针对新冠病毒刺突蛋白的单克隆抗体及应用制造技术

本申请公开了一种针对新冠病毒S蛋白的单链抗体，此抗体是通过噬菌体展示库技术筛选获得。本申请的单克隆抗体S

【技术实现步骤摘要】
针对新冠病毒刺突蛋白的单克隆抗体及应用
[0001]本申请是名称为：“一种针对新冠病毒刺突蛋白的单克隆抗体及应用”，申请号为：“202210183112.X”的专利技术专利的分案申请，母案申请日为2022年2月27日。


[0002]本申请涉及生物医学领域，特别是涉及针对新型冠状病毒的单克隆抗体及应用。

技术介绍

[0003]新型冠状病毒囊膜上的刺突蛋白(spike protein,又称S protein或S蛋白)是侵染细胞过程中最重要的蛋白。刺突蛋白包括S1和S2两个亚基。S1中的受体结合区(receptor binding domain,RBD)与血管紧张素转化酶II(ACE2)分子互作，决定病毒的宿主范围和特异性；S2含有膜融合过程所需要的基本元件，实现病毒与细胞的融合。开发针对刺突蛋白的中和抗体是目前对抗新型冠状病毒的一种有效手段。单链抗体(single
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chain variable fragment,scFv)是由抗体重链的可变区与轻链的可变区在一段肽链的连接下构成。由于其分子量小，穿透力强，半衰期短等特点，在疾病的临床诊断、治疗、预防等方面具有重要作用和广阔的应用前景。
[0004]中国专利CN 112940111A利用纳米抗体文库，以2019新型冠状病毒的Spike S1+S2 ECD为靶点，经四轮淘筛获得一种针对新型冠状病毒的纳米抗体。经ELISA检测，该抗体对2019新型冠状病毒的Spike S1+S2 ECD靶点和Spike RBD靶点均具有较高的亲和力。中国专利CN 113402603A以新型冠状病毒S1为靶点，利用噬菌体展示筛选抗体库的技术，通过四轮固相淘筛，公开了一种针对新冠病毒S1蛋白的禽源单克隆单链抗体，该单克隆抗体与新型冠状病毒刺突蛋白S1亚基特异性结合，具有一定识别病毒的能力。中国专利CN 113264998 A公告了一种针对新型冠状病毒S1蛋白的人源单克隆抗体。该专利用COVID
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19康复期患者外周血中分离的B细胞构建了噬菌体单链抗体展示库。该库以新冠病毒S1蛋白进行包板筛选，并对三轮淘筛后得到的单克隆抗体进行鉴定。经流式细胞术检测与S1蛋白有较好的亲和性，并且对SARS
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CoV
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2假病毒有较好的中和效果。
[0005]目前虽然筛选出了许多针对新型冠状病毒的抗体，但面对病毒的不断突变及实际产品开发中遇到的诸多问题，我们需要更广阔的抗体文库资源和亲和能力更高的抗体来应对挑战。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的问题，本申请提供了一种抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用。
[0007]本申请的第一个方面是提供一种抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体，所述抗体能与新型冠状病毒刺突蛋白特异性结合(例如命名为S
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pro
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ab
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750，S
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pro
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ab
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753的单克隆抗体)。
[0008]通过本领域技术人员所熟知的技术手段，例如通过VBASE2数据库分析上面抗体序
列的CDR区的氨基酸序列。本领域普通技术人员可以理解，抗体的CDR区负责抗体对抗原的结合特异性。在已知抗体重链和轻链可变区序列的情况下，目前有几种确定抗体CDR区的方法，包括Kabat，IMGT，Chothia和AbM编号系统。然而，每种关于抗体或其变体的CDR的定义的应用都将在本文定义和使用的术语的范围内。如果给定该抗体的可变区氨基酸序列，则本领域技术人员通常可确定哪些残基包含特定CDR，而不依赖于该序列自身之外的任何实验数据。以下列举IMGT这种CDR编号系统定义的CDR的合适的氨基酸残基作为比较。
[0009]所述抗体S
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pro
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ab
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750的重链可变区(VH)为：
[0010]重链互补决定区1(H
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CDR1)：GYSFTTYW(SEQ ID NO:2)
[0011]重链互补决定区2(H
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CDR2)：IDPSDSVI(SEQ ID NO:4)
[0012]重链互补决定区3(H
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CDR3)：ARLDSTGYPTWFLY(SEQ ID NO：6)
[0013]所述抗体S
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pro
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ab
‑
750的轻链可变区(VL)为：
[0014]轻链互补决定区1(L
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CDR1)：QSVDYNGISY(SEQ ID NO:9)
[0015]轻链互补决定区2(L
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CDR2)：TAS(SEQ ID NO:11)
[0016]轻链互补决定区3(L
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CDR3)：QQNIEDPLT(SEQ ID NO:13)
[0017]所述抗体S
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pro
‑
ab
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753的重链可变区(VH)为：
[0018]重链互补决定区1(H
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CDR1)：GFNIKDTY(SEQ ID NO:16)
[0019]重链互补决定区2(H
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CDR2)：IDPANGNT(SEQ ID NO:18)
[0020]重链互补决定区3(H
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CDR3)：ASPRALLLRYYAMDY(SEQ ID NO:20)
[0021]所述抗体S
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pro
‑
ab
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753的轻链可变区(VL)为：
[0022]轻链互补决定区1(L
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CDR1)：QSVDYDGDSY(SEQ ID NO:23)
[0023]轻链互补决定区2(L
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CDR2)：AAS(SEQ ID NO:25)
[0024]轻链互补决定区3(L
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CDR3)：QQSNEDPFT(SEQ ID NO:27)
[0025]S
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pro
‑
ab
‑
750的重链可变区的框架区H
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FR与轻链可变区的框架区L
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FR如下：H
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FR1的序列如SEQ NO:1所示，H
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FR2的序列如SEQ NO:3所示，H
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FR3的序列如SEQ NO:5所示，H
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FR4的序列如SEQ NO:7所示，L
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FR1的序列如SEQ NO:8所示，H
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FR2的序列如SEQ NO:10所示，L
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FR3的序列如SEQ NO:12所示，L
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FR4的序列如SEQ NO:14所示。
[0026]H
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FR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗体或抗原结合片段，特异性结合新型冠状病毒刺突蛋白，其中，所述抗体或者抗原结合片段包含：(1)重链可变区的高可变区CDR；其包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；HCDR2为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；HCDR3为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列；(2)轻链可变区的高可变区CDR；其包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中LCDR1为SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；LCDR2为SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列；LCDR3为SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：(1)重链可变区的框架区FR；其包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，其中HFR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；HFR2为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；HFR3为SEQ ID NO.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘滨磊，王润杨，王迪，
申请(专利权)人：武汉滨会生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：