一种干细胞与玻尿酸的组合物与应用制造技术

本发明专利技术涉及美容医学技术领域，尤其涉及一种医用组合物与应用。本发明专利技术提供医用组合物中包括间充质干细胞和玻尿酸。该组合物不但能够在注射后立即生效，且持续时间长。实验证明：30天后，注射了本发明专利技术提供的组合物的裸鼠体内制剂体积和湿重显著(P<0.05)高于玻尿酸组和干细胞组。表明本发明专利技术提供的组合物，在注射初期即能达到立即生效的作用，而在注射一段时间后，仍能保持良好的效果。能够同时兼具起效快、持续时间长的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞与玻尿酸的组合物与应用
本专利技术涉及美容医学
，尤其涉及一种医用组合物与应用。
技术介绍
玻尿酸是由双糖单位(葡萄醛酸-N-乙硫氨基葡糖)组成的直链高分子多醣，是一种组织中自然存在的物质。自然界中广泛地存在于脊椎动物的结缔组织、粘液组织、眼球之晶状体及某些细菌的夹膜中，在组织结构上整体的保养或是细胞之间的运送都具有很重要的功能。特别是在人类皮肤的真皮层中扮演了基质的重要角色，负责保留皮肤的水分。但是，随着年龄的增加，玻尿酸在体内的存量减少，皮肤就会出现皱纹、松弛、缺乏弹性的问题。利用玻尿酸填补受损的胶原纤维，可将肌肤填满撑起，皮肤进而有往上拉提的作用，从而使皮肤滋润光滑、柔软而富有弹性，让肌龄年轻，延缓衰老。天然玻尿酸与人体内玻尿酸的结构一致，可被人体完全分解不会残留体内对人体造成毒副作用，安全性高，因此，玻尿酸作为整形、除皱材料目前被广泛的应用于美容行业中。但是，玻尿酸很容易被机体吸收，注射玻尿酸所维持的效果约在6～9个月之间，为了能够长期维持塑形的效果需要多次注射，增大了感染或排异反应出现的风险，且造成了更多的痛苦。间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)来源于发育早期的中胚层和外胚层，具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。充质干细胞能够产生胶原蛋白，胶原蛋白的主要功能是提供具有高抗张强度的纤维，增强肌肤锁水的作用，改善肌肤的内质结构，提高肌肤弹性与紧致性，并可以达到局部生长塑形。因此，利用间充质干细胞分化成为自身的组织，永久的存在，可起到长期塑形作用。但是，间充质干细胞作为美容整形材料，需要一段在体内分化的时间，不能如玻尿酸般起到立竿见影的效果。因此，进一步研究能够快速起效且长期塑性的美容整形材料十分必要。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种医用组合物与应用，本专利技术提供的组合物作为美容、整形或除皱的制剂能够快速起效且能够达到长期塑性的效果。本专利技术提供给的医用组合物包括：间充质干细胞和玻尿酸。在一些实施例中，玻尿酸的体积分数为80％～90％。在另一些实施例中，玻尿酸的体积分数为85％。在一些实施例中，间充质干细胞的浓度为1.0×104个/mL～1.0×107个/mL。在另一些实施例中，间充质干细胞的浓度为1.0×105个/mL。在另一些实施例中，间充质干细胞的浓度为1.0×106个/mL。脂肪干细胞具有很好的自我复制能力，并且可以分化成脂肪细胞，成为皮肤组织的一部分，另外脂肪干细胞分泌出很多细胞因子，有利于皮肤保持良好的弹性，但是，脂肪干细胞在体内的分化需要时间，因此，注射后需一段时间才能起效。玻尿酸作为注射用的组织填充物，用于改善面部皱纹，面部微整形，以及矫正外伤或青春痘留下真皮层的疤痕，注射后立刻起效，但在人体内可以被降解、吸收，持续时间短，一般只能维持3个月～4个月。而本专利技术提供的组合物注射后可以同时具备玻尿酸的快速起效和干细胞持续时间长的优点。在一些实施例中，间充质干细胞为脂肪干细胞。本专利技术提供的组合物中的间充质干细胞可为自制也可为市场购得，本专利技术对此不作限定，但其实施皆在本专利技术的保护范围之内。在一些实施例中，脂肪干细胞的制备方法为：将脂肪组织经Ⅰ型胶原酶消化后，培养至80％融合，经胰酶消化后继代培养，获得脂肪干细胞。在另一些实施例中，Ⅰ型胶原酶占所述脂肪组织的质量分数为0.25％。在另一些实施例中，培养的培养基为含有15％FBS的DMEM-F12培养基；培养的接种浓度为1.0×105个/mL；培养的条件为37℃、5％CO2、饱和湿度。在另一些实施例中，胰酶的量为5mg。在另一些实施例中，继代培养的培养基为含有15％FBS的DMEM-F12培养基；培养的接种浓度为5.0×104个/mL；培养的条件为37℃、5％CO2、饱和湿度。具体的，脂肪干细胞的制备方法包括以下步骤：步骤1：将脂肪组织与质量分数为0.5％的Ⅰ型胶原酶混合，混合的体积比为1:1，37℃、100rpm消化1h后，加入FBS终止消化；步骤2：1500rpm离心5min，弃除脂肪组织和含有I型胶原酶的FBS，以PBS清洗后，以培养基重悬后培养至80％融合；重悬的浓度为1.0×105个/mL，培养的条件为37℃、5％CO2、饱和湿度，24h后更新培养基后，每3天更新培养基；步骤3：弃除培养基，加入质量分数为0.25％的胰酶，37℃、5％CO2消化2min，以培养基终止消化后，弃除培养基；步骤4：以密度为5×104个/mL接种于培养基，继代培养；培养基为含有FBS的DMEM-F12培养基，FBS的体积分数为15％。本专利技术提供的干细胞与玻尿酸的组合物在制备美容、除皱、整形制剂中的应用。本专利技术提供的医用组合物中包括间充质干细胞和玻尿酸。本专利技术提供的组合物兼具干细胞和玻尿酸在美容、除皱、整形中的优点，不但能够在注射后立即生效，且持续时间长。经实验证实，3天时，注射了本专利技术提供的组合物的裸鼠和注射了玻尿酸的裸鼠体内制剂体积和重量相差不大，但注射了脂肪干细胞的裸鼠未见新组织产生；10天时，注射玻尿酸的裸鼠体内制剂体积和湿重皆出现降低现象，注射了本专利技术提供的组合物的裸鼠体内制剂的体积和湿重略有增加，而注射了脂肪干细胞的裸鼠仍未见新组织产生；30天后，注射了本专利技术提供的组合物的裸鼠体内制剂体积和湿重显著(P&lt;0.05)高于玻尿酸组和干细胞组。表明本专利技术提供的组合物，在注射初期即能达到立即生效的作用，而在注射一段时间后，仍能保持良好的效果。能够同时兼具起效快、持续时间长的特点。附图说明图1示实施例1制备的脂肪干细胞表面抗原检测结果；其中，图1-a示抗原CD44的检测结果；图1-a示抗原CD44的检测结果；图1-b示抗原CD73的检测结果；图1-c示抗原CD90的检测结果；图1-d示抗原CD105的检测结果；图1-e示抗原CD34的检测结果；图1-f示抗原CD45的检测结果；图1-g示抗原HLA-DR的检测结果；图2示脂肪干细胞成脂诱导21天后分化结果；其中，图2-a示成脂诱导前脂肪干细胞油红O染色结果(10×)；图2-b示成脂诱导后脂肪干细胞油红O染色结果(10×)；图3示脂肪干细胞成骨诱导28天后分化结果；其中，图3-a示成脂诱导前脂肪干细胞茜素红染色结果(10×)；图3-b示成脂诱导后脂肪干细胞茜素红染色结果(10×)。具体实施方式本专利技术提供了一种医用组合物与应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1脂肪干细胞的制备将人体脂肪组织分装至50mL离心管中，每管20mL。每管中加入等体积的0.5％Ⅰ型胶原酶(终浓度为0.25％)，充分混匀，封口，转移至恒温空气摇床中，37℃、100R消化1h。每管加入4mL的FBS，终止消化，混匀。离心，1500rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种医用组合物，其特征在于，包括：间充质干细胞和玻尿酸。

【技术特征摘要】
1.一种美容、除皱、整形的医用组合物，其特征在于，由脂肪间充质干细胞和玻尿酸组成；其中，所述玻尿酸的体积分数为85％；所述脂肪间充质干细胞的浓度为1.0×105个/mL；或所述玻尿酸的体积分数为90％；所述脂肪间充质干细胞的浓度为1.0×106个/mL。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞的制备方法为：将脂肪组织经Ⅰ型胶原酶消化后，培养至80％融合，经胰酶消化后继代培养，获得脂肪间充质干细胞。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述Ⅰ型胶原酶占所述脂肪组织的质量分数为0.25％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，王一飞，葛啸虎，王小燕，马岩岩，卢瑞珊，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44