharbanda C.，Motiammad S.A., Hamid H., et al.Trapanatans L.root extract suppresses hyperglycemic and hepatotoxic effects inSTZ-1nduced diabetic rat model.Journal of Ethnopharmacology, 2014, 151, 931-936 ；Yasuda M., Yasutake K., Hino M., et al.1nhibitory effects of polyphenols fromwater chestnut (Trapa japonica) husk on glycolytic enzymes and postprandialblood glucose elevat1n in mice.Food Chemistry, 2014，165，42-49)。但菱角果壳内降血糖活性成分不明确，需要进行更广泛和深入的研宄。菱角果壳中含有大量多酚类化合物，目前尚无对菱角果壳中多酚进行提取的报道。本专利技术的目的是建立一种菱角果壳中多酚成分的提取制备方法，所得提取物可作为辅助治疗糖尿病的保健品或药物而进一步研宄开发，可以使得废弃的菱角果壳得到利用。
技术实现思路
本专利技术的目的是充分利用自然资源，提供一种具有显著抑制α -葡萄糖苷酶活性、从而达到降血糖效果的菱角果壳多酚提取物及其制备方法以及在保健品或药物制备方面的应用。本专利技术提供了菱角果壳多酚提取物的制备方法，包括以下步骤: (1)将菱角果壳干燥粉碎； (2)用30-90%乙醇或甲醇为溶剂提取步骤(I)中得到的菱角果壳干燥粉末，将提取液减压浓缩成浸膏； (3)将步骤(2)中得到的浸膏用水或醇浓度小于50%的乙醇或醇浓度小于50%的甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到上样溶液；所述水或乙醇或甲醇的重量为浸膏重量的10-40 倍； (4)取非极性或弱极性大孔树脂，将步骤(3)得到的上样溶液上样，用水和乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述大孔树脂和菱角果壳重量比为1:0.5-1:10 ; (5)将步骤(4)收集的洗脱液减压浓缩干燥，得菱角果壳多酚提取物。其中步骤(2)的提取方法为:每千克菱角果壳加入5-40L浓度为50_80%的乙醇或甲醇，热回流或浸渍或渗漉提取2-4次，热回流提取每次l_3h，浸渍或渗漉提取每次15天，合并提取液。最佳提取方法为:每千克菱角果壳加入8L浓度为80%的乙醇，渗源提取2次，每次15天，合并提取液。其中步骤(3)的提取方法为:将步骤(2)中得到的浸膏用浸膏重量的10-40倍的水或醇浓度小于50%的乙醇或醇浓度小于50%的甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到上样溶液。最佳提取方法为:将步骤(2)中得到的浸膏用10倍浸膏重量的10%乙醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到上样溶液。其中步骤(4)的纯化方法为:取非极性或弱极性大孔树脂柱，大孔树脂与菱角果壳的重量比为1:1-1:10，将步骤(3)得到的上样溶液上样，采用重量为大孔树脂重量10-20倍的水进行洗脱，后采用重量为大孔树脂重量8-15倍的10-50%乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液。最佳纯化方法为:取与菱角果壳重量之比为1:4的弱极性大孔树脂，将步骤(3)得到的上样溶液上样，采用重量为大孔树脂重量10倍的水进行洗脱，后采用重量为大孔树脂重量8倍的40%乙醇进行洗脱，收集40%的乙醇洗脱液。本专利技术还提供了该菱角果壳多酚提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类的保健品或药物上的应用。本专利技术具有以下优点:本专利技术采用醇提后大孔树脂富集精制的方法制备菱角果壳多酚提取物，工艺简单、成本低，得到的提取物多酚含量高，达到90%以上。本专利技术制备的菱角果壳多酚提取物对α -葡萄糖苷酶具有显著的抑制效果，明显优于阳性对照药阿卡波糖，可作为辅助治疗糖尿病的药物或保健品而进一步研宄开发。【附图说明】图1为本专利技术实施例4中制备的菱角果壳多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用效果图； 图2为阳性对照药阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用效果图。【具体实施方式】下面提供的实施例仅为进一步说明本专利技术，下面的描述仅是为了使本领域的技术人员更好的理解本专利技术，但他们对本专利技术并不构成任何限制。各实施例中使用的仪器设备、化学试剂以及检测方法如下: 仪器与设备:Mettler EL204电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；Molecular DevicesSpectraMax Plus 384 型酶标仪，美国 Molecular Devices 公司；Thermo Finnpipette 精密单通道加样器，赛默飞世尔科技公司Jransferpette-S型精密八通道移液排枪，德国普兰德公司。化学试剂:没食子酸对照品(中国生物药品检定所)；阿卡波糖(拜糖平，拜耳医药保健有限公司出品)；Folin_C1calteu’ s phenol试剂(Sigma-Aldrich公司)；α -葡萄糖苷酶(Sigma-Aldrich 公司);4_nitropheny-a -D-glucopyranose (pNPG): (Sigma-Aldrich公司)；大孔树脂:D101型大孔树脂(非极性大孔树脂，南开大学化工厂)，HPD722型大孔树脂(弱性大孔树脂，河北沧州宝恩化工厂)，LS-305型大孔树脂(弱极性大孔树脂，西安蓝深树脂有限公司)，LS-300B型大孔树脂(弱极性大孔树脂，西安蓝深树脂有限公司)，其余试剂均为分析纯。含量测定方法:(紫外分光光度法) 标准曲线建立: 精密称取没食子酸对照品至棕色容量瓶中，用水溶解，配制成浓度为0.1118mg/mL的标准品溶液。在96孔板中依次加入没食子酸标准品溶液0，5，10，20，30，40，50 μ L。各样品中分别加入50 μ L10% Folin-C1calteu，s试剂，振荡3min后加入50 μ L 10%Na2C03溶液充分混匀，以水溶液补足溶剂至150 μ L，在室温下放置Ih后，将96孔板放入酶标仪中在760nm波长处测定各样品的吸光值，每个检测做3个重复，取其平均值。以吸光值(y)和没食子酸含量(X)绘制总酚含量标准曲线:y=0.1995x+0.0788，R=0.9993，没食子酸在0-5.59 μ g范围内呈良好的线性关系。样品含量测定: 精密称取本文档来自技高网...

【技术保护点】
种菱角果壳多酚提取物的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）将菱角果壳干燥粉碎；（2）用30‑90%乙醇或甲醇为溶剂提取步骤（1）中得到的菱角果壳干燥粉末，将提取液减压浓缩成浸膏；（3）将步骤（2）中得到的浸膏用水或醇浓度小于50%的乙醇或醇浓度小于50%的甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到上样溶液；所述水或乙醇或甲醇的重量为浸膏重量的5‑40倍；（4）取非极性或弱极性大孔树脂，将步骤（3）得到的上样溶液上样，用水和乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述大孔树脂和菱角果壳重量比为1:0.5‑1:10；（5）将步骤（4）收集的洗脱液减压浓缩干燥，得菱角果壳多酚提取物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕寒，马丽，陈剑，李维林，任冰如，简暾昱，梁呈元，刘艳，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32