本发明专利技术公开了一种低聚糖酯，其是由天然单糖经聚合后再与油酸进行酯化反应后制得的，本发明专利技术还公开了该低聚糖酯在制备疫苗佐剂中的应用，并具体公开了含该低聚糖酯的疫苗佐剂及由该疫苗佐剂制备疫苗的方法。本发明专利技术制备的低聚糖酯作为亲油性表面活性剂可制备得到安全、稳定的W/O/W型疫苗佐剂，最终制备得到的W/O/W型疫苗佐剂可制备成稳定性强、安全性好，抗体效价高的动物疫苗。本发明专利技术解决了亲油性表面活性剂的制备难题，打破了法国在W/O/W型油乳佐剂技术领域的垄断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗佐剂原料的制备及疫苗制备领域，具体涉及一种低聚糖酯及其在 制备疫苗佐剂中的应用。
技术介绍
联合国粮农组织和国际兽疫局将口蹄疫疾病列为其成员国共同防范的A类传染 病中的第一位传染病。"国家中长期科学与技术发展规划纲要"将"畜禽健康养殖与疫病防 控"列为农业重点领域中的急需关键技术。我国每年仅兽用口蹄疫疫苗用量猪84. 15亿头 份，牛羊22. 02亿头份，而且每年在以10%的速度递增。因此疫苗的市场需求量很大。 疫苗佐剂可以提高疫苗的免疫作用效果，其在免疫中的主要作用是提升机体免疫 系统对抗原或免疫原的免疫应答反应，增强免疫反应强度和反应的持久性，从而提高机体 对病毒或细菌的抵抗力。常见佐剂主要包括铝盐佐剂、油乳佐剂、表面活性剂类佐剂、细菌 微生物类佐剂、蜂胶佐剂、细胞因子类佐剂等。 目前国内W/0/W (水包油包水）型油乳佐剂，全部依赖于法国SEPPIC公司生产的 206佐剂，进口额高达3亿元/年。由于法国一直实行严格的技术封锁，不转让不合作新型 佐剂技术，因此我国迫切需要研发能与法国206技术水平相当的新型疫苗佐剂。 206佐剂为W/0/W型佐剂，目前国内此类佐剂开发的技术瓶颈在于，该类佐剂中需 含有一种亲油性表面活性剂，这种表面活性剂与其他表面活性剂复配使用，可以形成一种 稳定的自乳化体系，制备W/0/W乳剂，目前国内还没有找到这样一种合适的表面活性剂。 此外，从国际上表面活性剂品种发展趋势来看，表面活性剂开始倾向于生态安全、 无环境污染、完全生物降解、功能性强、化学稳定性及热稳定性好、成本低的方向发展。 糖基表面活性剂，是以糖类制成的表面活性剂，原料来自天然可再生资源，环境相 容性好，有很好的皮肤兼容性和极佳的生物可降解性，在制药、生物化学和生物医学方面有 着潜在的应用前景。因此，糖基表面活性剂正是符合国际表面活性剂发展需求的产品。 糖基表面活性剂可以与其它表面活性剂复配，不但可以改进自身的性能，而且可 以开发出新的应用领域或产品，极大的拓宽了糖基表面活性剂的应用领域。因此，利用糖 类资源制备一种亲油性的糖基表面活性剂并将其应用于制备W/0/W型疫苗佐剂中，以替代 206佐剂，进而利用W/0/W型疫苗佐剂制成疫苗便成为了有待解决的难题。
技术实现思路
针对以上技术现状，本专利技术的目的是提供一种低聚糖酯的制备方法，并提供低聚 糖酯作为亲油性表面活性剂在制备安全、稳定的W/0/W型疫苗佐剂以替代206佐剂并最终 制备成动物疫苗中的应用。 为此，本专利技术采用的技术方案如下： 一种低聚糖酯，其制备方法如下： (1)聚合反应：在氮气惰性氛围的保护下，将天然单糖于搅拌下加热至熔融状态，反应 1-6 h，生成天然单糖聚合物； (2) 酯化反应：将分别将油酸和催化剂于搅拌下逐滴加入到天然单糖聚合物中，于 180°C _280°C下反应1-6 h，自然冷却，生成低聚糖酯粗品； (3) 将所述低聚糖酯粗品经纯化和干燥即可。 优选地，所述的天然单糖为葡萄糖、果糖、甘露糖、核糖或木糖中的任何一种；所述 的催化剂为磷酸、亚磷酸、碳酸钠、磷酸二氢钾中的一种或几种的混合物。 具体地，步骤（3)中纯化的具体步骤为：将所述低聚糖酯粗品用甲醇萃取，萃取液 用NaOH溶液中和、水洗除去未反应的磷酸和单糖，最后用正己烷洗除残留的油酸，蒸去溶 剂，干燥备用。 优选地，所述油酸和天然单糖的质量比为1:0. 5-10,质量比催化剂：（单糖+油酸） =1-10:1000 o 本专利技术还提供了上述的低聚糖酯在制备疫苗佐剂中的应用。 本专利技术还提供了包含上述低聚糖酯的疫苗佐剂，其包括如下质量百分比的组分： 50-90%兽用注射级轻质矿物油，2. 5-15%低聚糖酯，7-30%亲水性表面活性剂，0. 5-5%助剂。 其中，所述的亲水性表面活性剂选自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯(优选聚氧乙 烯失水山梨醇脂肪酸酯T-20、T-40、T-60、T-80 )、聚氧乙烯蓖麻油(优选EL20、EL30、EL40 )、 聚氧乙烯氢化蓖麻油(优选HEL20、HEL40)、聚氧丙烯甘露醇二油酸酯、聚氧乙烯蔗糖脂肪酸 酯中的一种或两种以上；所述助剂选自聚丙二醇PPG200、PPG400、PPG600、PPG800,维生素 E，BHA (丁基羟基茴香醚），BHT (2, 6-二叔丁基-4-甲基苯酚），角鲨稀，角鲨烷中的一种或 两种以上。 上述疫苗佐剂的制备方法为：按比例将所述兽用注射级轻质矿物油、低聚糖酯、亲 水性表面活性剂和助剂在转速SOOrpm下进行搅拌混合，即获得W/0/W型疫苗佐剂。 本专利技术还进一步提供了由上述疫苗佐剂制备疫苗的方法，其特征在于其步骤如 下：将所述疫苗佐剂于121°c蒸汽灭菌30 min，自然冷却，放入乳化罐中，控制乳化罐内温 度为30±2°C ;将温度与乳化罐内温度相同的水相抗原加入到乳化罐中，水相抗原添加量为 所述疫苗佐剂质量的100-400% ;将所述疫苗佐剂与水相抗原的混合物在400-1000rpm下进 行乳化，乳化温度为30±2°C，乳化时间为5-30 min，乳化完成后即得疫苗。 具体地，所述的水相抗原为口蹄疫抗原、猪圆环病毒抗原或其他病毒抗原和细菌 抗原。 本专利技术制备的低聚糖酯作为亲油性表面活性剂可制备得到安全、稳定的W/0/W型 疫苗佐剂，最终制备得到的w/0/w型疫苗佐剂可制备成稳定性强、安全性好，抗体效价高的 动物疫苗。本专利技术解决了亲油性表面活性剂的制备难题，打破了法国在w/0/w型油乳佐剂
的垄断。【附图说明】 图1为实施例9中各组别猪圆环病毒疫苗ELISA抗体水平OD值走向图。【具体实施方式】 以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用 的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。 -、低聚糖酯的制备实施例 实施例1 (1) 在氮气惰性氛围保护下，将450g木糖于120°C加热使木糖处于熔融状态，于400rpm 下搅拌反应6h，生成木糖聚合物； (2) 将木糖聚合物升温至180°C，逐滴加入13. 5 g亚磷酸和900 g油酸，于180°C下进 行搅拌，转速400rpm，搅拌反应lh，冷却，生成低聚木糖醋粗产品； (3) 将低聚木糖酯粗产品进行甲醇萃取，得到的萃取液用NaOH溶液除去未反应的亚磷 酸和木糖，然后用正己烷洗涤除去残留的油酸，干燥，得到低聚木糖酯。 实施例2 (1) 在氮气惰性氛围保护下，将700g甘露糖于200°C加热，使甘露糖处于熔融状态， 400rpm下搅拌lh，生成甘露糖聚合物； (2) 将甘露糖聚合物升温至280°C，逐滴加入I. 2 g亚磷酸、0. 6g碳酸当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种低聚糖酯，其特征在于其是采用如下方法制备的：（1） 聚合反应：在氮气惰性氛围的保护下，将天然单糖加热至熔融状态，于搅拌下反应1‑6 h，生成天然单糖聚合物；（2） 酯化反应：将油酸和催化剂混合后于搅拌下逐滴加入到天然单糖聚合物中，于180℃‑280℃下反应1‑6 h，自然冷却，生成低聚糖酯粗品；（3）将所述低聚糖酯粗品经纯化和干燥即可。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨美景，王娜，刘祥义，尚青，李在均，
申请(专利权)人：石家庄维埃温特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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