肌炎制造技术

本发明专利技术涉及用于鉴定处于发展特发性炎性肌病的风险中的受试者和/或诊断患有特发性炎性肌病的受试者的方法，优选其中所述特发性炎性肌病是包涵体肌炎。本发明专利技术提供了用于研究(自身)抗体在来源于受试者的样品中的存在或不存在的诊断方法、特定抗原的用途以及试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用5"-核苷酸酶检测包涵体肌炎的用途专利
本专利技术涉及肌病的领域，特别地涉及包涵体肌炎(IBM)的诊断。特别地，本专利技术公开了5’-核苷酸酶在肌病(特别地IBM)的诊断中的用途。还提供了监测疾病进展和对治疗的响应的方法，区分炎性肌病的不同亚型的方法，以及用于诊断肌病(特别地包涵体肌炎)的试剂盒。专利技术背景特发性炎性肌病(IIM)，也称为肌炎，是(骨骼)肌的自身免疫疾病的总称。皮肌炎(DM)、多肌炎(PM)和IBM是所述特发性炎性肌病的主要亚型(http://www.ninds.nih.gov/disorders/inflammatory_myopathies/detail_inflammatory_myopathies.htm;http://www.myositis.org/template/page.cfm?id=2;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK6196/)。DM是特征在于肌肉炎症和特殊皮疹的肌肉疾病。DM最常见地在5-15岁的儿童和40-60岁的成人中发生。女性比男性更常发生该病况。典型症状包括吞咽困难、肌无力、僵硬或酸痛、紫红色或紫色上眼睑、紫红色皮疹和/或呼吸短促。心脏受累和肺功能障碍是可能的，此外DM与升高的发展癌症的风险相关。利用皮质类固醇和抑制免疫系统的其它药物治疗DM。PM是相似的病况，但可发生症状而无特定皮疹。其最常见地在年龄50至70岁之间发生，或5至15岁的儿童中发生，且女性患病是男性的2倍。主要治疗方案也是利用皮质类固醇药剂。IBM是称为炎性肌病的肌肉疾病的第三大亚型。该名称最早由Yunis和Samaha于1971年用于肌病的特殊病例，所述病例在表型上显示慢性PM的存在，但在肌肉活检中显示细胞质空泡和包涵体。肌无力在IBM中的发作通常是渐进的(经历数月或数年)并且影响近端(靠近身体的躯干)和远端(远离躯干)肌肉。对于一些个体，该病症始于引起捏、按和握物体困难的腕和指的乏力。此外，吞咽困难也在约一半的IBM病例中发生。患者可最终止于轮椅中，且在疾病的更晚期，大部分患者需要许多帮助以进行日常生活。IBM是在45岁以上的人中最常获得的肌肉疾病，尽管疾病可更早地发生。IBM在男性中比在女性中更常发生并且特征在于肌肉变性和炎症的组合(参见NeedhamM,NeuromusculDisord.2008;18:6-16和AmatoAA,Journalofneurology,neurosurgery,andpsychiatry.2009;80:1186-1193)。与DM和PM相反，IBM通常抗所有疗法，并且其进展速度似乎不受目前可获得的治疗影响。WO2006115448提出，使用生长激素、其促泌素或其混合物来治愈IBM或抑制与其相关的症状。已在DM和PM中检测到循环自身抗体(关于综述，参见MammenAL(2010)AnnNYAcadSci1184:134–153和VanDooren等人(2011)AutoimmunHighlights2:5-20)。这些抗体(例如针对氨酰基-tRNA合成酶的抗体)以不同的流行率存在。肌炎特异性自身抗体(MSA)例如抗-Jo-1和抗-Mi-2与PM和DM中的特定临床表型相关，但仅罕见地发现于IBM中。这一点用于这些病况的诊断。目前，IBM的诊断依赖于侵入性诊断法，所述方法包括，就边缘空泡和蛋白质包涵体的存在，检查患者的肌肉活检组织或重复进行肌肉活组织检查。由于选择偏爱性的原因，空泡可在活组织检查的肌肉组织中缺失，在该情况下重复的活组织检查是建立诊断所必需的。不幸地，由于活组织检查的错误解释而造成的误诊在区分PM和/或DM与IBM方面造成严重问题。此外，肌肉活组织检查是侵入性方法。这些方面强调了对新型的、更具特异性的和更加患者友好的诊断炎性肌病，特别地诊断IBM和区分其与PM和/或DM的方法的需要。人受试者的正确亚型的确立将防止不必要地应用潜在有毒的疗法。专利技术概述本专利技术人现已将抗原5-核苷酸酶及其片段鉴定为IBM的自身抗体的靶。此外，本专利技术人已鉴定可用作此类自身抗体的靶和可包含自身抗体所识别的一个或多个表位的5’-核苷酸酶的区域。因此，在第一方面，本专利技术涉及用于鉴定处于发展特发性炎性肌病的风险中的受试者和/或诊断患有特发性炎性肌病的受试者的方法，优选其中所述特发性炎性肌病是包涵体肌炎，所述方法包括步骤：a)提供所述受试者的测试样品；b)确定抗5’-核苷酸酶抗体是否存在于所述样品中。可在本专利技术的方法中确定水平和存在或仅仅存在。所述抗5’-核苷酸酶抗体和/或其片段的存在表明，发展特发性炎性肌病包涵体肌炎的风险或患有所述疾病。同时，所述抗5’-核苷酸酶抗体和/或其片段的存在也表明，不存在发展特发性炎性肌病皮肌炎和/或多肌炎的风险或不患有所述疾病。因此，本专利技术还提供了用于区分特发性炎性肌病的亚型的方法。受试者可以是，怀疑处于发生特发性炎性肌病的风险中和/或怀疑患有特发性炎性肌病的的受试者，优选其中所述特发性炎性肌病是包涵体肌炎。在第二方面，本专利技术提供了用于监测受试者的包涵体肌炎的进展和/或测定受试者对治疗包涵体肌炎的疗法的响应的方法，所述方法包括步骤：a)在第一时间点提供所述受试者的第一测试样品，和在第二时间点提供所述受试者的第二测试样品；b)测定所述第一和第二样品中的抗5’-核苷酸酶抗体的水平；c)将所述第一样品中的抗5’-核苷酸酶抗体的水平与所述第二样品相比较。该方法可包括，(d)基于所述第一样品与所述第二样品之间的抗5’-核苷酸酶抗体或其片段的水平的比较，测定所述受试者的包涵体肌炎的进展和/或对治疗包涵体肌炎的疗法的响应。所述受试者的包涵体肌炎的进展和/或对治疗包涵体肌炎的疗法的响应，基于所述第一样品与所述第二样品之间的抗5’-核苷酸酶抗体和片段的水平的比较。本专利技术的方法优选是这样的方法，其中5’-核苷酸酶是NT5C1A(人5’-核苷酸酶，细胞溶质IA)或NT5C1B(人5’-核苷酸酶，细胞溶质IB)，优选NT5C1A或从其获得的片段。或者，根据本专利技术的方法优选为这样的方法，其中5’-核苷酸酶包含SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2的、或与SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:2具有至少90%、更优选至少95%、更优选至少98%、最优选至少99%同一性的氨基酸序列的至少30个、40个、50个、100个、200个、300个、优选至少350个、最优选全部连续氨基酸。例如，有利地，5’-核苷酸酶可包含一个或多个区域，所述区域可用作自身抗体的靶，和可包含本文中显示的自身抗体的一个或多个表位。此类区域的非限定性实例包括5’-核苷酸酶IA的氨基酸25-50、221-243和341-368的区域。在本专利技术的优选方面，提供了方法，其中测定抗5’-核苷酸酶抗体的存在和/或水平的实际步骤是通过测定所述抗体与5’-核苷酸酶和/或与所述5’-核苷酸酶的片段之间的相互作用、结合、缔合来进行的，其中所述片段是具有来源于所述5’-核苷酸酶的至少5个，优选至少6个，更优选至少7个连续氨基酸的片段。5’-核苷酸酶或片段可来自哺乳动物来源，可以是合成的，或可通过任何方法产生，只要其能够(特异性)识别并且结合可存在于获自包涵体肌炎患本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴定处于发展特发性炎性肌病的风险中的受试者和/或诊断患有特发性炎性肌病的受试者的方法，优选其中所述特发性炎性肌病是包涵体肌炎，所述方法包括步骤：a)提供所述受试者的测试样品；b)测定抗5’‑核苷酸酶抗体是否存在于所述样品中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.07 NL 2007065;2011.07.07 US 61/505,2331.用于检测抗NT5C1A抗体的工具在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于鉴定处于发展包涵体肌炎的风险中的受试者和/或诊断患有包涵体肌炎的受试者，所述鉴定或诊断包括步骤：a)提供所述受试者的测试样品；b)测定抗NT5C1A抗体是否存在于所述样品中。2.权利要求1的用途，其中所述受试者是被怀疑处于发展特发性炎性肌病的风险中的受试者和/或被怀疑患有特发性炎性肌病的受试者。3.权利要求2的用途，其中所述特发性炎性肌病是包涵体肌炎。4.用于检测抗NT5C1A抗体的工具在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于区分患有特发性炎性肌病的受试者的特发性炎性肌病的亚型，其中所述特发性炎性肌病是皮肌炎或多肌炎或包涵体肌炎，所述区分包括步骤：a)提供所述受试者的测试样品；b)测定抗NT5C1A抗体是否存在于所述样品中。5.权利要求4的用途，其中抗NT5C1A抗体在所述样品中的存在指示包涵体肌炎的诊断，并且抗NT5C1A抗体在所述样品中的不存在指示皮肌炎或多肌炎的诊断。6.用于检测抗NT5C1A抗体的工具在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于监测受试者的包涵体肌炎的进展和/或用于测定受试者对治疗包涵体肌炎的疗法的响应，所述监测或测定包括步骤：a)在第一时间点提供所述受试者的第一测试样品，和在第二时间点提供所述受试者的第二测试样品；b)使用所述NT5C1A和/或其片段来测定所述第一测试样品和第二测试样品中的抗NT5C1A抗体的水平；c)将所述第一测试样品中的抗NT5C1A抗体的水平与所述第二测试样品相比较。7.权利要求1－6中任一项的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的工具是NT5C1A或其片段。8.权利要求7的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少30个连续氨基酸。9.权利要求8的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少40个连续氨基酸。10.权利要求8的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少50个连续氨基酸。11.权利要求8的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少100个连续氨基酸。12.权利要求8的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少200个连续氨基酸。13.权利要求8的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少300个连续氨基酸。14.权利要求8的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少350个连续氨基酸。15.权利要求8的用途，其中所述用于检测抗NT5C1A抗体的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的全部连续氨基酸。16.权利要求6的用途，其中测定所述抗NT5C1A抗体的存在和/或水平的步骤是通过测定所述抗体与NT5C1A和/或与NT5C1A的片段之间的相互作用来进行的，其中所述片段是来源于所述NT5C1A的至少5个连续氨基酸的片段。17.权利要求16的用途，其中所述片段是来源于所述NT5C1A的至少6个连续氨基酸的片段。18.权利要求16的用途，其中所述片段是来源于所述NT5C1A的至少7个连续氨基酸的片段。19.权利要求16的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具是NT5C1A、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A。20.权利要求16的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的至少30个连续氨基酸。21.权利要求20的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的至少40个连续氨基酸。22.权利要求20的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的至少50个连续氨基酸。23.权利要求20的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的至少100个连续氨基酸。24.权利要求20的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的至少200个连续氨基酸。25.权利要求20的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的至少300个连续氨基酸。26.权利要求20的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的至少350个连续氨基酸。27.权利要求20的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具、或用于测定与抗体的相互作用的片段源自NT5C1A，其包含SEQIDNO:1的全部连续氨基酸。28.权利要求16的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少5个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸25至50的区域。29.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少6个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸25至50的区域。30.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少7个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸25至50的区域。31.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少5个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸221至243的区域。32.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少6个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸221至243的区域。33.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少7个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸221至243的区域。34.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少5个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸341至368的区域。35.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少6个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸341至368的区域。36.权利要求28的用途，其中所述片段包含来自NT5C1A的区域的至少7个连续氨基酸，所述区域是：SEQIDNO:1的氨基酸341至368的区域。37.权利要求1－6和8－36中任一项的用途，其中所述测试样品是血液样品。38.权利要求1－6和8－36中任一项的用途，其中所述受试者是人受试者。39.权利要求1－6和8－36中任一项的用途，其中所述试剂盒还包括至少一种抗原，所述抗原选自Mi-2、Ku、PM/Scl-100、PM/Scl-75、SRP、OJ、EJ、PL-12、PL-7、Ro-52、Jo-1、HisRS、ThrRS、AlaRS、GlyRS、IleRS、AsnRS、TyrRS、PheRS、tRNAHis、tRNAAla、Tif1-γ、MDA5、SAE1、SAE2、丝氨酸-tRNASec-蛋白质复合物、Ro60、La、U1A、U1C、U1-70k、PMS1、PMS2、eEF1、核RNP和NXP-2。40.权利要求39的用途，其中所述抗原选自Mi-2α、Mi-2β、SRP54、SRP68、SRP72、Ku70和Ku80。41.用于检测抗NT5C1A抗体的工具在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测存在于获自受试者的测试样品中的抗体，从而鉴定处于发展包涵体肌炎的风险中的受试者和/或诊断患有包涵体肌炎的受试者，和/或监测受试者的包涵体肌炎的进展。42.权利要求41的用途，其中用于测定与抗体的相互作用的工具是NT5C1A或其片段。43.权利要求42的用途，其中用于检测抗体的或用于测定与抗体的相互作用的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少30个连续氨基酸。44.权利要求43的用途，其中用于检测抗体的或用于测定与抗体的相互作用的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少40个连续氨基酸。45.权利要求43的用途，其中用于检测抗体的或用于测定与抗体的相互作用的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少50个连续氨基酸。46.权利要求43的用途，其中用于检测抗体的或用于测定与抗体的相互作用的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的至少100个连续氨基酸。47.权利要求43的用途，其中用于检测抗体的或用于测定与抗体的相互作用的NT5C1A或其片段包含SEQIDNO:1的...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·J·M·普卢伊恩，W·L·L·P·普鲁克，B·G·M·万恩格伦，
申请(专利权)人：天主教大学基金会， 天主教大学基金会，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL