多重荧光PCR检测MRSA用的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种多重荧光PCR检测MRSA用的试剂盒及检测方法,该试剂盒，其特征在于包括：mecA正向引物；mecA反向引物；femA正向引物；femA反向引物；femB正向引物；femB反向引物；mecA探针；femA探针；femB探针。检测方法包括以下步骤：提取样品DNA；对步骤A中的样品DNA进行荧光PCR扩增，对扩增后的产物进行HRM分析后判定结果。本发明专利技术的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种组分和配比合理，使用方便，检测快捷，准确，适用于多重荧光PCR检测MRSA的试剂盒；本发明专利技术另一个目的是提供一种采用上述试剂盒检测MRSA的方法，该方法操作简便、快速，成本低，检测结果准确。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设计一种多重荧光PCR检测MRSA用的试剂盒，本专利技术还涉及一种采用上述试剂盒检测MRSA的方法。本专利技术基于Taqman技术，建立了一种多重荧光PCR技术，可同时检测金黄色葡萄球菌耐甲氧西林methicillin resistant staphylococcus aureus,简称MRSA的三种相关基因，即mecA、FemA、FemB。
技术介绍
由于抗生素的使用，细菌也为了自身发展而不断变异，就形成了细菌对抗菌药物的耐药性，使本来有效的抗菌药物在遇到耐药菌引起的感染时疗效下降甚至完全无效。金黄色葡萄球菌至今仍然是国内外医院获得性感染最常见的细菌之一。随着β-内酞胺类抗生素在临床的广泛应用，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)在临床分离的葡萄球菌中比例不断增加，MRSA几乎对所有β-内酞胺类抗生素都耐药。1996年，又出现了首例对万古霉素敏感性下降的MRSA。传统细菌耐药性方法虽然能够满足临床的部分需要，但这些方法仍然存在一些缺点，例如检测时间较长本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多重荧光PCR检测MRSA用的试剂盒，其特征在于包括：mecA正向引物：5’‑GGTCCCATTAACTCTGAA‑3’；mecA反向引物：5’‑TGTGCGATTGTATTGCTA‑3’；femA正向引物：5’‑AAGCGTTAAAGGATATTGAA‑3’；femA反向引物：5’‑CCACCAGCATAATAAACAA‑3’；femB正向引物:5’‑CCACCAGCATAATAAACAA‑3’；femB反向引物:5’‑CCGAATTTGACAACTTTG‑3’；mecA探针：5’‑(FAM)ACGATTGTGACACGATAGCCATCT(Eclipse)‑3’；femA探针：5’‑(...

【技术特征摘要】
1.一种多重荧光PCR检测MRSA用的试剂盒，其特征在于包括：
mecA正向引物：5’-GGTCCCATTAACTCTGAA-3’；
mecA反向引物：5’-TGTGCGATTGTATTGCTA-3’；
femA正向引物：5’-AAGCGTTAAAGGATATTGAA-3’；
femA反向引物：5’-CCACCAGCATAATAAACAA-3’；
femB正向引物:5’-CCACCAGCATAATAAACAA-3’；
femB反向引物:5’-CCGAATTTGACAACTTTG-3’；
mecA探针：5’-(FAM)ACGATTGTGACACGATAGCCATCT(Eclipse)-3’；
femA探针：5’-(HEX)AAAGCACACAACAAGCGAGATAACT(Eclipse)-3’；
femB探针：5’-(CY5)AGCCATCATTCTCACGGGTAACT(BHQ3)-3’。
2.根据权利要求1所述的一种多重荧光PCR检测MRSA用的试剂
盒，其特征在于还包括有PCR反应液、dNTPs混合液、Taq聚合酶、
DNA模版和水。
3.根据权利要求2所述的一种多重荧光PCR检测MRSA用的试剂
盒，其特征在于制备20μL反应体系由以下组分组成：
4.根据权利要求3所述的一种多重荧光PCR检测MRSA用的试
剂盒，其特征在于所述各2.5mM的dNTPs混合液由2.5mM dATP、2.5
mM dCTP、2.5mM dTTP、2.5mM dGTP组成。
5.一种采用如权利要求3所述的多重荧光PCR检测MRSA用的
试...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡先全，刘恭源，李云松，张鹏杰，萧绮倩，赵美转，张磊，
申请(专利权)人：蔡先全，
类型：发明
国别省市：广东;44