N-羟基琥珀酰亚胺用于改善缀合物的稳定性的用途制造技术

本发明专利技术提供了用于在外源NHS存在的情况下产生具有改善的稳定性的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的方法。在一些实施方案中，本发明专利技术的方法包括添加一定摩尔比的相对于在修饰反应过程中作为双官能接头的水解/氨解的结果产生的NHS量的外源NHS。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】 交叉参考相关申请 本专利申请要求2011年12月13提交的美国临时专利申请No. 61/570, 139的利 益，将所述美国临时专利申请通过引用并入本文。 专利技术背景 对癌症和其它疾病的治疗是有用的抗体-药物缀合物通常由三个不同的元件组 成：细胞结合剂、接头和细胞毒素剂。常用制剂方法之一包括修饰步骤，其中将细胞结合剂 与双官能接头反应以形成共价地连接于具有反应性基团的接头的细胞结合剂；纯化步骤， 其中将修饰抗体从修饰反应的组分纯化出来；缀合步骤，其中将修饰细胞结合剂与细胞毒 素剂反应以从接头（使用反应性基团）至细胞毒素剂形成共价化学价；和第二纯化步骤，其 中将缀合物从缀合反应的其它组分纯化出来。 尽管在制备抗体-药物缀合物上取得了进展，但目前的方法受到几个因素限制。 例如，双官能交联剂对抗体的结合在本领域中目前使用的条件下是异质的，这导致包含稳 定的酰胺键和不稳定的酯键的缀合物。据认为缀合物中不稳定酯键的存在导致药物从缀合 物释放和缀合物的不稳定性。 最近的临床试验已显示抗体-药物缀合物在治疗许多不同类型的癌症中的有前 景的作用。因此，存在对改进的制备更稳定的并且比由目前的方法产生的抗体-药物缀合 物更纯的抗体-药物缀合物的方法的需要。本专利技术提供了这样的方法。本专利技术的这些和其 它有利方面以及另外的专利技术特征根据本文中提供的本专利技术的描述将变得显然。 专利技术概述 本专利技术提供了用于在外源N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)存在的情况下制造具有改善 的稳定性的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的方法。 专利技术详述 本领域技术人员将理解，包含化学地偶联于细胞毒素剂的抗体的缀合物（抗 体-细胞毒素剂缀合物）通常如下进行制备：利用双官能交联试剂（通常利用交联试剂上 的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)反应基团）修饰抗体，纯化具有连接于其的接头的抗体，将细 胞毒素剂缀合于具有连接于其的接头的抗体，和纯化抗体-细胞毒素剂缀合物。本专利技术通 过使稳定地键合于细胞结合剂的接头的量减少至最少和使导致缀合物不稳定性的不期望 的副反应降至最低来改进这样的方法。 作为双官能接头（例如，SPP、STOB、SMCC)的水解/氨解的结果，在修饰反应过程 中产生少量NHS。NHS目前被本领域技术人员当作修饰反应的不期望的（或至少中性）副 产物。因此，目前的方法通常包括在添加细胞毒素剂之前纯化修饰抗体，这导致在缀合反应 之前NHS的除去。 令人惊讶地发现，在外源NHS存在的情况下制备抗体-细胞毒素剂缀合物导致缀 合物的稳定性的显著增加，如通过游离类美登素的释放测量的。因此，本专利技术提供了用于在 外源NHS存在的情况下制造具有改善的稳定性的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的方法。 本专利技术提供了用于制备细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括添 加外源NHS。如本文中所用，外源NHS是指在方法过程中从外部来源添加的NHS，并且不 是指在修饰反应过程中作为双官能接头的水解/氨解的结果产生的NHS。 在一个实施方案中，本专利技术提供了用于制备细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的 方法,所述方法包括添加约0. ImM至约300mM的外源NHS。例如，本专利技术的方法包括添加 约 0· ImM、约 0· 2mM、约 0· 3mM、约 0· 4mM、约 0· 5mM、约 0· 6mM、约 0· 7mM、约 0· 8mM、约 0· 9mM、 约 L OmM、约 L ImM、约 L 3mM、约 L 5mM、约 L 7mM、约 L 9mM、约 2. OmM、约 2. ImM、约 2. 3mM、 约 2. 5mM、约 2. 7mM、约 2. 9mM、约 3. OmM、约 3. ImM、约 3. 3mM、约 3. 5mM、约 3. 7mM、约 3. 9mM、 约 4. OmM、约 4. ImM、约 4. 3mM、约 4. 5mM、约 4. 7mM、约 4. 9mM、约 5. OmM、约 5. ImM、约 5. 3mM、 约 5. 5mM、约 5. 7mM、约 5. 9mM、约 6. OmM、约 6. ImM、约 6. 3mM、约 6. 5mM、约 6. 7mM、约 6. 9mM、 约 7. OmM、约 7. ImM、约 7. 3mM、约 7. 5mM、约 7. 7mM、约 7. 9mM、约 8. OmM、约 8. ImM、约 8. 3mM、 约 8. 5mM、约 8. 7mM、约 8. 9mM、约 9. OmM、约 9. ImM、约 9. 3mM、约 9. 5mM、约 9. 7mM、约 9. 9mM、 约 10mM、约 llmM、约 12mM、约 13mM、约 14mM、约 15mM、约 16mM、约 17mM、约 18mM、约 19mM、 约 20mM、约 25mM、约 30mM、约 35mM、约 40mM、约 45mM、约 50mM、约 55mM、约 60mM、约 65mM、约 70mM、约 75mM、约 80mM、约 85mM、约 90mM、约 95mM、约 lOOmM、约 llOmM、约 120mM、约 130mM、 约 140mM、约 150mM、约 160mM、约 170mM、约 180mM、约 190mM、约 200mM、约 210mM、约 220mM、 约 230mM、约 240mM、约 250mM、约 260mM、约 270mM、约 280mM、约 290mM 或约 300mM 外源 NHS。 在一个实施方案中，本专利技术的方法包括添加约〇. ImM至约5mM、约0. ImM至约10mM、约1. OmM 至约5mM、约1. OmM至约10mM、约5. OmM至约10mM、约10mM至约20mM、约20mM至约30mM、 约30mM至约40mM、约40mM至约50mM、约50mM至约60mM、约60mM至约70mM、约70mM至约 80mM、约 80mM 至约 90mM、约 90mM 至约 100mM、约 100mM 至约 llOmM、约 llOmM 至约 120mM、约 120mM 至约 130mM、约 130mM 至约 140mM、约 140mM 至约 150mM、约 150mM 至约 160mM、约 160mM 至约 170mM、约 170mM 至约 180mM、约 180mM 至约 190mM、约 190mM 至约 200mM、约 200mM 至 约 220mM、约 220mM 至约 240mM、约 240mM 至约 260mM、约 260mM 至约 280mM 或约 280mM 至约 300mM外源NHS。在另一个实施方案中，本专利技术的方法包括添加约10mM至约200mM、约20至 约150mM、约50至约150mM或约20至约100mM外源NHS。 在一些实施方案中，本专利技术的方法包括添加相对于作为双官能接头的水解/氨解 的结果在修饰反应过程中产生的NHS的量的一定摩尔比的外源NHS。本领域技术人员可测 定在特定修饰过程中产生的NHS的量，因为产生的NHS的量基本上与使用的双官能接头的 量相等。本领域技术人员随后可向反应混合物中添加相对于在修饰反应中产生的NHS的量 的一定摩尔比的外源NHS。在一个实施方案中，相对于在修饰反应过程中产生的NHS的量添 加约2至约200本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备具有连接于其的接头的细胞结合剂的方法，所述方法包括在外源N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)存在的情况下将细胞结合剂与双官能交联试剂接触以将接头共价地连接于所述细胞结合剂，从而制备包含具有连接于其的接头的细胞结合剂的混合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.12.13 US 61/570,1391. 一种用于制备具有连接于其的接头的细胞结合剂的方法，所述方法包括在外源 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)存在的情况下将细胞结合剂与双官能交联试剂接触以将接头共 价地连接于所述细胞结合剂，从而制备包含具有连接于其的接头的细胞结合剂的混合物。2. -种用于制备包含通过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合 剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括： (a) 将细胞结合剂与双官能交联试剂接触以将接头共价地连接于所述细胞结合剂，从 而制备包含具有连接于其的接头的细胞结合剂的第一混合物， (b) 将所述第一混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱 或其组合，从而制备具有连接于其的接头的细胞结合剂的纯化的第一混合物， (c) 通过将具有连接于其的接头的细胞结合剂与细胞毒素剂反应来将细胞毒素剂缀合 于所述纯化的第一混合物中的具有连接于其的接头的细胞结合剂，从而制备包含（i)含有 通过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物、（ii) 游离细胞毒素剂和（iii)反应副产物的第二混合物，和 (d) 将第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱或其 组合以将所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物从所述第二混合物的其它组分纯化出来，从 而制备所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的纯化的第二混合物， 其中在步骤（a)期间或之后以及在步骤（c)之前添加外源N-羟基琥珀酰亚胺。3. 根据权利要求2所述的方法，其中在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下进行步骤 (a)中的接触。4. 根据权利要求2所述的方法，其还包括在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下在步 骤（a)之后保持所述第一混合物。5. 根据权利要求4所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的溶液进行所述保 持。6. 根据权利要求5所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。7. 根据权利要求2所述的方法，其中在步骤（b)中添加外源N-羟基琥珀酰亚胺。8. 根据权利要求2所述的方法，其还包括在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下在步 骤（b)之后保持所述纯化的第一混合物。9. 根据权利要求8所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的溶液中进行所述保 持。10. 根据权利要求9所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。11. 根据权利要求2至10中任一项所述的方法，其中在步骤（b)和（d)中使用切向流 过滤。12. 根据权利要求2至10中任一项所述的方法，其中在步骤（b)和（d)中使用吸附色 谱。13. 根据权利要求2至10中任一项所述的方法，其中在步骤（b)中使用吸附色谱以及 在步骤（d)中使用切向流过滤。14. 根据权利要求2至10中任一项所述的方法，其中在步骤（b)和（d)中使用非吸附 色谱。15. 根据权利要求2至10中任一项所述的方法，其中在步骤（b)中使用切向流过滤以 及在步骤（d)中使用吸附色谱。16. 根据权利要求2至15中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的溶 液中进行步骤（a)中的接触。17. 根据权利要求16所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。18. 根据权利要求16所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。19. 根据权利要求2至18中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的溶 液中进行步骤（c)中的缀合。20. 根据权利要求19所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。21. 根据权利要求19所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。22. -种用于制备包含通过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合 剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括： (a) 将细胞结合剂与双官能交联试剂接触以将接头共价连接于细胞结合剂，从而制备 包含具有连接于其的接头的细胞结合剂的第一混合物， (b) 通过将具有连接于其的接头的细胞结合剂与细胞毒素剂反应来将细胞毒素剂缀合 于所述第一混合物中的具有连接于其的接头的细胞结合剂，从而制备包含（i)含有通过接 头偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物、（ii)游离细胞毒素 剂和（iii)反应副产物的第二混合物，和 (c) 将所述第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱 或其组合，以将所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物从所述第二混合物的其它组分纯化出 来，从而制备所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的纯化的第二混合物， 其中在步骤（a)的过程中或之后和在步骤（b)之前添加所述外源N-羟基琥珀酰亚胺。23. 根据权利要求22所述的方法，其中在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下进行步 骤（a)中的接触。24. 根据权利要求22所述的方法，其还包括在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下在 步骤（a)后保持所述第一混合物。25. 根据权利要求24所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的溶液中进行所述 保持。26. 根据权利要求25所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。27. 根据权利要求22至26中任一项所述的方法，其中在步骤（c)中使用切向流过滤。28. 根据权利要求22至26中任一项所述的方法，其中在步骤（c)中使用吸附色谱。29. 根据权利要求22至26中任一项所述的方法，其中在步骤（c)中使用非吸附色谱。30. 根据权利要求22至29中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（a)中的接触。31. 根据权利要求30所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。32. 根据权利要求30所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。33. 根据权利要求22至32中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（b)中的缀合。34. 根据权利要求33所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。35. 根据权利要求33所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。36. -种用于制备包含通过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合 剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括： (a) 将细胞结合剂与包含化学地偶联于接头的细胞毒素剂的细胞毒素剂-接头化合物 接触，以将细胞毒素剂-接头化合物共价地偶联于所述细胞结合剂，从而制备包含含有通 过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的 混合物，和 (b) 将包含所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的混合物经历切向流过滤、选择性沉 淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱或其组合，以纯化所述缀合物，其中在步骤（a)的过程 中或之后和在步骤（b)之前添加外源N-羟基琥珀酰亚胺。37. 根据权利要求36所述的方法，其中在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下进行步 骤（a)中的接触。38. 根据权利要求36所述的方法，其还包括在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下在 步骤（a)后保持所述混合物。39. 根据权利要求38所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的溶液中进行所述 保持。40. 根据权利要求39所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。41. 根据权利要求36至40中任一项所述的方法，其中通过将细胞毒素剂与包含接头的 双官能交联试剂接触以将所述细胞毒素剂共价地连接于所述接头来制备细胞毒素剂-接 头化合物，并从而制备包含所述细胞毒素剂-接头化合物的混合物。42. 根据权利要求36至41中任一项所述的方法，其中在与所述细胞结合剂接触之前纯 化所述细胞毒素剂-接头化合物。43. 根据权利要求36至41中任一项所述的方法，其中在与细胞结合剂接触之前不纯化 所述细胞毒素剂-接头化合物。44. 根据权利要求36至43中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（a)中的接触。45. 根据权利要求44所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。46. 根据权利要求44所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。47. -种用于制备包含通过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合 剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括： (a) 将细胞结合剂与双官能交联试剂接触以将接头共价地连接于所述细胞结合剂，从 而制备包含具有连接于其的接头的细胞结合剂的第一混合物， (b) 将所述第一混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱 或其组合，从而制备具有连接于其的接头的细胞结合剂的纯化的第一混合物， (c) 通过将所述具有连接于其的接头的细胞结合剂与细胞毒素剂在外源N-羟基琥珀 酰亚胺存在的情况下反应，来将细胞毒素剂缀合于所述纯化的第一混合物中的具有连接于 其的接头的细胞结合剂，从而制备包含（i)含有通过接头偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂 的细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物、（ii)游离细胞毒素剂和（iii)反应副产物的第二混合 物，和 (d) 将所述第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱 或其组合以将所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物从所述第二混合物的其它组分纯化出 来，从而制备细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的纯化的第二混合物。48. 根据权利要求47所述的方法，其中在步骤（b)和（d)中使用切向流过滤。49. 根据权利要求47所述的方法，其中在步骤（b)和（d)中使用吸附色谱。50. 根据权利要求47所述的方法，其中在步骤（b)和（d)中使用非吸附色谱。51. 根据权利要求47所述的方法，其中在步骤（b)中使用吸附色谱以及在步骤（d)中 使用切向流过滤。52. 根据权利要求47所述的方法，其中在步骤（b)中使用切向流过滤以及在步骤（d) 中使用吸附色谱。53. 根据权利要求47至52中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（a)中的接触。54. 根据权利要求53所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。55. 根据权利要求53所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。56. 根据权利要求47至55中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（c)中的缀合。57. 根据权利要求56所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。58. 根据权利要求56所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。59. -种用于制备包含通过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合 剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括： (a) 将细胞结合剂与双官能交联试剂接触以将接头共价地连接于所述细胞结合剂，从 而制备包含具有连接于其的接头的细胞结合剂的第一混合物， (b) 通过将具有连接于其的接头的细胞结合剂与细胞毒素剂在外源N-羟基琥珀酰亚 胺存在的情况下反应，来将细胞毒素剂缀合于所述第一混合物中的所述具有连接于其的接 头的细胞结合剂，从而制备包含（i)含有通过所述接头化学地偶联于所述细胞毒素剂的细 胞结合剂的所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物、（ii)游离细胞毒素剂和（iii)反应副产 物的第二混合物，和 (c) 将所述第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱 或其组合以将所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物从所述第二混合物的其它组分纯化出 来，从而制备所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的纯化的第二混合物。60. 根据权利要求59所述的方法，其中在步骤（c)中使用切向流过滤。61. 根据权利要求59所述的方法，其中在步骤（c)中使用吸附色谱。62. 根据权利要求59所述的方法，其中在步骤（c)中使用非吸附色谱。63. 根据权利要求59至62中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（a)中的接触。64. 根据权利要求63所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。65. 根据权利要求63所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。66. 根据权利要求59至65中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（c)中的缀合。67. 根据权利要求66所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。68. 根据权利要求66所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。69. -种用于制备包含通过接头化学地偶联于细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合 剂-细胞毒素剂缀合物的方法，所述方法包括： (a) 将细胞结合剂与双官能交联试剂接触以将接头共价地连接于所述细胞结合剂，从 而制备包含具有连接于其的接头的细胞结合剂的第一混合物， (b) 将所述第一混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱 或其组合，从而制备具有连接于其的接头的细胞结合剂的纯化的第一混合物， (c) 通过将所述具有连接于其的接头的细胞结合剂与细胞毒素剂反应,来将细胞毒素 剂缀合于所述纯化的第一混合物中的所述具有连接于其的接头的细胞结合剂，从而制备包 含（i)含有通过所述接头化学地偶联于所述细胞毒素剂的细胞结合剂的细胞结合剂-细胞 毒素剂缀合物、（ii)游离细胞毒素剂和（iii)反应副产物的第二混合物， (d) 在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下温育所述第二混合物；和 (e) 在步骤（d)之后将所述第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸 附过滤、吸附色谱或其组合，以将所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物从所述第二混合物 的其它组分纯化出来，从而制备通过所述接头化学地偶联于所述细胞毒素剂的细胞结合剂 的纯化的第二混合物。70. 根据权利要求69所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH溶液中进行步骤 (d)中的温育。71. 根据权利要求70所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。72. 根据权利要求70所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。73. 根据权利要求69至72中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（a)中的接触。74. 根据权利要求73所述的方法，其中所述pH为约6. 0至约8. 0。75. 根据权利要求73所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。76. 根据权利要求69至75中任一项所述的方法，其中在具有约4. 0至约9. 0的pH的 溶液中进行步骤（c)中的缀合。77. 根据权利要求76所述的方法，其中所述pH为约5. 0至约8. 0。78. 根据权利要求76所述的方法，其中所述pH为约6. 5至约7. 5。79. 根据权利要求69至78中任一项所述的方法，其还包括在步骤（c)与（d)之间将所 述第二混合物经历切向流过滤、选择性沉淀、非吸附色谱、吸附过滤、吸附色谱或其组合，以 将所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物从所述第二混合物的其它组分纯化出业，从而在步 骤（d)之前制备所述细胞结合剂-细胞毒素剂缀合物的纯化的第二混合物。80. 根据权利要求79所述的方法，其中在外源N-羟基琥珀酰亚胺存在的情况下进行纯 化。81. 根据权利要求79或80所述的方法，其中将所述第二混合物在步骤（c)与（d)之间 经历切向流过滤。82. 根据权利要求69至81中任一项所述的方法，其中在步骤（e)中使用切向流过滤。83. 根据权利要求69至81中任一项所述的方法，其中在步骤（e)中使用吸附色谱。84. 根据权利要求69至81中任一项所述的方法，其中在步骤（e)中使用非吸附色谱。85. 根据权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳，G·W·安普莱特，D·H·梅舒拉姆，
申请(专利权)人：伊缪诺金公司，
类型：发明
国别省市：美国;US