一种植物乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物乳杆菌及其应用，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，菌株为PA01，保藏号为CGMCC No.15660。所述植物乳杆菌安全性高、耐受性强、可以在肠道定植、生长繁殖，调节肠道菌群平衡，发挥益生作用，可以用于制备食品或饲料添加剂、调节动物肠道疾病的调节剂、动物抗生素替代剂、免疫调节剂、病原菌抑菌剂，还可用于提高肉鸡生产性能，效果好，安全无副作用。

A Lactobacillus plantarum and its application

The invention discloses a Lactobacillus plantarum and its application. The Lactobacillus plantarum has a strain PA01 and a storage number CGMCC No. 15660. The Lactobacillus plantarum has high safety, strong tolerance, can colonize in intestine, grow and reproduce, regulate intestinal flora balance, and play a probiotic role. It can be used to prepare food or feed additives, regulators for intestinal diseases of animals, animal antibiotic substitutes, immunomodulators, pathogenic bacteriostatic agents, and also can be used to improve the production performance of broilers with good effect and no safety. Side effect.

【技术实现步骤摘要】
一种植物乳杆菌及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种植物乳杆菌及其应用。
技术介绍
沙门氏菌病是重要的人畜(禽)共患性传染病，其病原沙门氏菌属肠道细菌科，为革兰氏阴性肠道杆菌。沙门氏菌感染畜禽后表现的临床症状有加重畜禽病态或死亡率、或降低畜禽的繁殖生产力；也可能呈无症状带菌状态，人食用这些被污染的畜产品后，可能会引起严重的细菌性食物中毒。家禽养殖过程中，降低其消化道中的沙门氏菌量，将会减少沙门氏菌进入肉品加工厂的风险。由于抗生素生长促进剂在动物生产中添加受到限制，为了能够有效地控制沙门氏菌的危害，人们一直探索抗生素的替代物，益生菌能促进宿主有益微生物区系发育、竞争性排斥有害致病菌定植、增强黏膜免疫力、提高消化道消化率和降低pH、增强肠道组织成熟和完整性。乳酸菌是最早发现的益生菌，其作为微生态饲料添加剂在畜牧行业中的应用越来越广泛，乳酸菌通过粘附于宿主肠道上皮细胞表面竞争性排斥病原菌在宿主肠道内的定植，加强宿主的免疫调节应答从而有效地控制沙门氏菌对家禽的感染。因此，在家禽养殖业中，乳酸菌是一个控制沙门氏菌的有效替代方法。虽然乳酸菌是动物肠道自身具有的一种十分重要的益生菌，其种群数量常常受到外界因素影响而减少。因此可以通过外源补充乳酸菌，维持动物肠道内乳酸菌占优势的菌群结构，而筛选益生菌特性较好的乳酸菌显得更为重要。
技术实现思路
为此，本专利技术的目的是提供一株耐酸和耐胆盐性能优异、抑菌谱广、能够有效促进禽类生长的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)PA01，于2018年4月28日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏号为CGMCCNo.15660。本专利技术的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)PA01，从陕西杨凌地区的传统泡菜浸泡液中分离得到的乳酸菌中发现的。所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)PA01具有如下生物学特性：菌体特征：革兰氏阳性菌，圆端中短杆状，单个、成对或成链排列，无鞭毛，不产芽孢。0.6～1.0μm×2.0～5.0μm。菌落特征：乳白色的圆形菌落，边缘整齐，表面光滑湿润，有凸起，1.2～3.0mm。生长特征：延滞期约为4h，培养16h后进入稳定期。最适生长温度为28～35℃，该菌株最低生长温度为15℃，最高生长温度为40℃。最适生长初始pH值为6.5，能耐受最高和最低初始生长pH值为8.5和2.0。所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)PA01还具有下述有益特性：抑菌谱广：能够较强的抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的生长，尤其是对于沙门氏菌具有很强的抑菌性能。具有耐酸性：在pH2.5的酸性环境下能够很好的存活，和正常环境下活性几乎一致。具有较强的耐胆盐性：在含0.1％、0.3％、0.5％和1.0％胆盐的MRS培养基中37℃厌氧无菌培养4h后，与初始浓度基本一致。粘附能力的适中：对Caco-2细胞的粘附率为3.6％。具有较强的抑制肠炎沙门氏菌对上皮细胞粘附能力：采用竞争性黏附方法检测植物乳杆菌PA01抑制肠炎沙门氏菌对上皮细胞的黏附性。在排斥试验和竞争试验中肠炎沙门氏菌的黏附分别为不加植物乳杆菌PA01时黏附率的1.67％和3.5％。具有产胞外多糖的能力：植物乳杆菌PA01分泌胞外多糖含量可以达到520mg/L。所述植物乳杆菌PA01的培养方法，包括：MRS固体培养基，厌氧环境，37℃培养15～48h。本专利技术还提供了所述植物乳杆菌PA01的应用，包括用于制备食品或饲料添加剂、调节动物肠道疾病的调节剂、动物抗生素替代剂、免疫调节剂、病原菌抑菌剂，还包括用于提高肉鸡生产性能。所述病原菌为动物源性致病病原菌，包括，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌。本专利技术有益效果为：1、本专利技术的植物乳杆菌分离自传统泡菜浸泡液中，具有可食用植物源性，充分保证了其在畜牧养殖和动物饲料中应用的安全性；耐受性强、能够耐受胃肠道低pH和高胆盐浓度，可以在肠道定植、生长繁殖，调节肠道菌群平衡，发挥益生作用。2、本专利技术所述植物乳杆菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌均有明显的抑菌作用，尤其肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌，抑菌效果更好，并且对肠炎沙门氏菌黏附的作用较好，降低了有害菌与肠上皮细胞接触的可能性，提高宿主免疫及非免疫防御体系。3、本专利技术所述植物乳杆菌显著提高了肉鸡生产性能，可替代或部分替代抗生素，以期减少抗生素作为预防动物疾病作用在饲料中的长期亚治疗剂量添加，无副作用。生物材料保藏说明分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)；菌株编号：PA01。保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏机构简称：CGMCC地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号保藏日期：2018年4月28日保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.15660。附图说明图1为植物乳杆菌PA0116SrDNA凝胶鉴定的电泳图；其中，泳道M为DNA分子量标准，泳道1-6为植物乳杆菌PA0116SrDNA。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围，任何人在本专利技术的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或成分比例上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本专利技术的保护范围内。本专利技术中所使用的材料和装置，如无特殊说明，均为市售。实施例1菌株分离纯化植物乳杆菌PA01是从陕西杨凌地区的传统泡菜浸泡液中分离得到的乳酸菌中发现的。将购买得到的发酵泡菜在无菌条件下取50g，用pH为7.4的PBS溶液进行10倍梯度稀释，稀释梯度为102～106，稀释完成后，各取200μL涂布到MRS固体培养基上(含2.0％CaCO3)，在37℃的厌氧环境中倒置培养48h。随后挑取溶钙圈大小及形态不同的单菌落接种到MRS液体培养基上，37℃过夜培养。混匀液体培养基，在超净工作台中用接种环蘸取少量菌液划线到MRS固体培养基上，在37℃厌氧环境中倒置培养36～48h，完成一次纯化，一般纯化3-4次使得平板上的菌落形态一致即可。将纯化后的菌液与无菌的50％的甘油等比例混匀后，置于超低温冰箱备用。提取菌株的基因组，然后使用通用引物27F和1492R，扩增菌株16SrDNA基因。引物27F为：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，引物1492R为：GGTTACCTTGTTACGACTT。PCR反应条件为：95℃10min；95℃30s；55℃30s；72℃90s；30个循环，72℃延伸10min。图1为植物乳杆菌PA0116SrDNA凝胶鉴定的电泳图。将菌株的1500bp16SrDNA序列(如序列表中SEQIDNO.1所示)与GenBank数据库中获得的植物乳杆菌16SrDNA序列作比较，相似度97％。实施例2植物乳杆菌PA01的抑菌能力的检测将病原菌震荡培养10h后，以0.1％的接种量接种于45℃左右的LB固体培养基中；将灭菌并烘干的牛津杯放置于培养皿中；向每个培养皿中加入约25mL的含有病原菌的LB固体培养基；室温静置1h后，在不破坏培养孔结构的前提下用灭菌的镊子夹取牛津杯，然后室温条件下置本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，菌株为PA01，保藏号为CGMCC No.15660。

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，菌株为PA01，保藏号为CGMCCNo.15660。2.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备食品和饲料添加剂中的应用。3.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备调节动物肠道疾病的调节剂中的应用。4.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备动物抗生素替代剂中的应用。5.权利要求1所述的植...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨欣，龙芳羽，杨小军，孙青竹，任周正，王晗，王方圆，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61