雷帕霉素作为疫苗佐剂的用途及制备方法技术

本发明专利技术涉及雷帕霉素作为疫苗佐剂的用途及制备方法。本发明专利技术首次揭示雷帕霉素具有佐剂活性，能够促进一些免疫因子的生成，并且，其与单磷酸脂质A共同应用，可发挥增效的效果，极大地增强机体对于抗原的免疫反应。

【技术实现步骤摘要】
雷帕霉素作为疫苗佐剂的用途及制备方法
本专利技术属于免疫学以及药学领域；更具体地，本专利技术涉及雷帕霉素作为疫苗佐剂的用途及制备方法。
技术介绍
应用佐剂是优化抗原免疫效果的重要手段，佐剂不仅可以从量方面增强疫苗诱导的免疫反应，提高中和性抗体的滴度；还可以从质方面优化免疫反应，比如增强记忆性B细胞和T细胞的数量并延长它们的存活时间，达到比“自然感染”本身诱导的免疫反应更优越的保护效果。迄今为止，人用佐剂只有三种，分别为铝佐剂、MF59和单磷酸脂质A(MPL)，远远不能满足众多疫苗研发的需要，因此研发佐剂势在必行。铝佐剂主要是能够加强Th2型抗体反应，这对于清除胞外病原菌和寄生虫感染有效，但对于治疗胞内病毒感染疗效甚微。MPL也仅在针对人乳头瘤病毒HPV和乙型肝炎病毒HBV的疫苗策略中有效。研究表明，MPL刺激树突细胞仅能诱导有限的IL-12，使得它在增强Th1反应方面的能力有限。而T细胞介导的免疫反应和IFNγ的分泌已被证明在清除HIV，HCV和TB感染，以及治疗癌症中起关键作用。因此，研发能够成功诱导T细胞反应的疫苗佐剂策略就尤为迫切。mTOR信号通路是调控细胞生长与增殖的一个关键通路，该通路将从营养分子、能量状态以及生长因子传来的信号整合在一起，调控大量的生命过程。该通路的失调与多种人类疾病相关，包括癌症、糖尿病与心血管疾病。最近的研究表明mTOR也参与调节天然免疫和适应性免疫，因此是一个具有多种功能的调节分子。雷帕霉素(Rapamycin)是一种能够特异性抑制mTOR的小分子化合物，它在1999年已被美国FAD批准用于肾移植的抗排异治疗，目前也正被研究用于治疗癌症等疾病。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供雷帕霉素作为疫苗佐剂的用途及制备方法。在本专利技术的第一方面，提供一种免疫增强剂组合物，该组合物包括雷帕霉素或其衍生物和单磷酸脂质A(MPL)。在另一优选例中，所述的免疫增强剂组合物中，雷帕霉素或其衍生物与单磷酸脂质A按照重量比为(0.2～20):1；较佳地为(0.5～15):1；更佳地为(2～12):1。在另一优选例中，所述免疫增强剂组合物中还包括：药学上可接受的载体(如PBS或生理盐水)。在另一优选例中，雷帕霉素或其衍生物和单磷酸脂质A在所述的组合物中的含量是有效量的，例如在组合物中占0.01-80%(w/w)；较佳地0.1-20%(w/w)。在另一优选例中，所述免疫增强剂组合物中还包括：抗原；较佳地，所述抗原包括(但不限于)：灭活或减毒的病毒颗粒、假病毒颗粒(VLP)或者多肽抗原、蛋白质抗原。在另一优选例中，所述的抗原与单磷酸脂质A按照重量比为(0.2～20):1；较佳地为(0.5～10):1；如1:1，2:1，1:2。在另一优选例中，抗原在所述的组合物中的含量是有效量的，例如在组合物中占0.01-80%(w/w)；较佳地0.1-20%(w/w)。在另一优选例中，所述的抗原包括(但不限于)：乙型肝炎病毒的表面抗原，丙型肝炎病毒抗原、艾滋病毒抗原、肿瘤抗原或卵清蛋白。在另一优选例中，所述的雷帕霉素的衍生物包括(但不限于)：替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、Deforolimus(AP23573)，Zotarolimus，Ridaforolimus，CCI-779，RAD001，ABT-578，SDZRAD，SAR943，1139-52BiolimusA9或其它类型的mTOR抑制剂，包括(但不限于)Ku0063794，PP242，PI-103，AZD8055，Palomid529，AZD2014，Torin1，SNS-032。在本专利技术的另一方面，提供了一种药盒，所述药盒中含有所述的免疫增强剂组合物；或所述药盒中含有分别独立包装的雷帕霉素或其衍生物和单磷酸脂质A。在另一优选例中，所述的药盒中还包含有抗原。在本专利技术的另一方面，提供雷帕霉素或其衍生物的用途，用于制备增强单磷酸脂质A的佐剂活性的制剂。在本专利技术的另一方面，提供一种制备所述的免疫增强剂组合物的方法，所述方法包括：将雷帕霉素或其衍生物和单磷酸脂质A(MPL)进行混合，获得免疫增强剂组合物。在一个优选例中，雷帕霉素或其衍生物和单磷酸脂质A按照重量比为(0.2～20):1；较佳地为(0.5～15):1；更佳地为(2～12):1进行混合。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、雷帕霉素增强LPS诱导BMDC产生IL-12和IL-23，而抑制IL-10的产生。图2、雷帕霉素对BMDM中LPS诱导基因表达的影响。(a)雷帕霉素对BMDM中LPS诱导的细胞因子转录表达的影响；(b)雷帕霉素对BMDM中LPS诱导的共刺激分子转录表达的影响；(c)雷帕霉素对BMDM中LPS诱导的促炎因子和趋化因子转录表达的影响。图3、雷帕霉素增强OVA特异性T细胞反应和抗体反应。(a)雷帕霉素促进OVA特异性Th1和CD8+细胞反应；(b)雷帕霉素促进OVA特异性IgG2b和IgG2c抗体滴度。图4、雷帕霉素能显著增强MPL的佐剂活性。(a)雷帕霉素提高MPL增强的HBsAg特异性抗体反应；(b)雷帕霉素提高MPL增强的HBsAg特异性CD4+和CD8+T细胞反应；(c)雷帕霉素提高MPL增强的HBsAg特异性Th2细胞反应；(d)雷帕霉素提高MPL增强的HBsAg特异性Th17细胞反应。图5、不同剂量的雷帕霉素都能显著增强MPL的佐剂活性。(a)不同剂量的雷帕霉素提高MPL增强的HBsAg特异性抗体反应；(b)不同剂量的雷帕霉素提高MPL增强的HBsAg特异性CD4+和CD8+T细胞反应。图6、在同源性初免-增强的免疫方案中，雷帕霉素能显著增强MPL的佐剂活性。具体实施方式本专利技术人经过长期而广泛的研究，意外地发现雷帕霉素具有佐剂活性，能够促进一些免疫因子的生成。并且，所述的雷帕霉素与单磷酸脂质A(MPL)共同应用，可发挥增效的效果，极大地增强机体对于抗原的免疫反应。基于此完成了本专利技术。雷帕霉素及其用途雷帕霉素的分子式为C51H79NO13，其结构式为式(I)：雷帕霉素的衍生物也可被包含在本专利技术中。所述的雷帕霉素的衍生物包括但不限于：替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、Deforolimus(AP23573)，Zotarolimus，Ridaforolimus，CCI-779，RAD001，ABT-578，SDZRAD，SAR943，1139-52BiolimusA9，以及其它类型的mTOR抑制剂，包括但不限于：Ku0063794，PP242，PI-103，AZD8055，Palomid529，AZD2014，Torin1，SNS-032。这些衍生物与雷帕霉素具有类似的结构(如母核结构相同)或相同的作用机制，从而也可被应用于本专利技术中。例如，KoichiAraki1等；Nature.2009July2;460(7251):108–112.doi:10.1038/nature08155.mTORregulatesmemoryCD8Tcelldifferentiation和AmielE等，JImmunol.2012Sep1;189(5):2151-8.do本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫增强剂组合物，其特征在于，该组合物包括雷帕霉素或其衍生物和单磷酸脂质A。

【技术特征摘要】
1.一种免疫增强剂组合物，其特征在于，该组合物包括雷帕霉素和单磷酸脂质A。2.如权利要求1所述的免疫增强剂组合物，其特征在于，雷帕霉素与单磷酸脂质A按照重量比为(0.2～20):1。3.如权利要求2所述的免疫增强剂组合物，其特征在于，雷帕霉素与单磷酸脂质A按照重量比为(0.5～15):1。4.如权利要求3所述的免疫增强剂组合物，其特征在于，雷帕霉素与单磷酸脂质A按照重量比为(2～12):1。5.如权利要求1所述的免疫增强剂组合物，其特征在于，所述免疫增强剂组合物中还包括：药学上可接受的载体。6.如权利要求5所述的免疫增强剂组合物，其特征在于，所述免疫增强剂组合物中还包括：抗原；所述抗原选自：灭活或减毒的病毒颗粒、假病毒颗粒或者多肽抗原。7.如权利要求6所述的免疫增强剂组合物，其特征在于，所述的抗原包括：乙型肝炎病毒的表面抗原，丙型肝炎病毒抗原、艾滋病毒抗原、肿瘤抗原或卵清蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖晖，袁川评，臧爱萍，杜旻，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31