【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于mRNA递送的脂质纳米颗粒配制品
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年5月15日提交的美国临时申请序列号63/025,355的权益和优先权,所述申请的公开内容通过引用以其整体特此并入。
技术介绍
[0002]信使RNA(mRNA)疗法正在变成越来越重要的用于治疗多种疾病的方法。信使RNA疗法涉及将信使RNA施用至需要疗法的患者,以用于在患者体内产生由所述mRNA编码的蛋白质。脂质包裹的mRNA配制品如脂质纳米颗粒(LNP)组合物显示高度细胞摄取和蛋白质表达。脂质纳米颗粒配制品传统上使用乙醇作为脂质溶液的溶剂,然后将所述脂质溶液与mRNA溶液混合。
[0003]然而,易燃溶剂如乙醇的使用造成安全风险并增加生产成本,特别是在大规模应用中。另外,使用乙醇作为溶剂,目前也很难获得更适合于给药并减小下游处理体积和成本的低体积LNP配制品。低体积LNP配制品还因为它们允许床边混合以包括其他施用途径(例如,皮下或肌内)而是合意的。
技术实现思路
[0004]需要稳定、安全、划算的无乙醇LNP配制品,其具有用于在治疗用途中有效递送的高mRNA包裹效率。本专利技术尤其提供一种在不使用易燃溶剂的情况下将信使RNA包裹在脂质纳米颗粒中的稳定、安全、划算的方法,所述方法产生在治疗应用中具有用于mRNA递送的高包裹效率的LNP。在一个方面,本专利技术提供一种更安全且更划算的用于大规模制造过程的方法。在另一个方面,本专利技术提供一种用于以低体积产生LNP配制品的方法,其不仅减少制造中的下游处理,而且还适合于给药 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种将信使RNA(mRNA)包裹在脂质纳米颗粒(LNP)中的方法,所述方法包括以下步骤:将(a)包含一种或多种mRNA的mRNA溶液与(b)包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质和一种或多种PEG修饰的脂质的脂质溶液混合,并且其中混合所述mRNA溶液与所述脂质溶液的所述步骤包括在两亲性聚合物的存在下混合,以形成呈LNP配制品溶液的包裹在LNP内的mRNA(mRNA
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LNP)。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述两亲性聚合物包含普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇(PEG)或其组合。3.根据权利要求2所述的方法,其中PEG选自三乙二醇单甲醚(mTEG)、甲氧基聚乙二醇mPEG、四乙二醇单甲醚、五乙二醇单甲醚或其组合。4.根据权利要求3所述的方法,其中所述PEG是三乙二醇单甲醚(mTEG)。5.根据权利要求1所述的方法,其中混合所述mRNA溶液与所述脂质溶液的所述步骤以大于25%体积/体积的浓度产生PEG。6.根据权利要求1所述的方法,其中混合所述mRNA溶液与所述脂质溶液的所述步骤以约50%体积/体积的浓度包括PEG。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述mRNA溶液包含小于5mM的柠檬酸盐,并且其中所述mRNA
‑
LNP的包裹效率大于60%。8.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的方法,其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液处于大约环境温度下。9.根据权利要求8所述的方法,其中所述环境温度低于约35℃、低于约30℃、低于约26℃、低于约23℃、低于约21℃、低于约20℃或低于约18℃。10.根据权利要求9所述的方法,其中所述环境温度的范围为约18
‑
32℃、约21
‑
26℃或约23
‑
25℃。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述一种或多种非阳离子脂质选自二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰
‑
磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰
‑
磷脂酰乙醇胺4
‑
(N
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马来酰亚胺基甲基)
‑
环己烷
‑
l
‑
甲酸酯(DOPE
‑
mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰
‑
磷脂酰
‑
乙醇胺(DSPE)、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、脑苷脂、神经节苷脂、16
‑
O
‑
单甲基PE、16
‑
O
‑
二甲基PE、18
‑1‑
反式PE、l
‑
硬脂酰
‑2‑
油酰
‑
磷脂酰乙醇胺(SOPE)或其混合物。[]12.根据权利要求1
‑
11中任一项所述的方法,其中所述一种或多种非阳离子脂质是二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述mRNA溶液还包含海藻糖。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述方法不需要在所述混合步骤之前加热所述mRNA溶液和所述脂质溶液的步骤。15.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述mRNA溶液包含每12L所述mRNA溶液大于约1g mRNA。16.根据权利要求15所述的方法,其中所述mRNA溶液包含每8L所述mRNA溶液约1gmRNA。17.根据权利要求15所述的方法,其中所述mRNA溶液包含每4L所述mRNA溶液约1gmRNA。
18.根据权利要求15所述的方法,其中所述mRNA溶液包含每2L所述mRNA溶液约1gmRNA。19.根据权利要求15所述的方法,其中所述mRNA溶液中mRNA的浓度为大于约0.125mg/mL、大于约0.25mg/mL、大于约0.5mg/mL或大于约1.0mg/mL。20.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中将所述mRNA溶液与所述脂质溶液以在2:1与6:1之间的比率(v/v)混合。21.根据权利要求20所述的方法,其中将所述mRNA溶液与所述脂质溶液以约4:1的比率(v/v)混合。22.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述mRNA溶液的pH在3.0与5.0之间。23.根据权利要求22所述的方法,其中所述mRNA溶液的pH为约3.5、4.0或4.5。24.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述混合步骤以在约3与10mL之间的总体积进行。25.根据权利要求24所述的方法,其中所述混合步骤以约3mL的总体积进行。26.根据前述权利要求中任一项所述的方法,所述方法不包括醇。27.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述方法还包括孵育所述mRNA
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