一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治油茶炭疽病害中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株解淀粉芽孢杆菌菌株，该解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，命名为解淀粉芽孢杆菌CFC‑10(Bacillus amyloliquefaciens CFC‑10)，在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：60394。该菌株对油茶炭疽病原菌菌具有明显的抑制作用，能够很好的应用于防治油茶炭疽病害，具有促进植物生长的潜力，是一种适应性很强的微生物菌株。本发明专利技术还公开了该菌株在防治油茶炭疽病害中的应用，有效的解决了化学药剂的替代，降低了农药残留，保证了农产品的质量安全，具有一定的实用价值和推广应用价值。

A Bacillus amyloliquefaciens strain and its application in the control of Camellia oleifera anthracnose

The invention discloses a strain of Bacillus amyloliquefaciens, which is stored in the microbial strain Preservation Center of Guangdong Province and named as Bacillus amyloliquefaciens CFC 10. The preservation number of the microbial strain Preservation Center in Guangdong Province is GDMCC No: 604. The strain has obvious inhibitory effect on the pathogenic bacteria of Camellia oleifera anthracnose. It can be used to control Camellia oleifera anthracnose disease and has the potential to promote plant growth. It is a microbial strain with strong adaptability. The invention also discloses the application of the strain in the control of Camellia oleifera anthracnose disease, effectively solves the substitution of chemical agents, reduces pesticide residues, ensures the quality and safety of agricultural products, and has certain practical value and application value.

【技术实现步骤摘要】
一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治油茶炭疽病害中的应用
本专利技术属于微生物工程
，尤其涉及一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治油茶炭疽病害中的应用。
技术介绍
油茶(CamelliaOleiferaAabel)系山茶科山茶属植物，起源于中国，具有悠久的栽培历史，是与油棕、橄榄和椰子齐名的世界四大木本食用油源树种之一。我国的油茶资源丰富，主要分布在南方的湖南、江西、广西、浙江、福建、安徽、贵州等省区。据统计，目前全国有油茶林约为400万hm2以年产油茶籽60万吨。油茶病害对其产量的影响也日益突出，其中油茶炭疽病是最重要的病害之一，常导致油茶叶片枯死、果实早落，落果率一般为20％～40％，严重时可达60％以上，从而导致油茶减产10％～30％，甚至可达40％～50％，造成巨大的经济损失，油茶炭疽病已成为油茶产业的重要潜在威胁。因此，需要加强对油茶炭疽病的研究力度，提高对油茶炭疽病的防治技术。针对于油茶炭疽病，常见的防治措施有化学农药喷洒，但是化学方法污染较大。需要寻求更为环保的微生物防治的方法显得格外重要，生物防治由于其不易使病原菌产生抗药性、对环境安全、活性高且生产成本低逐渐成为大家关注和研究的热点。如：孟庆敏等研究发现油茶内生拮抗细菌Y13是一株对油茶炭疽病菌有较强抑制作用的枯草芽胞杆菌(油茶炭疽病拮抗细菌Y13主要抑菌物质分离纯化及作用方式，植物保护，2014年02期)，信珊珊等用解淀粉芽孢杆菌WH1发酵液中的抗菌活性物质为脂肽，该成分能够使油茶炭疽病菌丝畸形，高稀释倍数的发酵液对离体油茶叶片上的炭疽病仍然有显著的防效(1株解淀粉芽孢杆菌发酵条件的优化及其对油茶炭疽病的防效华中农业大学学报，2011年04期)。但是上述种的耐受性较差，适应性较差。因此，寻找一种耐受性更好，适应性更强的可用于防治油茶炭疽病的菌种对本领域具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治油茶炭疽病害中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为提供一株解淀粉芽孢杆菌菌株，该解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其命名为解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCCNo：60394，保藏时间为2018年6月25日，保藏单位的地址位于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所。解淀粉芽孢杆菌在生长代谢过程中能产蛋白酶和纤维素酶，还能产生对油茶炭疽病及其它作物病害具有显著抑制作用的挥发性化合物、粗蛋白和粗脂肽，是具有良好生物防治前景的微生物菌种。上述的解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)是从油茶炭疽发病区健康植株根际土壤样品中分离纯化获得，在NA平板上，倒置30℃培养一段时间后，菌落形态呈乳白色，半透明，圆形，边缘不整齐，表面湿润光滑，显微镜观察细胞呈杆状，革兰氏染色为蓝紫色，阳性。上述的解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)可以产生抑菌类物质，包括抑菌类蛋白、脂肽类抗生物、寡肽酶、聚酮化合物等等，这些物质都具有很强的抑菌性。同时该菌株具有产吲哚乙酸、解磷和产氨能力，具有促进植物生长的潜力。CFC-10菌株能够在pH为4.0-8.5、温度范围为20℃-55℃的条件下生长，能够耐90℃温度，说明是一种耐受性很好、适应性很强的微生物菌株。上述的解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)的DNA基因序列，见SEQIDNO.1所示。上述的解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)，其16SrDNA序列在NCBI数据库中用BLAST进行同源性分析，得到相似性较高的序列，运用MEGA6.06软件构建系统发育树；该解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)的16SrDNA序列与解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)的同源性达到99％，因此将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌。综合形态学观察、生理生化鉴定及16SrDNA序列分析结果，可以确定该解淀粉芽孢杆菌CFC-10为解淀粉芽孢杆菌种(Bacillusamyloliquefaciens)，其被命名为解淀粉芽孢杆菌CFC-10。上述的解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)发酵液对拮抗油茶炭疽病原菌的抑菌圈达到了28.97mm，说明本专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)对油茶炭疽病原菌菌具有明显的抑制作用，因而能够很好的应用于防治油茶炭疽病害。基于一个总的技术构思，本专利技术还相应提供一种上述的解淀粉芽孢杆菌菌株在防治油茶炭疽病害中的应用。上述的应用，优选的，所述应用的方法具体包括如下步骤：(1)将所述的解淀粉芽孢杆菌CFC-10接种至种子培养基中进行培养，得到的种子液接种至发酵培养基中进行发酵，得到解淀粉芽孢杆菌CFC-10发酵菌液；(2)在油茶炭疽病发病初期及之前，采用所述步骤(1)后得到的解淀粉芽孢杆菌CFC-10发酵菌液稀释后喷施于油茶树干。优选的，所述步骤(1)中，种子培养基的组分包括牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，所述牛肉膏、蛋白胨和氯化钠的质量比为(2.3-3.1):(8.5-10):(3.8-5.1)。优选的，所述步骤(1)中，发酵培养基的组分包括玉米粉、黄豆粉和CaCl2，所述玉米粉、黄豆粉和CaCl2的质量比为(10-20):(6-15):(1-3)。优选的，所述步骤(1)中，培养的温度为28-32℃，培养时间18-24h，种子培养基的pH在7.0-7.2。优选的，所述步骤(1)中，发酵的接种量为0.1％-5％，发酵温度25-45℃，发酵时间32-48h，发酵培养基的pH在7.0-8.0，摇床震荡的转速为150-250rpm。优选的，所述步骤(2)中，解淀粉芽孢杆菌CFC-10发酵菌液用水稀释，稀释后菌种浓度为108cfu/mL以上。优选的，所述步骤(2)中，喷施方法为以喷湿树干为度，至少喷施2次，每次喷施间隔8-10d。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：1、本专利技术提供的解淀粉芽孢杆菌菌株为解淀粉芽孢杆菌CFC-10，该菌株对油茶炭疽病原菌菌具有明显的抑制作用，能够很好的应用于防治油茶炭疽病害，该菌株还可以产生吲哚乙酸，具有解磷能力、产氨能力，具有促进植物生长的潜力；该菌株能够在pH为4.0-8.5、温度范围为20℃-55℃的条件下生长，能够耐90℃温度，是一种适应性很强的微生物菌株。2、本专利技术的应用，在油茶炭疽病发病初期及之前，采用解淀粉芽孢杆菌CFC-10发酵菌液稀释后喷施于油茶树干，能够很好的防治油茶炭疽病害，有效的解决了化学药剂的替代，降低了农药残留，保证了农产品的质量安全，具有一定的实用价值和推广应用价值。一株解本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株解淀粉芽孢杆菌菌株，其特征在于，该解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其命名为解淀粉芽孢杆菌CFC‑10(Bacillus amyloliquefaciens CFC‑10)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：60394，保藏时间为2018年6月25日。

【技术特征摘要】
1.一株解淀粉芽孢杆菌菌株，其特征在于，该解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其命名为解淀粉芽孢杆菌CFC-10(BacillusamyloliquefaciensCFC-10)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCCNo：60394，保藏时间为2018年6月25日。2.一种根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株在防治油茶炭疽病害中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用的方法具体包括如下步骤：(1)将所述的解淀粉芽孢杆菌CFC-10接种至种子培养基中进行培养，得到的种子液接种至发酵培养基中进行发酵，得到解淀粉芽孢杆菌CFC-10发酵菌液；(2)在油茶炭疽病发病初期及之前，采用所述步骤(1)后得到的解淀粉芽孢杆菌CFC-10发酵菌液稀释后喷施于油茶树干。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，种子培养基的组分包括牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，所述牛肉膏、蛋白胨和氯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾超珍，黎继烈，任泽文，彭映辉，李昌珠，吴红，肖志红，张爱华，李培旺，谈泰猛，祝久香，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，湖南省林业科学院，
类型：发明
国别省市：湖南,43