通过邻位连接技术检测ERα/Src/PI3K复合物作为乳腺癌中的预后和治疗诊断标志。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】ERa/Src/P13K复合物的检测作为乳腺癌的预测标志 本专利技术涉及确定乳腺癌预后的方法，涉及识别可能对抗雌激素类的治疗有响应的 乳腺癌的方法，涉及使用Src/PI3K抑制剂的治疗和治疗乳腺癌患者的方法。 由于ERa在乳腺癌的发展和进展中起主要作用，已对雌激素信号传递途径进行 了深入研宄。目前乳腺癌的内分泌治疗主要基于靶向ERa信号传递途径：使用芳香酶 抑制剂减少雌激素丰度，使用他莫昔芬和雷洛昔芬拮抗ERa功能或使用氟维司群下调 ERa表达。然而，对内分泌治疗的抗性是成功治疗乳腺癌的一个主要障碍（Musgrove and Sutherland，2009)。存在实际的需求来寻找可预测对治疗的抗性的标志。迄今为止，细胞核 中ERa表达是目前仅有的对内分泌治疗响应的已知的生物标志。因此，非基因ERa信号 传递从未在临床实践中评估。我们之前报告了 ERa在精氨酸260上的甲基化（通过精氨 酸甲基转移酶PRMT1)，是其与Src、PI3K和黏着斑激酶（FAK)结合以及其下游效应物Akt活 化的先决条件（Le Romancer M.等人，2010 ;LeRomancer M.等人，2008)。而且，我们已知该 修饰在正常乳腺上皮细胞的细胞质中发生且在乳腺肿瘤的亚组中高度表达。然而，我们在 一系列的164例乳腺癌中没有找到任何ERa甲基化和患者存活之间的关联（Le Romancer M.等人，2008)。 酪氨酸激酶Src也被认为是潜在靶点且Src抑制剂如达沙替尼或博舒替尼已在II 期临床试验中测试（Araujo和Logothetis，2010)。然而，迄今为止效果十分令人失望。事 实上，达沙替尼作为单一药物使用对患有TNBC的患者或具有严重治疗的转移性乳腺癌的 患者具有有限的活性，且其发展成ER a -阳性肿瘤。然而，体外研宄表明将抗雌激素和Src 抑制剂组合增强了生长抑制。而且，临床试验正在将达沙替尼与其它治疗组合。 然而，即使一些临床研宄给出了满意的结果，仍然对于识别生物标记存在真实的 需求，该生物标记能预测哪些患者可受益于这些单独或组合的抑制剂。
技术实现思路
本专利技术的第一方面为确定患者中乳腺癌的预后的方法，包括以下步骤： a)测量之前从所述患者获取的乳腺肿瘤样品的癌细胞的细胞质中ERa/Src/ PI3K蛋白复合物的表达水平， b)如果ER a /Src/PI3K蛋白复合物在所述癌细胞的细胞质中过表达，则将该乳腺 癌分类为具有较差的预后。 在优选的实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER+。 优选地，ERa /Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ERa和抗Src抗体 的邻位连接技术（Proximity Ligation Assay)检测ERa /Src蛋白复合物而测量，和/或 ER a /Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ER a和抗PI3K抗体的邻位连接技术检 测ERa /PI3K蛋白复合物而测量。 在一个实施方案中，在步骤b)中将ERa/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平与健康 乳腺组织中ERa /Src/PI3K蛋白复合物的中值表达水平相比较。 在另一实施方案中，在步骤b)中将ERa/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平与乳腺 肿瘤样品中ERa /Src/PI3K蛋白复合物的中值表达水平相比较。 本专利技术的另一目的为识别可能对抗雌激素类的治疗和用Src抑制剂和/或PI3K 抑制剂的治疗有响应的乳腺癌的方法，包括以下步骤： a)测量之前从所述患者获取的乳腺肿瘤样品的癌细胞的细胞质中ERa/Src/ PI3K蛋白复合物的表达水平， b)如果该ERa /Src/PI3K蛋白质复合物在所述癌细胞的细胞质中过表达，则将该 乳腺癌分类为可能对抗雌激素类的治疗和用Src抑制剂和/或PI3K抑制剂的治疗有响应 的。 在一个实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER+。 在另一实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER-。 优选地，ERa /Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ERa和抗Src抗体的 邻位连接技术检测ER a /Src蛋白复合物而测量，和/或ER a /Src/PI3K蛋白复合物的表达 水平通过使用抗ERa和抗PI3K抗体的邻位连接技术检测ERa /PI3K蛋白复合物而测量。 本专利技术进一步涉及包含Src抑制剂和/或PI3K抑制剂的组合物，其用于治疗乳腺 癌患者的方法，其中所述用途包括以下步骤： a)测量之前从所述患者获取的乳腺肿瘤样品的癌细胞的细胞质中ERa/Src/ PI3K蛋白复合物的表达水平， b)选择患有乳腺癌肿瘤的乳腺癌患者，其中该ERa /Src/PI3K蛋白质复合物在所 述癌细胞的细胞质中过表达， c)向所述患者给药治疗有效量的Src抑制剂和/或PI3K抑制剂。 优选地，在步骤c)中该Src抑制剂和/或该PI3K抑制剂与抗雌激素组合给药。 优选地，在步骤a)中ERa/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平通过使用抗ERa和 抗Src抗体的邻位连接技术检测ERa /Src蛋白复合物而测量，和/或ERa /Src/PI3K蛋白 复合物的表达水平通过使用抗ER a和抗PI3K抗体的邻位连接技术检测ER a /PI3K蛋白复 合物而测量。 在一个实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER+。 在另一实施方案中，该乳腺癌已被分类为ER-。 专利技术详沐 ERa的甲基化形式在乳腺细胞的细胞质中被检测到，且在乳腺肿瘤的亚组中高度 表达。然而，该甲基化的水平不是乳腺癌的预后标志。本专利技术显著地表明乳腺肿瘤细胞的 细胞质中ER a /Src/PI3K复合物的过表达与乳腺癌患者较差的预后相关联。 本专利技术涉及确定患者中乳腺癌预后的方法。 本专利技术还涉及识别可能对抗雌激素类的治疗和/或对用Src抑制剂和/或PI3K 抑制剂的治疗有响应的乳腺癌的方法。 优选地，本专利技术的方法为体外方法。 术语"ERa /Src/PI3K复合物"是指三种不同蛋白质在蛋白质复合物中的联合。该 蛋白质复合物已描述于乳腺细胞的细胞质和乳腺肿瘤细胞的细胞质中。 术语"ERa "是指ESR1基因（HGNC ID = HGNC:3467)编码的人雌激素受体蛋白质。 术语"Src"是指SRC基因（HGNC: 11283)编码的人酪氨酸激酶。 术语"PI3K"是指通过PIK3R1基因（NM_181523)编码的磷脂酰肌醇3-激酶调节 亚单位。 本专利技术基于乳腺肿瘤细胞的细胞质中ERa /Src/PI3K蛋白质复合物的检测。更优 选地，本专利技术基于乳腺肿瘤细胞的细胞质中蛋白质ERa和SRC之间的相互作用的检测和/ 或蛋白质ERa和PI3K之间的相互作用的检测。 这些蛋白质之间的相互作用或复合物的形成可通过任何合适的方法检测和测量。 本领域技术人员已知多种方法来检测和测量导致形成蛋白复合物的蛋白质之间的相互作 用。在本专利技术中，ERa/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平优选通过使用抗ERa和抗Src抗 体的邻位连接技术（PLA)检测ERa/Src蛋白复合物而进行，和/或ERa/Src/PI3K蛋白复 合物的表达水平通过使用抗ER a和抗PI3K抗体的邻位连接技术检测ER a /PI3K蛋白复合 物而测量。 任何合适的抗体可根据本领域技术人本文档来自技高网...
【技术保护点】
在患者中识别对于抗雌激素类的治疗和用Src抑制剂和/或PI3K抑制剂的治疗可能有响应的乳腺癌的方法或确定乳腺癌的预后的方法，包括以下步骤:a.测量从所述患者之前获取的乳腺肿瘤样品的癌细胞的细胞质中ERα/Src/PI3K蛋白复合物的表达水平，b.如果ERα/Src/PI3K蛋白复合物在所述癌细胞的细胞质中过表达，则将该乳腺癌分类为对于抗雌激素类的治疗和用Src抑制剂和/或PI3K抑制剂的治疗可能有响应的或分类为具有较差的预后。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M利罗曼瑟谢里菲，O特雷丹，I特雷勒克斯，
申请(专利权)人：利昂贝拉尔中心，国家科学研究中心，国家健康和医学研究院INSERM，克劳德伯纳德里昂第一大学，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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