一种GBSS1比酶活测定方法技术

本发明专利技术涉及一种GBSS1比酶活测定方法。提供了一种颗粒结合型淀粉合成酶(GBSS1酶)比酶活测定的方法，应用ELISA技术对酶提取物在GBSS1蛋白水平上进行了定量，并对以往的GBSS1酶活测定步骤进行了简化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
；更具体地，本专利技术涉及一种GBSS 1比酶活测定方法。
技术介绍
水稻蜡质基因(Wx)编码的GBSS1(Granule-Bound Starch Synthase 1，2.4.1.242)负责水稻种子胚乳中直链淀粉的合成(Sano Y et al(1985).Gamma Field Symp,24:63-77；Shapter et al(2009).J.Cereal Sci,49:4-11)。水稻蜡质基因的表达量、GBSS1酶活的高低与胚乳中直链淀粉的含量呈显著正相关(Wang ZY et al(1995).The Plant Journal,7:613-622；Sano Y et al(2008).Theor Appl Genet,116:979-989)。近20多年来，水稻蜡质基因的表达与调控规律的研究及其在稻米品质改良上的应用研究取得了极大的进展。在上述研究过程中，GBSS1酶活的测定是经常用到的常规实验方法。已有的GBSS1酶活的测定方法有两种，两种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定作物种子中颗粒结合型淀粉合成酶的比酶活的方法，其特征在
于，所述方法包括：
(1)从作物种子中提取颗粒结合型淀粉合成酶，获得酶提取液，作为待测
样品；采用酶联免疫吸附测定获得待测样品中颗粒结合型淀粉合成酶的蛋白量；
(2)将待测样品与支链淀粉、底物ADPG进行如(I)反应并记录颗粒结合型
淀粉合成酶反应时间：
之后加入磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸激酶，进行如(II)反应：
(3)测定反应(II)中生成的产物ATP的量，除以步骤(1)获得的颗粒结合型
淀粉合成酶的蛋白量以及步骤(2)记录的颗粒结合型淀粉合成酶反应时间，获得
颗粒结合型淀粉合成酶的比酶活。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，采用制作标准曲线的
方法获得待测样品中颗粒结合型淀粉合成酶的蛋白量。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，标准曲线如下制作：将颗粒结合
型淀粉合成酶标准品进行梯度稀释，记录每一梯度酶浓度，蛋白变性后，应用
酶颗粒结合型淀粉合成酶特异性抗体以及与酶颗粒结合型淀粉合成酶特异性抗
体结合的带显色标记的二抗进行免疫反应，之后显色反应，测定光吸收值，将
每一梯度酶浓度样品的光吸收值对酶浓度制成标准曲线。
4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，获得待测样品中颗粒结合型
淀粉合成酶的蛋白量包括：将待测样品进行蛋白变性，应用颗粒结合型淀粉合
成酶特异性抗体以及与酶颗粒结合型淀粉合成酶特异性抗体结合的带显色标
记的二抗进行免疫反应，之后进行显色反应，测定光吸收值；根据该...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡秀玲，刘德瑞，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：