【技术实现步骤摘要】
无帽线性且无修饰尿苷的mRNA技术平台
[0001]本申请涉及mRNA构建
,尤其涉及一种无帽线性且无修饰尿苷的mRNA技术平台的构建方法及应用,所述应用包含用所述无帽线性且无修饰尿苷的mRNA技术平台制备mRNA疫苗或药物。
技术介绍
[0002]mRNA,也叫信使RNA(messenger RNA),负责传递DNA中储存的遗传信息,指导细胞中蛋白质的合成。理论上,应用mRNA技术将修饰后的mRNA分子送入细胞质,mRNA利用细胞质内的氨基酸进行翻译,可以生成任何所需的蛋白质。然而mRNA具有极不稳定、易引发不必要的免疫反应、易被体内外广泛存在的RNA酶降解、依赖于靶细胞中的翻译机制等特征,数十年来,科学家们为之探索。
[0003]研究发现mRNA存在许多化学修饰,在mRNA的稳定性方面具有生物学意义。目前,普遍应用于mRNA的化学修饰有以下几种:N1
‑
和N6
‑
甲基腺苷(m1A,m6A,m6Am)、3
‑
和5
‑
甲基胞嘧啶(m3C,m5C)、5
‑
羟甲基胞嘧啶(hm5C)、2'
‑
O
‑
甲基化(Nm)和假尿苷(Ψ)。
[0004]在上述化学修饰中,m1A上的甲基会阻断Watson
‑
Crick碱基配对,从而改变mRNA结构,促进翻译起始;m6A是可逆的动态RNA修饰,是RNA代谢调控不可或缺的组成部分,可调节mRNA的稳定性,剪接,转运,定位和翻译
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种无帽mRNA,其由a、b、c区域依次连接形成线性结构;所述a、b、c区域分别由腺嘌呤核糖核苷酸、鸟嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸中的至少一种组成;其中,a为5'非编码区;其含内部核糖体进入位点序列,所述内部核糖体进入位点序列用于介导核糖体亚基的内部进入从而指导所述mRNA进行翻译;b为编码区;其用于转录形成蛋白质;c为poly A片段区,其用于调节所述mRNA的翻译效率及增强所述mRNA的稳定性。2.根据权利要求1所述的无帽mRNA,其通过重组质粒转录制得,其中所述重组质粒为A~C的任一种:A.包含的目的基因为II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白胞外域基因gD
ED
,序列如SEQ ID NO:1所示;或与SEQ ID NO:1所示序列具有至少90%以上同源性且编码具有与基因gD
ED
编码蛋白相同活性的蛋白的基因;B.包含的目的基因为II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白截短基因gD
FR
,序列如SEQ ID NO:2所示;或与SEQ ID NO:2所示序列具有至少90%以上同源性且编码具有与基因gD
FR
编码蛋白相同活性的蛋白的基因;C.包含的目的基因为新型冠状病毒S蛋白Delta毒株突变基因S
δT
,序列如SEQ ID NO:3所示;或与SEQ ID NO:2所示序列具有至少90%以上同源性且编码具有与基因S
δT
编码蛋白相同活性的蛋白的基因。3.一种重组质粒,其转录可获得权利要求1所述的无帽mRNA,其中,所述重组质粒为A~C的任一种:A.包含的目的基因为II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白胞外域基因gD
ED
,序列如SEQ ID NO:1所示;或与SEQ ID NO:1所示序列具有至少90%以上同源性且编码具有与基因gD
ED
编码蛋白相同活性的蛋白的基因;B.包含的目的基因为II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白截短基因gD
FR
,序列如SEQ ID NO:2所示;或与SEQ ID NO:2所示序列具有至少90%以上同源性且编码具有与gD
FR
编码蛋白相同活性的蛋白的基因;C.包含的目的基因为新型冠状病毒S蛋白Delta毒株突变基因S
δT
,序列如SEQ ID NO:3所示;或与SEQ ID NO:3所示序列具有至少90%以上同源性且编码具有与基因S
δT
编码蛋白相同活性的蛋白的基因。4.一种mRNA
‑
LNP,其中所述mRNA
...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘滨磊,蔡林康,倪鹏,
申请(专利权)人:武汉滨会生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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