本发明专利技术涉及式[1]的化合物，其中R1和R2为支链或直链的基团，具有最多达17个选自碳、氮、氧和硫的原子，n为0至18，包含18，Y为硫或硒，X为S或O，R为–OH或者包含一个或多个肽、一个或多个核酸、一个或多个抗体或其组合的有机基团。本发明专利技术还涉及用于制备所述化合物的方法和所述化合物用作佐剂的用途。本发明专利技术还涉及包含所述化合物的组合物及所述组合物用作例如疫苗组合物的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】佐剂化合物
本专利技术涉及新的适合作为疫苗组合物中的佐剂的化合物，制备所述化合物的方法以及包含所述化合物的组合物。
技术介绍
几十年来一直主要使用接种疫苗策略来形成保护性免疫以保护患者在与传染原接触后不患上疾病。为了这个目的，已经将减毒病原体、死病原体或破坏的病原体、病原体制剂、或者纯化或重组的病原体组分给予患者，以激发针对各个病原体的抗原组分的特异性免疫应答。刺激这样的免疫应答的组分，可以是例如病原体特异性的蛋白、多糖或脂质。可通过同时给予佐剂来进一步刺激针对病原体中包含的抗原的特异性免疫应答。本领域已知，佐剂可加速、延长针对一种或多种所述抗原的特异性免疫应答或提高针对一种或多种所述抗原的特异性免疫应答的质量，它目前被用作疫苗的一部分。所提出的佐剂的优点包括它们具有以下能力：1)指导并优化适用于疫苗的免疫应答；2)使得疫苗能够进行粘膜递送；3)促进细胞介导的免疫应答；4)增强较弱的免疫原(例如高度纯化的抗原或重组抗原)的免疫原性；5)降低提供保护性免疫所需的抗原量或免疫频率；6)改善免疫应答降低或减弱的个体(例如新生儿、老年人和免疫功能不全的患者)中疫苗的效力。佐剂具有不同的作用机制。一组佐剂通过toll样受体起作用。Toll样受体(TLR)识别微生物组分的特定模式，特别是来自病原体的那些，并调节先天性免疫和获得性免疫的激活。未成熟的树突细胞响应这些微生物组分而成熟。迄今为止，已经鉴定了TLR家族的13个成员。TLR由吞噬细胞(例如单核细胞、巨噬细胞和树突细胞)表达。通过配体结合来激活TLR可在MyD88依赖性途径(NF-[κ]β)或MyD88非依赖性途径(IFR-3)中产生信号转导事件。一种已知的与toll样受体2(TLR2)相互作用的脂肽佐剂是所谓的Pam3Cys-脂肽的佐剂。根据RenateSpohnetal.(Vaccine22(2004)2494-2499)的记载，发现Pam3Cys-SK4变体是用于在小鼠中引发细胞免疫应答的最有效添加剂。Pam3Cys-SK4的另一优点是其具有化学稳定性，可以高质量来大批量生产。一种Pam3Cys-脂肽Pam3Cys—Ser-(Lys)4(Aca-Aca-生物素).2三氟乙酸酯可商购自例如EnzoLifeSciencesInternationalInc,PlymouthMeeting,PA,USA可用作佐剂。WO-A-2009/072767记载了Pam3Cys-SK4和聚肌胞苷酸(polyinosinic:polycytidylicacid)的混合物作为疫苗的佐剂的用途。本专利技术的目的是改善Pam3Cys样脂肽的免疫应答。
技术实现思路
本专利技术涉及改良的Pam3Cys样脂肽，其诱导更好的免疫应答。新化合物用式(1)表示：其中R1和R2各自独立地为具有最多达17个选自碳、氮、氧和硫的原子的支链或直链的基团，n为0至18，包含18，Y为硫或硒，X为S或O，R是–OH或者包含一个或多个肽、一个或多个核酸、一个或多个抗体或其组合的有机基团。优选地，R1和R2各自独立地为具有最多达17个碳原子，优选10-17个碳原子的支链或直链烷基。优选地，R1和R2各自独立地为具有最多达17个碳原子，优选10-17个碳原子的支链或直链烷基，并且Y为硫。申请人发现，与已知的Pam3Cys-SK4相比，本专利技术的化合物能够通过功能性地刺激TLR2而诱导改善的免疫应答。不希望囿于以下理论，申请人认为，通过将所述已知化合物的N末端棕榈酰部分中的桥连-CH2-基团替换为-NH-桥连基团，可达到更高的刺激水平。所述化合物的脂肪链与二聚体受体的轮廓分明的袋(pocket)相适，并认为通过纳入桥连–NH-基可生成氢桥。这使得所述配体与所述受体更紧密地结合，这又进而有利于实现所需的佐剂活性。附图说明图1示出了现有技术中的Pam3Cys-SK4化合物和本专利技术化合物的两个实例。图2示出了用于制备本专利技术的化合物的合成方案。图3示出了实验结果，其中将TRL2转染的HEK细胞和树突细胞与现有技术的化合物及本专利技术的化合物进行孵育。图4示出了鼠DC细胞系的试验结果，所述DC细胞系分别与现有技术的化合物及本专利技术的化合物进行孵育，或不对所述DC细胞系进行刺激。图5示出了激活人单核细胞衍生的树突细胞的结果。图6示出了OVA抗原的U-Pam缀合的合成长肽(含有SIINFEKLCTL表位)在体内引发T细胞(T-cellpriming)的能力。具体实施方式本专利技术的化合物(1)可具有为S或O的基团X。为了便于合成，优选天然存在的O。S原子是本领域技术人员熟知的变体。Y为硫或硒，并优选硫，如实施例中所列举的。R1和R2各自独立地为具有最多达17个选自碳、氮、氧和硫的原子的支链或直链的基团，优选具有最多达17个碳原子，优选10-17个碳原子的直链烷基。在一个实施方案中，R1和R2优选地各自独立地为支链或直链的脂族基团，所述支链或直链的脂族基团具有最多达17个原子(即各自具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17个原子)的长度并含有选自碳、氮、氧和硫中一种或多种原子。本领域技术人员已知，术语“最多达17个碳原子的长度”在本专利技术的上下文中意指所述支链或直链基团的主链包含最多达17个原子；因此在计算最多达17个原子的数目的过程中脂族基团的氢原子不被包括在内。更优选的基团R1和R2为具有15个碳原子的直链烷基。基团具有的碳原子越少，导致所述化合物变体(version)的亲脂性越弱，这可能是有利的，因为这些变体可能具有更好的溶解性并且因此在溶液中展现出的更符合预测的行为。在式(1)中，n为0至18，包含18，优选至少4，更优选11至15，包含15。申请人发现其中n为11和其中n为13的化合物的结果是阳性的。在第一种实施方案中，R为包含一个或多个肽的有机基团。在这个方面，本专利技术的化合物被称为肽缀合物。这些肽可以仅含有天然氨基酸，但合成的氨基酸也可包含在这些肽中。优选地，R为具有最多达60个氨基酸的肽。合适的肽的实例为SSNASK4、SR8、RPDRY-NH2和QPDRY-NH2。一个优选的肽为SKm，其中m为1、2、3、4或5。优选地，m为4。SK4也被称为SerLysLysLysLys。如下文所述，可适当地修饰SKm肽的S部分，更优选SK4肽的S部分，并且任选地，SKm肽进一步与抗原偶联。优选的经修饰的SKm肽由下式表示：其中R4表示Km肽部分并任选地进一步偶联至抗原，R5为氢或相对小的包含1-6个选自碳、氮和/或氧的原子的基团。m优选地为4。可能的基团R5的实例为氢，C1-C6烷基，优选C1-C4烷基，C2-C6烯基，优选C2-C3烯基，C2-C6炔基，优选C2-C3炔基，C1-C5羟烷基，C1-C5巯基烷基(mercaptoalkyl)，C1-C5氨基烷基，C1-C4-氰基烷基，C1-C3-叠氮基烷基例如-CH2N3基，C1-C6-卤代烷基例如–CH2X基(X＝F、Cl、Br)，含有一个或多个选自碳、氮、氧和硫的原子的芳香族5或6-元环，和含有一个或多个选自碳、氮、氧和硫的原子的3-至6-元(杂)环。R5优选地为氢、–CH2-OH基团、-CH2-CH3基团、–(CH2)2-CH3基团、–本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种由式[1]所表示的化合物其中R1和R2各自独立地为具有最多达17个选自碳、氮、氧和硫的原子的支链或直链基团，n为0至18，包含18，Y为硫或硒，X为S或O，并且R为–OH或者包含一个或多个肽、一个或多个核酸、一个或多个抗体或其组合的有机基团。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.10.05 NL 2007536;2011.10.05 US 61/543,510;2011.一种由式[1]所表示的化合物其中R1和R2各自独立地为具有10至17个选自碳、氮、氧和硫的原子的支链或直链基团，n为11至18，包含18，Y为硫，X为O，并且R为包含一个或多个肽、一个或多个核酸、一个或多个抗体或其组合的有机基团。2.权利要求1的化合物，其中R1和R2各自独立地为具有10-17个碳原子的直链烷基。3.权利要求2的化合物，其中R1和R2为具有15个碳原子的直链烷基。4.权利要求1-3任一项的化合物，其中n为11至15，包括15。5.权利要求1-3任一项的化合物，其中R为SKm，其中m为1、2、3、4或5。6.权利要求5的化合物，其中R偶联至抗原。7.权利要求1的化合物，其中基团R由下式表示：其中R4为Km肽部分，其中m为0、1、2、3、4或5，并且其中R5为氢或包含1-6个选自碳、氮和氧的原子的基团。8.权利要求7的化合物，其中R4偶联至抗原。9.权利要求7或8的化合物，其中R5为–CH2-OH基团、–CH2-CH3基团、–(CH2)3-CH3基团、–CH2C≡CH基团、–CH2CH＝CH2基团或–(CH2)2NH2基团。10.权利要求5的化合物，其中m为4，R1和R2为具有15个碳原子的直链烷基，n为12或14。11.权利要求6的化合物，其中m为4，R1和R2为具有15个碳原子的直链烷基，n为12或1412.权利要求7或8的化合物，其中R5不为氢，并且连接R5的不对称碳原子具有L构型。13.权利要求9的化合物，其中R5不为氢，并且连接R5的不对称碳原子具有L构型。14.权利要求5的...
【专利技术属性】
技术研发人员：F·A·奥森多普，C·J·M·梅立夫，S·科汉，D·V·菲利普夫，G·A·范德马瑞尔，
申请(专利权)人：ISA制药有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL
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