本发明专利技术公开了一种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，由泊洛沙姆三嵌段共聚物制得的末端抗体化的泊洛沙姆两亲性聚合物，即抗体-泊洛沙姆，并且公开了抗体-泊洛沙姆的制备方法和应用。本发明专利技术既具有抗体或其有效片段作为靶向分子的定向输运功能，又具有泊洛沙姆的亲水亲油的两亲性和温度敏感的性质。本发明专利技术所得的抗体-泊洛沙姆共聚物主要应用于多肽、蛋白、基因及生物显像物质等药物输运载体系统，既可单独作为载体应用，也可掺杂修饰于脂质体、脂质微纳气泡、水凝胶、纳米凝胶、纳米粒、胶束等药物系统中。本发明专利技术制得的抗体化泊洛沙姆不影响抗体活性，制备方法简单、易于操作，便于其在医药递送系统中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及一种抗体共价修饰的末端抗体化泊洛沙姆两 亲性聚合物的制备方法及其在药物输运系统中的应用。
技术介绍
药物的靶向输运技术因载体具有定向或定点递释的功能，具有减毒增效的优点， 而受到广大科学工作者的特别青睐。例如，免疫脂质体的研宄，通过单克隆抗体或其片段修 饰脂质体，借助其表面修饰的抗体与靶细胞表面过度表达或特有的标识物结合，从而使药 物浓集于靶器官、靶组织或靶细胞内，减少其在正常组织中的蓄积，达到增效减毒的作用。 抗体或其片段修饰载体代表了靶向载体输运技术的主流方向。抗体或其片段修饰 载体的制备方法，除了将二者进行简单的物理混合孵育以外，主要是利用了共价修饰手段， 即抗体或其片段共价修饰到连接材料上，然后带有抗体或片段的连接材料嵌入或掺杂到药 物载体内部。例如抗体修饰长循环脂质体，是将抗体共价连接磷脂材料，后嵌入到已经制备 好的长循环脂质体中从而制得。 泊洛沙姆是一类由聚氧乙烯（PEO)和聚氧丙烯（PPO)组成的I3EO-PPO-PEO非 离子型三嵌段共聚物，其结构式为：H0- (CH2CH2O) y- (CHCH3CH2O) x- (CH2CH2O) y-H，商品名为 Pluronic、LutrolF(BASF，Germany)及Poloxamer(ICI)，中文译名为普流罗尼克或泊洛沙 姆。 泊洛沙姆系列含有30多种不同高聚物，均具有表面活性。泊洛沙姆无生理活性、 无溶血性、对皮肤无刺激性、毒性小，作为药用辅料可充当乳化剂、增溶剂、吸收促进剂、缓 释材料等，应用到溶液剂、乳剂、栓剂、软膏、注射剂以及脂质体等新型给药系统中。 因泊洛沙姆具有广泛应用的前景，又因泊洛沙姆末端羟基的活性基团，泊洛沙姆 的修饰衍生化研宄一直受到人们关注，如利用羟基末端和难溶性羧酸类药物共价偶联，增 加难溶性药物的应用前景；又如将泊洛沙姆末端氨基化和肝素等糖胺聚糖成分结合，作为 抗凝血药物载体或生长因子缓控释载体。 目前，国际上尚未报导抗体化泊洛沙姆两亲性聚合物这一结构分子，特别是将泊 洛沙姆末端马来酰亚胺化，进而同巯基化抗体进行结合的制备方法尚未报导。将泊洛沙姆 末端抗体化修饰，以此为连接材料，利用泊洛沙姆的疏水嵌段孵育掺入到载体材料疏水部 位中，从而使载体具有靶向功能。
技术实现思路
专利技术目的：为了克服现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种抗体化泊洛沙姆两 亲性共聚物及其制备方法和应用，将泊洛沙姆共聚物末端马来酰亚胺化，进而同巯基化抗 体进行共价结合，得到抗体化泊洛沙姆，可应用于在载体材料中，使载体既具有抗体的靶向 功能，又具有泊洛沙姆分子的两亲性特点。 技术方案：为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： -种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，由泊洛沙姆共聚物的两末端或单末端经 抗体衍生化而制成，结构通式为抗体-泊洛沙姆共聚物，所述泊洛沙姆共聚物是由聚氧乙 烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段形成的具有羟基末端的共聚物。 可用于与抗体共价连接的材料是多种多样的，主要是含有活性基团的天然材料或 合成材料，如末端羧基化的聚乙二醇磷脂、羟基末端的聚合物类等，而泊洛沙姆共聚物则是 具有羟基末端的共聚物，具两亲性，也易衍生化。将泊洛沙姆共聚物的末端进行抗体化修 饰，并作为连接材料，利用泊洛沙姆共聚物的疏水嵌段将抗体孵育掺入到载体材料疏水部 位中，从而使载体具有靶向功能。 进一步的，在本专利技术中，所述泊洛沙姆共聚物的结构通式为HO-(CH2CH 2O) y-(CHCH3CH2O) x-(CH2CH2O)y-H,所述X和y表示相应嵌段的聚合度，X = 25?30, y = 75? 85。在泊洛沙姆系列中，Poloxamer 188 (Pluronic F68, X = 25 ?30 且 y = 75 ?85)，因 其较高的安全性得到美国FDA批准。 进一步的，在本专利技术中，所述抗体为单克隆抗体，包括完整的单克隆抗体和单克隆 抗体的片段。 -种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，包括以下步骤： 4-1)加入使抗体疏基化的试剂使所述抗体疏基化； 4-2)将所述泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化，得到具有马来酰 亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物； 4-3)将步骤4-1)和步骤4-2)所得的产物混合孵育，纯化，即得抗体共价修饰的泊 洛沙姆共聚物。 抗体共价修饰载体材料的手段有许多，例如利用抗体内源的氨基，与含有羧基的 连接材料，在EDC/NHS催化下进行生成酰胺键的反应；但是由于抗体含有较多数量的氨基， 如采用这种方法进行连接，可能引发抗体各个部位产生随机性交联，不利于抗体中抗原结 合位点的暴露，有可能降低抗原结合位点的活性。而采用巯基修饰抗体可限制抗体中被修 饰部位的数量，增加修饰后抗原结合活性的保留几率。 为了利用抗体的巯基，本专利技术将泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生 化，使抗体通过巯基和马来酰亚胺基形成共价键结合到泊洛沙姆材料上。 进一步的，在本专利技术中，所述步骤4-1)中，抗体巯基化的方法包括在抗体上加入 外源性巯基化试剂使抗体巯基化，或利用还原试剂将抗体的内源性二硫键打开产生巯基使 抗体巯基化。由于抗体自身缺乏巯基或巯基不足，需要通过对其自身的二硫键进行还原或 通过硫醇化试剂制备产生巯基，而后通过形成巯醚键或二硫键使抗体偶联到脂质体上。 进一步的，在本专利技术中，所述使抗体疏基化的试剂包括Traut' s试剂、3-(2- R比啶 二巯基）丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、琥珀酰亚胺-S-乙酰基硫代乙酸酯、琥珀酰亚胺基乙 酰硫代丙酸酯和S-乙酰巯基丁二酸酐。 进一步的，在本专利技术中，所述步骤4-1)中将抗体巯基化的处理方法是：取抗体或 抗体片段适量加入Traut ' s试剂，混合均勾，氮气保护下室温反应2小时，4°C下通过透析方 法除去多余的Traut' s试剂，收集透析袋内的抗体溶液，浓缩蛋白。Traut' s试剂作为使抗 体巯基化的有效试剂，在PH7-9的条件下与伯胺反应，在巯基基团上添加短间隔末梢，可以 作为巯基特异性交联或标记的靶点应用。 进一步的，在本专利技术中，所述步骤4-2)中泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰 亚胺衍生化的方法是： 8-1)将所述泊洛沙姆的羟基末端进行氨基衍生化，得到具有氨基化末端的氨基化 泊洛沙姆共聚物； 8-2)将所述氨基化泊洛沙姆共聚物与马来酸酐混合反应，氨基化末端经马来酰亚 胺衍生化，得到具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物。 进一步的，在本专利技术中，所述泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化 的具体操作步骤是： 9-1)将对甲磺酰氯或磺酰氯溶于二氯甲烷中，慢慢滴加到含有三乙醇胺的泊洛沙 姆和二氯甲烷混合溶液中，冰水浴反应2?10时，然后将含有乙二胺的二氯甲烷溶液缓慢 滴加至反应物中，反应持续6?24小时，反应物通过冷乙醚沉淀，再经二氯甲烷溶解和冷乙 醚沉淀，收集后进行真空干燥，即得氨基化泊洛沙姆共聚物； 9-2)称取所述氨基化泊洛沙姆共聚物和马来酸酐，一同溶于冰醋酸中，常温反应 12h，反应液用乙醚沉淀后得白色沉淀，真空干燥，得中间产物（红外谱图见附图2); 9-3)将所述中间产物溶于乙酸酐，反应液中加入乙酸钠，在90°C下加热，将本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，其特征在于：由泊洛沙姆共聚物的两末端或单末端经抗体衍生化而制成，结构通式为抗体‑泊洛沙姆共聚物，所述泊洛沙姆共聚物是由聚氧乙烯‑聚氧丙烯‑聚氧乙烯三嵌段形成的具有羟基末端的共聚物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：顾宁，田吉来，蒋雯，鞠安，丁晨静，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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