稳定的液体脂质纳米颗粒配制品制造技术

本发明专利技术尤其提供了一种包封编码肽或多肽的mRNA的液体脂质纳米颗粒(LNP)配制品，所述液体脂质纳米颗粒(LNP)配制品在

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】稳定的液体脂质纳米颗粒配制品
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年11月25日提交的美国临时申请号63/118,243的优先权和权益，将所述临时申请的内容通过引用以其整体特此并入。

技术介绍

[0002]基于核酸的技术对于各种治疗应用(包括但不限于信使RNA疗法)越来越重要。递送核酸的努力包括产生配制成保护核酸在体内递送时免于被降解的组合物。核酸的一类递送媒介物是脂质纳米颗粒。成功使用脂质纳米颗粒作为递送媒介物需要考虑的重要参数包括脂质纳米颗粒形成、脂质组分的物理特性、核酸包封效率、体内核酸释放潜力和脂质纳米颗粒毒性。
[0003]产生对冷冻/解冻循环具有抗性的稳定脂质纳米颗粒仍然是本领域的一个挑战。

技术实现思路

[0004]本专利技术尤其提供了一种包封编码肽或多肽的mRNA的液体脂质纳米颗粒(LNP)配制品，所述液体脂质纳米颗粒(LNP)配制品在
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20℃下冷冻并再解冻多轮后对聚集和/或mRNA降解具有抗性。诸位专利技术人惊奇地发现，具有高离子强度的LNP配制品在冷冻和解冻多轮后防止LNP的聚集和/或mRNA降解。诸位专利技术人惊奇地发现，通过在LNP配制品中使用较高的缓冲液强度或高盐浓度可以获得稳定并且对聚集和/或mRNA降解具有抗性的高离子强度LNP配制品。
[0005]在一些方面，提供了一种包封编码肽或多肽的mRNA的对聚集和mRNA降解具有抗性的液体脂质纳米颗粒(LNP)配制品，所述LNP配制品包含：a.具有脂质组分的一个或多个LNP，所述脂质组分包含阳离子脂质、非阳离子脂质、经PEG修饰的脂质和任选的胆固醇或由其组成；b.包封在所述一个或多个脂质纳米颗粒内并且编码肽或多肽的mRNA；c.糖或糖醇；d.6.0至8.0的LNP配制品pH；e.在最小缓冲离子强度下提供所述LNP配制品pH的pH缓冲液；f.为所述LNP配制品提供离子强度的任选的一种或多种另外的试剂；其中来自(e.)的pH缓冲液和来自(f.)的任选的一种或多种另外的试剂的总浓度为所述LNP配制品提供至少两倍于所述最小缓冲离子强度的离子强度；其中在
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20℃下冷冻并再解冻三轮后，与在所述LNP配制品中仅具有所述最小缓冲离子强度而不是至少两倍于所述最小缓冲离子强度的离子强度的相同LNP配制品相比，所述LNP配制品展现出(i)更少的聚集、(ii)经包封的mRNA的更少的降解、或(iii)(i)和(ii)两者。
[0006]在一些实施方案中，所述LNP配制品包含一种或多种冷冻保护剂。所述冷冻保护剂可以是渗透性的或非渗透性的。例如，在一些实施方案中，所述渗透性冷冻保护剂包括甘油、乙二醇、三乙二醇、丙二醇或四乙二醇。因此，在一些实施方案中，所述渗透性冷冻保护剂包括甘油。在一些实施方案中，所述渗透性冷冻保护剂包括乙二醇。在一些实施方案中，所述渗透性冷冻保护剂包括三乙二醇。在一些实施方案中，所述渗透性冷冻保护剂包括丙二醇。在一些实施方案中，所述渗透性冷冻保护剂包括四乙二醇。
[0007]在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂选自糖和/或聚合物。例如，在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂选自以下糖中的一种或多种：右旋糖、山梨糖醇、海藻糖、蔗糖、棉子糖、右旋糖酐或菊粉。因此，在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂包括右旋糖。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂包括山梨糖醇。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂包括海藻糖。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂包括蔗糖。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂包括棉子糖。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂包括右旋糖酐。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂包括菊粉。
[0008]在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂选自以下聚合物中的一种或多种：PVP、PVA、泊洛沙姆或PEG。因此，在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂选自PVP。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂选自泊洛沙姆。在一些实施方案中，所述非渗透性冷冻保护剂选自PEG。
[0009]在一些实施方案中，提供了一种制备mRNA在LNP中的稳定的液体溶液的方法。例如，在一些实施方案中，通过体外转录(IVT)产生包封在所述LNP中的所述mRNA。在一些实施方案中，使用合适的RNA聚合酶(如SP6 RNA聚合酶)合成所述mRNA。因此，在一些实施方案中，使用SP6 RNA聚合酶合成所述mRNA。所述LNP包含例如阳离子脂质、非阳离子脂质、经PEG修饰的脂质和任选的胆固醇。
[0010]在一些实施方案中，所述非阳离子脂质选自1,2
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二芥酰
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸乙醇胺(DEPE)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰
‑
磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰
‑
磷脂酰乙醇胺4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)
‑
环己烷
‑1‑
甲酸酯(DOPE
‑
mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰
‑
磷脂酰
‑
乙醇胺(DSPE)、16
‑
O
‑
单甲基PE、16
‑
O
‑
二甲基PE、18
‑1‑
反式PE或1
‑
硬脂酰
‑2‑
油酰
‑
磷脂酰乙醇胺(SOPE)。
[0011]在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的摩尔比大于10％。例如，在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约15％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约20％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约25％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约30％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约35％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约40％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约45％。在一些实施方案中，所述非阳离子脂质的脂质摩尔比为约50％。
[0012]在一些实施方案中，所述非阳离子脂质是二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)。
[0013]在一些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包封编码肽或多肽的mRNA的对聚集和mRNA降解具有抗性的液体脂质纳米颗粒(LNP)配制品，所述LNP配制品包含：a.具有脂质组分的一个或多个LNP，所述脂质组分包含阳离子脂质、非阳离子脂质、经PEG修饰的脂质和任选的胆固醇或由其组成；b.包封在所述一个或多个脂质纳米颗粒内并且编码肽或多肽的mRNA；c.糖或糖醇；d.6.0至8.0的LNP配制品pH；e.在最小缓冲离子强度下提供所述LNP配制品pH的pH缓冲液；f.为所述LNP配制品提供离子强度的任选的一种或多种另外的试剂；其中来自(e.)的pH缓冲液和来自(f.)的任选的一种或多种另外的试剂的总浓度为所述LNP配制品提供至少两倍于所述最小缓冲离子强度的离子强度。2.根据权利要求1所述的LNP配制品，其中在
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20℃下冷冻并再解冻三轮后，与在所述LNP配制品中仅具有所述最小缓冲离子强度而不是至少两倍于所述最小缓冲离子强度的离子强度的相同LNP配制品相比，所述LNP配制品展现出(i)更少的聚集、(ii)经包封的mRNA的更少的降解、或(iii)(i)和(ii)两者。3.根据权利要求1所述的LNP配制品，其中所述非阳离子脂质选自1,2
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二芥酰
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sn
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甘油
‑3‑
磷酸乙醇胺(DEPE)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰
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磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰
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磷脂酰乙醇胺4
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(N
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马来酰亚胺基甲基)
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环己烷
‑1‑
甲酸酯(DOPE
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mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰
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磷脂酰
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乙醇胺(DSPE)、16
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O
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单甲基PE、16
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O
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二甲基PE、18
‑1‑
反式PE或1
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硬脂酰
‑2‑
油酰
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磷脂酰乙醇胺(SOPE)。4.根据权利要求3所述的LNP配制品，其中所述非阳离子脂质是二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)。5.根据权利要求4所述的LNP配制品，其中所述DOPE的脂质摩尔比为10％或更大，例如10％
‑
30％。6.根据前述权利要求中任一项所述的LNP配制品，其中所述阳离子脂质是类脂质，任选地其中所述类脂质的脂质摩尔比为40％
‑
60％，例如40％
‑
50％。7.根据前述权利要求中任一项所述的LNP配制品，其中所述mRNA编码受试者体内缺乏的蛋白质。8.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的LNP配制品，其中所述mRNA编码疫苗抗原。9.根据前述权利要求中任一项所述的LNP配制品，其中所述糖或糖醇选自右旋糖、山梨糖醇、海藻糖、蔗糖、棉子糖、右旋糖酐和菊粉。10.根据前述权利要求中任一项所述的LNP配制品，其中所述糖是二糖。11.根据权利要求10所述的LNP配制品，其中所述二糖的浓度为约1％
‑
20％。12.根据权利要求11所述的LNP配制品，其中所述二糖的浓度为约2.5％
‑
3.0％。13.根据权利要求12所述的LNP配制品，其中二糖与缓冲液的比率在0.2
‑
0.5之间。14.根据权利要求10
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13中任一项所述的LNP配制品，其中所述二糖是海藻糖。15.根据前述权利要求中任一项所述的LNP配制品，其中所述pH在约6.0与约8.0之间，
例如6.0
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7.0、6.5
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7.5或7.0
‑
8.0。16.根据权利要求1所述的LNP配制品，其中所述pH是7.4。17.根据前述权利要求中任一项所述的LNP配制品，其中所述pH缓冲液的pKa在6.0与8.2之间。18.根据权利要求17所述的LNP配制品，其中所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、咪唑缓冲液、组氨酸缓冲液和Good's缓冲液。19.根据权利要求18所述的LPN配制品，其中所述Good's缓冲液是Tris缓冲液或HEPES缓冲液。20.根据权利要求18或19所述的LPN配制品，其中所述pH缓冲液是磷酸盐缓冲液(例如，柠檬酸盐
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磷酸盐缓冲液)、Tris缓冲液或咪唑缓冲液。21.根据前述权利要求中任一项所述的LNP配制品，其中所述最小缓冲离子强度是至少75mM、至少100mM、至少125mM、至少150mM或至少200mM。22.根据权利要求21所述的LNP配制品，其中所述最小缓冲离子强度是约75mM
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200mM、75mM
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150mM、75mM
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100mM或100mM
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200mM。23.根据权利要求22所述的LNP配制品，其中所述最小缓冲离子强度在...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：翻译生物公司，
类型：发明
国别省市：