蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法及应用技术

本发明专利技术提供一种蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法，所述三种脂肪酸分别为3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸，通过气相色谱方法测定蜂王浆中3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的含量。本发明专利技术提供的色谱条件可以使色谱峰得到较好的分离，操作简便，准确快捷，灵敏性高，重现性好。并且通过这些有效成分的含量了解蜂王浆的质量品质，为蜂王浆质量标准提供了新的指标。

【技术实现步骤摘要】
蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法及应用
本专利技术属于食品质量控制方法，涉及蜂王浆有效成分的检测方法，特别涉及蜂王浆中3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸三种脂肪酸含量的检测方法。
技术介绍
蜂王浆（royaljelly）是5～15日龄的哺育工蜂的咽下腺（subpharyngealgland）和上颚腺（mandibulargland）分泌的、用以饲喂蜂王和3日龄以内工蜂、雄蜂幼虫的浆状物质。颜色呈乳白色或淡黄色。其气味与口感主要是酸味和辛辣味。蜂王浆的化学组成极为复杂，含有蛋白质、多肽、碳水化合物、脂肪酸、维生素、矿物质、酸等，其中，脂质占蜂王浆干重的8%~19%，是蜂王浆中最重要的成份之一，其中游离脂肪酸占脂质的80%~90%以上，是蜂王浆抗菌、免疫调节、抗肿瘤等诸多生物学功能的物质基础。目前，针对蜂王浆中脂肪酸成分的检测方法主要集中于10-羟基-2-癸烯酸（10-HDA），缺乏对其他脂肪酸成分的可靠的定量检测方法。3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸均是蜂王浆中重要的功能性脂肪酸，但对这些脂肪酸的检测方法研究大多只是定性检测，缺乏简便、有效、准确的定量检测方法。因此，建立蜂王浆中这三种脂肪酸的定量测定方法对蜂王浆的质量控制体系的进一步完善有着重大的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法，所述三种脂肪酸分别为3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸，本专利技术提供的蜂王浆中3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸含量的检测方法，通过以下步骤实现：（1）以对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸为对照品，制成一定含量的对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的溶液，甲硅烷化衍生，通过气相色谱测定其图谱，以对羟基苯甲酸甲酯为内标物，由对羟基苯甲酸甲酯与3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰面积的比值和对照品的进样量的比值绘制标准曲线；（2）将待测蜂王浆加溶剂超声处理，过滤得滤液，甲硅烷化衍生，制得供试品；（3）在与步骤（1）相同的色谱条件下测定步骤（2）制得的供试品的气相色谱图谱，并分别计算对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰峰面积，根据步骤（1）绘制的标准曲线、添加标准品质量和称取蜂王浆的质量得到待测蜂王浆中3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的含量。上述步骤（1）用80%~100%乙醇溶解对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸对照品，制成对羟基苯甲酸甲酯浓度为0.1mg/ml~0.15mg/ml，3-羟基癸酸浓度为0.004mg/ml~0.05mg/ml、10-羟基癸酸浓度为0.013mg/ml~0.14mg/ml和癸二酸浓度为0.0015mg/ml~0.025mg/ml的对照品溶液，吸取1ml左右对照品溶液，使用滤膜过滤，挥干溶剂，再用1~3ml纯乙醚溶解，吸取1ml左右乙醚溶液，使用滤膜过滤，之后挥干溶剂，加入300μl~500μl纯吡啶和80μl~120μlBSTFA+TMS（99:1），50°C~70°C水浴30分钟~60分钟，然后使用气相色谱检测。上述步骤（2）使用80%~100%乙醇制成对羟基苯甲酸甲酯浓度为0.5mg/ml~0.75mg/ml的内标溶液，称取约0.5g蜂王浆，置于容量瓶中，加入100μl~1000μl0.01mol/l~0.03mol/l盐酸，振荡溶解蜂王浆，精密吸取3ml~7ml的内标溶液加入容量瓶，用80%~100%乙醇稀释至刻度，超声15分钟~30分钟，制成待测溶液，吸取1ml左右待测溶液，使用滤膜过滤，挥干溶剂，再用1ml~3ml纯乙醚溶解，吸取1ml乙醚溶液，使用滤膜过滤，之后挥干溶剂，加入300μl~500μl纯吡啶和80μl~120μlBSTFA+TMS（99:1），50°C~70°C水浴30分钟~60分钟，然后使用气相色谱检测。上述步骤（1）和步骤（3）中采用气相色谱法的是毛细管柱气相色谱法。上述步骤（1）和步骤（3）中采用气相色谱的色谱条件是：使用分流进样；采用(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷为涂层的毛细管色谱柱，载气为氮气；检测器为FID检测器。气相色谱的进样口温度为250°C，分流比为1：10～1：30，进样量1μl；柱箱程序升温起始温度50°C，保持5分钟，然后以5°C/分钟速度上升至300°C；检测器温度为330°C；所采用(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷为涂层的毛细管色谱柱为Rtx-5柱，柱长30m，内径0.25mm，涂层厚0.25μm。本专利技术的另一个目的是提供所述方法在蜂王浆中对3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的含量进行测定中的应用。本专利技术采用气相色谱法对蜂王浆中3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的含量进行测定，所提供的色谱条件可以使色谱峰得到较好的分离，操作简便，准确快捷，灵敏性高，重现性好。并且通过这些有效成分的含量了解蜂王浆的质量品质，为蜂王浆质量标准提供了新的指标。附图说明图1是实验例1得到的3-羟基癸酸标准曲线。图2是实验例1得到的10-羟基癸酸标准曲线。图3是实验例1得到的癸二酸标准曲线。具体实施方法本专利技术结合附图和实施例作进一步的说明。实施例1蜂王浆中3种脂肪酸成分含量测定的方法学研究1.仪器与实验用药仪器：气相色谱仪（GC2010，日本岛津制作所），自动进样器（AOC-20s），FID检测器，GCsolution工作站，天平（精度0.1mg，BS124S，德国赛多利斯集团）。试剂：标准品：10-羟基癸酸（10-HDAA）、3-羟基癸酸（3-HDAA）、癸二酸，均购自Sigma公司；BSTFA+TMS（99:1）（Sigma公司）；吡啶（Sigma公司）；氢气、氮气、空气（杭州今工特种气体有限公司）；甲醇（色谱纯，Merck公司）；乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醚（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；盐酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；对羟基苯甲酸甲酯（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；蜂王浆采集自浙江省平湖种蜂场，实验用水为超纯水。2.色谱条件选择色谱柱：Rtx-5，(30m，0.25mmID，0.25μm)；进样口温度：250ºC，进样量：1uL，分流比：1:20；；柱箱温度梯度：50ºC保持5min，5ºC/min上升至300ºC，300ºC保持5min，载气流速：1.0mL/min；检测器温度：330ºC。在此条件下对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸与样品中其他组分分离良好。3.空白试验取吡啶和BSTFA+TMS混合，水浴30分钟，作为空白试剂，使用气相色谱检测，在对羟基苯甲酸甲酯对照品、3-羟基癸酸对照品、10-羟基癸酸对照品和癸二酸对照品相同保留时间无吸收峰。称取0.5g蜂王浆，置于25ml容量瓶中，加入200μl0.01mol/l盐酸，振荡溶解蜂王浆，使用无水乙醇稀释至刻度，超声15分钟，制成待测溶液，吸取1ml待测溶液，使用滤膜过滤，挥干溶剂，再用1.5ml左右乙醚溶解，取1ml乙醚溶液，使用滤膜过滤，挥干溶剂，加入400μl吡啶和100μlBSTFA+TMS（99:1），60°C水浴30分钟，然后使用气相色谱检测，在对羟基苯甲酸甲酯对照品相同保留时间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法，所述脂肪酸为3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）以对羟基苯甲酸甲酯、3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸为对照品，制成一定含量的对羟基苯甲酸甲酯、3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的溶液，甲硅烷化衍生，通过气相色谱测定其图谱，以对羟基苯甲酸甲酯为内标物，由对羟基苯甲酸甲酯与3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰面积的比值和对照品的进样量的比值绘制标准曲线；（2）将待测蜂王浆加溶剂超声处理，过滤得滤液，甲硅烷化衍生，制得供试品；（3）在与步骤（1）相同的色谱条件下测定步骤（2）制得的供试品的气相色谱图谱，并分别计算对羟基苯甲酸甲酯、3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰峰面积，根据步骤（1）绘制的标准曲线、添加标准品质量和称取蜂王浆的质量得到待测蜂王浆中3‑羟基癸酸、10‑羟基癸酸和癸二酸的含量。

【技术特征摘要】
1.一种蜂王浆中三种脂肪酸含量的检测方法，所述脂肪酸为3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）以对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸为对照品，制成一定含量的对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的溶液，甲硅烷化衍生，通过气相色谱测定其图谱，以对羟基苯甲酸甲酯为内标物，由对羟基苯甲酸甲酯与3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰面积的比值和对照品的进样量的比值绘制标准曲线；（2）将待测蜂王浆加溶剂超声处理，过滤得滤液，甲硅烷化衍生，制得供试品；（3）在与步骤（1）相同的色谱条件下测定步骤（2）制得的供试品的气相色谱图谱，并分别计算对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的特征吸收峰峰面积，根据步骤（1）绘制的标准曲线、添加内标质量和称取蜂王浆的质量得到待测蜂王浆中3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸的含量；其中步骤（1）用80%~100%乙醇溶解对羟基苯甲酸甲酯、3-羟基癸酸、10-羟基癸酸和癸二酸对照品，制成对羟基苯甲酸甲酯浓度为0.1mg/ml~0.15mg/ml、3-羟基癸酸浓度为0.004mg/ml~0.05mg/ml、10-羟基癸酸浓度为0.013mg/ml~0.14mg/ml和癸二酸浓度为0.0015mg/ml~0.025mg/ml的对照品溶液，吸取对照品溶液，使用滤膜过滤，挥干溶剂，再用纯乙醚溶解，吸取乙醚溶液，使用滤膜过滤，之后挥干溶剂，加入300μl~500μl纯吡啶和BSTFA+TMS的混合溶液，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡福良，吴雨祺，魏文挺，郑火青，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33