口腔流体快速免疫层析检测制造技术

本发明专利技术涉及口腔流体快速免疫层析检测。更具体地，本发明专利技术涉及与用于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析试条相分离的口腔流体收集拭子，其基本上由样品垫、偶联物垫、检测区和对照区垫组成，所述垫由至少一种基质材料制成，其中所述偶联物垫位于所述样品垫下游，并且用偶联物在其上划条纹；检测和对照区垫位于偶联物垫下游，其中所述检测区固定有与靶分析物特异性结合的特异性结合试剂；检测区下游的对照区固定有第二捕获试剂。本发明专利技术还涉及生产所述试条的方法、通过使用所述试条检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析方法、以及包含此试条的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
口腔流体快速免疫层析检测本申请是申请号为200580049809.2、专利技术名称为“口腔流体快速免疫层析检测”的中国专利申请的分案申请，该母案申请是2005年5月20日提交的PCT国际专利申请PCT/CN2005/000701进入中国国家阶段的申请。
本专利技术涉及口腔流体快速免疫层析检测。更具体地，本专利技术涉及用于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析检测试条，收集口腔流体标本的方法，生产所述试条的方法、通过使用该试条检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析方法、以及含有此试条的试剂盒。
技术介绍
人们已经开发了许多定性或定量检测生物体组织和流体中各种分析物的分析方法。当前多数诊断检测是采用血液、尿、粪便、活组织检查或口腔流体。与其它物质相比，收集口腔流体唾液和/或口腔粘膜渗出物用于检测带来相对较少的隐私侵犯，其相对安全，并可相对各易地快速完成。迄今，为开发用于口腔流体的收集、传送和样品处理的测试条以及为开发基于口腔流体的分析，尤其是对各种抗体和代谢物的分析，人们已付出了很多努力。例如，W088/07680公开了通过复杂的放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫分析法(ELISA)等定性或定量检测人或动物体液(选自唾液、眼泪、精液、尿和脑脊液)中特定IgM, IgG和IgA的存在或其量的方法，所述方法相对难以进行，费时且花费多。美国专利N0.5，103,836公开了一种从口腔收集物质用于检测的方法，其包括以下步骤:将以高渗盐溶液浸透的吸收垫插入口腔，其中高渗溶液的盐在垫中的浓度可以有效地从口腔中回收高浓度的所述物质；从口腔中移除所述垫；保存该垫以随后从垫中取出所收集物质用于ELISA。在本公开文件中公开的吸收垫需要用高渗溶液预处理以提供高浓度的分析物，且再次使用复杂的ELISA来检测分析物。美国专利N0.6，303，081公开了用于从口腔收集和转运水性流体到用于检测的侧向层析试条的检测试条。侧向层析试条置于外罩(housing)内并沿外罩中限定的腔伸展。向所述侧向层析试条提供至少一个检视(inspection)部位以实现在侧向层析试条上所选部位检视测试结果。多孔芯条(wick)材料在一端从所述外罩伸出到外罩外部的收集部位，在另一端与所述侧向层析试条相通。所述多孔芯条材料具有微粒构造，所述微粒吸附水性口腔流体以将该流体从口传送到所述侧向层析试条而基本上没有吸收。该多孔芯条材料容易将口腔流体释放到侧向层析试条。由于该多孔芯条材料的迂回流路，自然防止从侧向层析试条到口腔的反向流动。咬合板(bite plate)与所述外罩相连并可插入患者牙齿间以将多孔芯条定位于口腔中来收集口腔流体。所述咬合板通常通过牙齿咬合力(occlusalforce)被保持在适当位置以将多孔芯条定位于口腔空间中。当检测试条在口中时，通过观察侧向层析试条迅速得到检测结果。在美国专利申请N0.2002/0192839、美国专利申请N0.2002/0155029中均公开了用于一步收集口腔流体以检测和/或定量口腔流体中分析物的改进的检测试条和方法，这些专利或申请的内容均以其整体通过参考并入本文。尽管通过上述检测试条的分析法具有直接、快速且不需要复杂步骤的优点，但对于检测对象而言，在整个检测过程中都要咬合检测试条是不方便的。此外，对于具有“无效”指示的分析，在无效结果需要重新检测时，或者对于比如HIV这样的常规需要对收集标本进行确认检测的诊断检测而言，对象将不得不一而再再而三地为检测而咬合检测试条。然而，应当指出，在初次收集后长达一小时，口腔粘膜渗出物的收集通常减少口腔组织表面可得的富含IgG的渗出物，这将使随后收集以使用“一站式样品收集器/检测组合”重新检测不够方便，因为检测对象必须等到渗出物水平更高，否则用样品来检测风险可能会有更低的灵敏度(R.Mink,未出版数据)。
技术实现思路
本专利技术是谨记现有技术中存在的上述缺点而做出的，本专利技术的一个目的是提供一种简单、方便且有成本效益的用侧向免疫层析试条的口腔流体收集方法，其适于灵敏和快速地检测口腔流体中分析物。本专利技术的另一个目的是提供一种生产所述侧向流免疫层析检测试条的方法。本专利技术的另外一个目的是提供一种适于灵敏和快速地检测口腔流体中分析物的灵敏方法。本专利技术的另外一个目的是提供用于灵敏和快速地检测口腔流体中分析物的试剂盒。因此，在第一个方面，本专利技术提供一种用于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析检测试条，其基本上由样品垫、偶联物垫、检测区和对照区垫组成，所述垫由至少一种基质材料制成，其中所述偶联物垫位于样品垫的下游且其上用偶联物划条纹，所述检测区和对照区垫位于该偶联物垫的下游且包含检测区和对照区，其中检测区固定有特异性结合试剂，所述特异性结合试剂特异性地与靶分析物结合；且对照区固定有第二捕获试剂。在此方面的一个实施方案中，待检测分析物选自抗以下抗原的抗体:传染性疾病、激素、生长因子、治疗药物、滥用药物及滥用药物的代谢产物。在另一个实施方案中，所述基质材料选自无机粉末，比如二氧化硅和氧化铝；玻璃纤维滤纸；天然聚合材料尤其是基于纤维素的材料、层析纸；合成或改性的天然聚合物比如硝酸纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚丙烯酰胺、交联葡聚糖、琼脂糖；以及其组合。在另一个实施方案中，样品垫的基质材料为玻璃纤维滤纸；偶联物垫的基质材料为聚酯材料；检测垫和对照垫的基质材料为硝酸纤维素膜。在另一个实施方案中，偶联物包含与第一捕获试剂偶联的标记物，所述第一捕获试剂捕获口腔流体中内源性抗体。所述标记物选自胶体金颗粒；元素或金属溶胶颗粒，包括硒、银、铁或碳；其它珠状颗粒，包括有色乳胶、脂质体和染料颗粒。优选地，所述标记物为胶体金颗粒。在另一个实施方案中,所述第一捕获试剂选自:抗IgG、IgM或IgA的抗体,蛋白A,蛋白G和伴刀豆球蛋白A。优选地，所述第一捕获试剂为蛋白A。在另一个实施方案中，所述特异性结合试剂选自以下的抗原:传染性疾病、激素、生长因子、治疗药物、滥用药物及滥用药物的代谢产物。在另一个实施方案中，传染性疾病的抗原为代表HIV蛋白免疫决定区的重组或合成肽，所述HIV蛋白尤其是选自HIV-1的gpl20和gp41以及HIV-2的gp36的HIV包膜蛋白。在另一个实施方案中，第二捕获试剂选自:抗IgG、IgM或IgA的抗体、蛋白A、蛋白G和伴刀豆球蛋白A，其中所述抗IgG的抗体为山羊抗人IgG抗体。在第二个方面，本专利技术提供生产权利要求1-17中任一项所定义的侧向流免疫层析检测试条的方法，其包括:a)将偶联物在偶联物垫上划条纹；b)将所述特异性结合试剂固定到检测区和对照区垫的检测区上；c)将第二捕获试剂固定于检测区和对照区垫的对照区上；d)用封闭剂封闭所述每个垫；以及e)对齐所得垫使得相互之间流体连通。在一个实施方案中，在划条纹之前，偶联物在简单或复合糖溶液中被稳定化，其中所述糖溶液包含蔗糖、海藻糖、锡酸钾以及过氧化氢脲。在另一个实施方案中，使用生物素/链亲合素连接子将所述特异性结合试剂固定于检测区和对照区上。在另一个实施方案中，使用生物素/链亲合素连接子将所述特异性结合试剂固定于对照区上。在另一个实施方案中，所述封闭剂包含非离子型、阳离子型、阴离子和两性离子型的去污剂；糖，包括蔗糖、果糖；或蛋白质，包括牛血清白蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析检测试条，其基本上由样品垫、偶联物垫、检测区和对照区垫组成，所述垫由至少一种基质材料制成，其中所述偶联物垫位于所述样品垫的下游，并且用偶联物在其上划条纹；所述检测区和对照区垫位于偶联物垫的下游，且含有检测区和对照区，其中所述检测区固定有特异性结合靶分析物的特异性结合试剂；且所述对照区固定有第二捕获试剂。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测口腔流体中分析物的侧向流免疫层析检测试条，其基本上由样品垫、偶联物垫、检测区和对照区垫组成，所述垫由至少一种基质材料制成，其中 所述偶联物垫位于所述样品垫的下游，并且用偶联物在其上划条纹； 所述检测区和对照区垫位于偶联物垫的下游，且含有检测区和对照区，其中 所述检测区固定有特异性结合靶分析物的特异性结合试剂；且 所述对照区固定有第二捕获试剂。2.根据权利要求1的检测试条，其中所述待检测的分析物选自抗以下之抗原的抗体:传染性疾病、激素、生长因子、治疗药物、滥用药物及滥用药物的代谢产物。3.根据权利要求1的检测试条，其中所述基质材料选自无机粉末，比如二氧化硅和氧化铝；玻璃纤维滤纸；天然聚合材料尤其是基于纤维素的材料、层析纸；合成或改性的天然聚合物比如硝酸纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚丙烯酰胺、交联葡聚糖、琼脂糖；以及其组合。4.根据权利要求3的检测试条，其中所述用于样品垫的基质材料是玻璃纤维滤纸。5.根据权利要求3的检测试条，其中所述用于偶联物垫的基质材料是聚酯材料。6.根据权利要求3的检测试条，其中所述用于检测垫和对照垫的基质材料是硝酸纤维素膜。7.根据权利要求1的检测试条，其中所述偶联物包含与第一捕获试剂偶联的标记物，所述第一捕获试剂捕获口腔流体的内源性抗体。8.根据权利要求7的检测试条，其中所述标记物选自胶体金颗粒；元素或金属溶胶颗粒，包括硒、银、铁或碳；其它珠状颗粒，包括有色乳胶、脂质体和染料颗粒。9.根据权利要求7或8的检测试条，其中所述标记物是胶体金颗粒。10.根据权利要求7的检测试条，其中所述第一捕获试剂选自抗IgG、IgM或IgA的抗体，蛋白A,蛋白G和伴刀?球蛋白Α。11.根据权利要求8的检测试条，其中所述第一捕获试剂是蛋白Α。12...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·迈克尔·恩尼斯，保罗·罗伯特·史密斯，罗纳德·威廉·明克，詹姆斯·理查德·乔治，托比·德沃拉赫·戈特弗里德，格伦·迈克尔·福德，
申请(专利权)人：北京玛诺生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11