本发明专利技术涉及医学检测领域，公开了一种免疫复合物缓冲解离剂，包括CIC分离剂、CIC洗涤剂、CIC复溶剂、CIC抗原(或抗体)缓冲液解离剂和CIC抗原(或抗体)缓冲液解离中和剂。本发明专利技术也公开了利用该种免疫复合物缓冲解离剂检测CIC的方法，通过分离、洗涤、复溶、解离CIC、中和，最后检测样品CIC中的抗原或抗体。本发明专利技术利用该种免疫复合物缓冲解离剂检测CIC的方法，建立了特异性检测CIC中抗原的标准操作流程和特异性检测CIC中抗体的标准操作流程，是现有CIC检测方法都无法解决的问题。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及医学检测领域，公开了一种免疫复合物缓冲解离剂，包括CIC分离剂、CIC洗涤剂、CIC复溶剂、CIC抗原(或抗体)缓冲液解离剂和CIC抗原(或抗体)缓冲液解离中和剂。本专利技术也公开了利用该种免疫复合物缓冲解离剂检测CIC的方法，通过分离、洗涤、复溶、解离CIC、中和，最后检测样品CIC中的抗原或抗体。本专利技术利用该种免疫复合物缓冲解离剂检测CIC的方法，建立了特异性检测CIC中抗原的标准操作流程和特异性检测CIC中抗体的标准操作流程，是现有CIC检测方法都无法解决的问题。【专利说明】一种免疫复合物缓冲解离剂及其应用
本专利技术涉及医学检测领域，尤其涉及一种免疫复合物缓冲解离剂，还具体涉及了该种免疫复合物缓冲解离剂检测Cic的应用。
技术介绍
细菌、病毒等病原体侵入机体后或致敏物质(抗原，含自身抗原)刺激机体发生免疫应答，进而产生特异性免疫效应细胞或抗体，并与抗原发生特异性结合，所得到的复合物称为免疫复合物(又称抗原抗体复合物，immune complex, IC),主要有IgG, IgM, IgA, IgE型免疫复合物，其中以IgG和IgM最常见。由于抗原与抗体比例不同，所形成的IC分子大小各异，通常有三种形式:一是抗原抗体比例适当时，形成大分子的不溶性IC(大于19S)，易被吞噬细胞捕获、吞噬和清除。二是抗原量过剩时，形成小分子的可溶性IC (小于6.6S)，易透过肾小球滤过随尿排出体外。三是抗原量稍过剩时，形成中等大小的可溶性IC(8.8-19S)，它既不被吞噬细胞清除，又不能通过肾小球滤过排出，可较长时间游离于血液和其他体液中，又称循环免疫复合物(circulating immuno complex, CIC)。正常情况下，机体内的游离抗原与相应抗体结合形成1C，可被机体的防御系统清除，作为清除异物抗原的一种方式，对机体有利。但在某些病理情况下，体内形成的IC不能被及时清除，可在局部沉积，通过激活补体，并在血小板、中性粒细胞等参与下，引起一系列连锁反应而导致组织损伤，出现临床症状，称为免疫复合物病(immuno complex disease,I⑶)。检查组织内或循环体液中IC的存在有助于某些疾病的诊断、发病机制的研究、预后评估、病情活动观察和疗效判断等。因此，准确、特异、灵敏检测免疫复合物对疾病的诊断、治疗和预后评估具有重要的临床意义，CIC的检测日益受到重视。世界卫生组织(WHO)曾组织进行CIC检测方法学研究，发现尚无任何一种技术同时具备特异、灵敏、批量高效、重复性好的所有特点。由于方法的复杂性、敏感性和所检测CIC类型的局限性，目前的常用CIC检测技术均受到免疫复合物内免疫球蛋白种类及亚类、复合物大小、抗原与抗体比例、固定补体的能力等因素影响，在临床免疫学实验室应用受到很大限制。
技术实现思路
本专利技术针对现有CIC检测技术及检测过程中，不能同时具备特异、灵敏、批量高效、重复性好、不受干扰的技术问题，公开了一种免疫复合物缓冲解离剂，还公开了该种免疫复合物缓冲解离剂的应用领域。进而解决了以上的技术问题。为了解决上述技术问题，本专利技术通过下述技术方案得以解决。一、针对CIC中抗原的部分:一种免疫复合物缓冲解离剂，以如下体积比例配比计，各组分及含量为，135 μ 1-165 μ I 的 CIC 分离剂、290 μ 1-315 μ I 的 CIC 洗涤剂、5 μ 1-16 μ I 的 CIC 复溶剂、65 μ 1-76 μ I的CIC抗原缓冲液解离剂和65 μ 1-76 μ I的CIC抗原缓冲液解离中和剂。以制备的HBsAg-抗-HBs免疫复合物为例，本专利技术的试剂配方可以使CIC中的抗原解离率达到76.5%-83.8%(抗原解离率:指CIC解离后检测到的抗原量与实际CIC中抗原量的百分比)。而蛋白酶类消化法、强酸解离法、表面活性剂解离法的抗原解离率均在10%-20%以下。其中，每IL的CIC分离剂包括以下组分:5.2g-7.7g的硼砂、4.lg-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化钠、100 μ 1-500 μ I的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。CIC分离剂的作用如下:当每IL的CIC分离剂中包括5.2g-7.7g的硼砂、4.lg-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化钠、100 μ 1-500 μ I的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水时，被分离的CIC达到最大量，同时改用氯化钠也可避免了传统沉淀方法中氟化钠残留对后续检测抗原的干扰。本专利技术采用的聚乙二醇，作为优选选用聚乙二醇6000 ;本专利技术中提到的液体生物防腐剂为Proclin-300。每IL的CIC洗涤剂包括以下组分:5.2g-7.7g的硼砂、4.lg-6.1g的硼酸、35g_45g的聚乙二醇、8.0g-11.7g的氯化钠、100 μ 1-500 μ I的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。以上配方的CIC洗涤剂主要针对CIC分离剂的配方进行设计，其作用是洗去体液标本中多余的杂蛋白。本专利技术采用的聚乙二醇，作为优选选用聚乙二醇6000 ;本专利技术中提到的液体生物防腐剂为Proclin-300。每IL的CIC复溶剂包括以下组分:8.0g-9.5g的氯化钠、0.0lg-0.03g的氢氧化钠、50 μ 1-500 μ I的聚乙二醇辛基苯基醚、100 μ 1-500 μ I的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。CIC复溶剂针对解离时的缓冲量大小而设计，以上配方的CIC复溶剂对分离CIC的损伤程度最小；采用等渗的聚乙二醇辛基苯基醚，低浓度的聚乙二醇辛基苯基醚协助溶解CIC ；本专利技术所采用的聚乙二醇辛基苯基醚又叫Triton X-100 ;本专利技术中提到的液体生物防腐剂为 Proclin-300。作为优选，每IL的CIC抗原缓冲液解离剂包括以下组分:3.5g-5.5g的甘氨酸、9.0ml-15.0ml质量分数为35%_37%的浓盐酸、0.35g-0.51g的氯化钠、100 μ 1-500 μ I的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。CIC抗原缓冲液解离剂使CIC中抗原达到最大程度的解离。如以制备的HBsAg-抗-HBs免疫复合物为参照，抗原解离率达到76.5%_83.8% ;本专利技术中提到的液体生物防腐剂为Proclin-300。作为优选，每IL的CIC抗原缓冲液解离中和剂包括以下组分:16g-24g的氨基丁三醇、5.7g-8.6g的氯化钠、100 μ 1-500 μ I的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。CIC抗原缓冲液解离中和剂主要是对CIC解离后的抗原进行中和，使渗透压、pH达到抗原的最适环境，以利于对抗原的检测；本专利技术中提到的液体生物防腐剂为Proclin-300。以上提到的该种免疫复合物缓冲解离剂应用于患有感染性疾病、内分泌代谢性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤疾病患者的血清、胸腹水、尿液、脑脊液、关节腔液的CIC中抗原的检测。感染性疾病、内分泌代谢性疾病、自身免疫性疾病、部分肿瘤疾病等患者的血清、胸腹水、尿液、脑脊液、关节腔液等体液标本中是否存在相应CIC，我们可以通过分离CIC，从而推断患者血清、胸腹水、尿液、脑脊液、关节腔液等体液中是否存在相应特异性标志物的CIC以及含量高低，以了解CIC本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种免疫复合物缓冲解离剂，其特征在于：以如下体积比例配比计，各组分及含量为，135μl‑165μl的CIC分离剂、290μl‑315μl的CIC洗涤剂、5μl‑16μl的CIC复溶剂、65μl‑76μl的CIC抗原缓冲液解离剂和65μl‑76μl的CIC抗原缓冲液解离中和剂；其中，每1L的CIC分离剂包括以下组分：5.2g‑7.7g的硼砂、4.1g‑6.1g的硼酸、70g‑90g的聚乙二醇、6.2g‑9.2g的氯化钠、100μl‑500μl的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水；每1L的CIC洗涤剂包括以下组分：5.2g‑7.7g的硼砂、4.1g‑6.1g的硼酸、35g‑45g的聚乙二醇、8.0g‑11.7g的氯化钠、100μl‑500μl的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水；每1L的CIC复溶剂包括以下组分：8.0g‑9.5g的氯化钠、0.01g‑0.03g的氢氧化钠、50μl‑500μl的聚乙二醇辛基苯基醚、100μl‑500μl的液体生物防腐剂、余量为蒸馏水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：成军，戴玉柱，江晓肖，张益明，马炬明，陈达伟，孙长贵，王国政，
申请(专利权)人：中国人民解放军第一一七医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。