甘露糖醛二酸的组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种甘露糖醛二酸寡糖组合，其包含具有式(Ⅲ)的甘露糖醛二酸或其药学上可接受的盐，

Mannose aldehyde diacid composition

The invention relates to a combination of mannose aldehyde diacid oligosaccharide, which contains mannose aldehyde dicarboxylic acid (type III) or its pharmaceutically acceptable salt.

【技术实现步骤摘要】
甘露糖醛二酸的组合物
本专利技术涉及通过生物活性筛选的方法得到甘露糖醛二酸的最佳组合物，该方法采用老年痴呆动物模型评价甘露糖醛二酸的不同聚合度及其配比对生物活性的影响。最终筛选到具有最佳生物活性的组合物并通过超滤膜分离的办法制备得到所需的目标物质。
技术介绍
甘露糖醛二酸由于其潜在的药用价值已经受到广泛的重视。甘露糖醛二酸通常以海藻酸为原料经过多步骤制得。在原料海藻酸的多糖分子中，有由甘露糖醛酸(D-mannuronicacid)通过β-1，4-糖苷键连接形成的M段、古罗糖醛酸(L-guluronicacid)通过α-1，4-糖苷键连接形成的G段，以及由这两种糖杂合形成的MG段。甘露糖醛酸和古罗糖醛酸的结构式如下(I)式所示：M段和G段可以从原料海藻酸中分离。通常的方法可以简单描述为：将海藻酸初步降解后可得到聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸的混合多糖，混合多糖再经酸法沉淀后，可以除去其中的聚古罗糖醛酸，进一步精制可以得到纯度在90％以上的均聚甘露糖醛酸(下文中也称“M段中间体”)。例如，可参见中国专利申请No.98806637.8以及CN02823707.2所披露的方法。制备寡聚甘露糖醛酸的做法如下：将上述得到的M段中间体在酸性条件下加热进一步酸解得到所需分子量范围的小片段甘露糖醛酸聚合物。另外，也有通过氧化降解的办法提升降解效率，同时可以将还原末端氧化为开环的糖二酸，详见耿美玉等人的中国专利申请200580009396.5(专利文献1)及美国专利US8835403B2(专利文献2)。为了方便叙述，专利文献1和2在下文中统称为在先专利，它们以引证的方式全部并入本文。在先专利披露的甘露糖醛二酸的反应过程可通过如下反应方程式(II)表示，即寡聚甘露糖醛酸多糖还原端的甘露糖醛酸C1-位醛基氧化成羧基。在上述氧化转化过程中，常用的氧化剂有碱性硫酸铜溶液，即菲林试剂，在先专利即采用了该氧化方法，具体为：在碱性条件下，将反应底物聚甘露糖醛酸即上文的M段中间体加入硫酸铜溶液中，在沸水浴中反应15分钟至2小时。该法是以Cu2+离子为氧化剂氧化醛基，反应中产生砖红色的氧化亚铜沉淀，这个反应常用于鉴定还原性糖。在先专利公开了甘露寡糖二酸具有抗阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)和抗糖尿病的作用。阿尔茨海默病与II型糖尿病的发病过程与淀粉样蛋白(β-amyloid及amylin)密切相关。淀粉样蛋白聚集以后产生蛋白寡聚体，进一步聚集形成纤维。这些蛋白聚集物有细胞毒性，在细胞内诱导氧化反应损伤线粒体以及引发炎症反应等级联反应，造成大量的神经元和β细胞损伤，最终导致阿尔茨海默病与II型糖尿病的发生。甘露寡糖二酸靶向淀粉样蛋白并拮抗其诱导的级联反应，由此具有预防和治疗阿尔茨海默病与II型糖尿病的作用。
技术实现思路
本专利技术的第一个方面涉及一种甘露糖醛二酸寡糖组合，其包含具有式(III)的甘露糖醛二酸或其药学上可接受的盐：其中n为选自1-9的整数，m选自0，1或2，m’选自0或1，并且其中，n＝1-5的甘露糖醛二酸的重量总和占所述组合总重量的80-95％；n＝1-3的甘露糖醛二酸的重量总和与n＝4-7的甘露糖醛二酸重量总和的比例在1.0-3.5之间。本专利技术的另一个方面提供一种药物组合物或保健品，其包含本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合物和必要时适当的载体。本专利技术的再一个方面提供一种治疗患有老年性痴呆的患者的方法，其包括给予有需要的患者有效量的本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合物。本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合物使用不同于现有技术的方法制备，制备方法反应简单，有效成分含量高，无反应试剂残留。经实验证明，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合能够抑制细胞损伤，保护神经细胞，并且增加细胞存活率。在动物模型上，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合物可明显改善痴呆模型大鼠的学习和认知功能。本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合物具有潜在的预防和治疗阿尔茨海默病的作用。附图说明图1是产品A中二糖、三糖和四糖的质谱图。图2是产品A中五糖、六糖和七糖的质谱图。图3是产品A中八糖、九糖和十糖的质谱图。图4表示产品A在不同浓度下对Aβ诱导的神经细胞损伤的保护作用。图5表示单一聚合度的甘露寡糖二酸对Aβ诱导的神经细胞损伤的保护作用。图6表示在AD动物模型上评价二糖-十糖的效果。图7表示寡糖组合物及六糖对AD动物穿越平台次数的影响。图8表示寡糖组合物及六糖对AD动物游泳路程的影响。图9表示二糖-十糖及组合物A在细胞共培养模型上的活性。具体实施方式下文将对本专利技术的各个方面进行具体说明，但本专利技术并不限于这些具体的实施方式。本领域技术人员可以根据下文公开内容的实质对本专利技术进行一些修改和调整，这些调整也属于本专利技术的范围。甘露糖醛二酸寡糖组合本专利技术的第一方面涉及一种甘露糖醛二酸寡糖组合，其包含具有式(III)的甘露糖醛二酸或其药学上可接受的盐：其中n为选自1-9的整数，m选自0，1或2，m’选自0或1，并且其中，n＝1-5的甘露糖醛二酸的重量总和占所述组合总重量的80-95％；n＝1-3的低聚甘露糖醛二酸的重量总和与n＝4-7的低聚甘露糖醛二酸重量总和的比例在1.0-3.5之间。本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合是不同聚合度的甘露糖醛二酸的混合物，其主要成分是聚合度为2至10的甘露糖醛二酸寡糖。根据在先申请已知，在甘露糖醛二酸中，活性最高的糖为5-8糖，特别是6糖。但是，与已知的现有技术不同，专利技术人发现，在活性最高的5-8糖基础上添加活性较低的2-4糖，在稀释高活性糖浓度的情况下反而获得了优于5-8糖的生物活性。根据一个优选的实施方案，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中m+m’＝1或2的甘露糖醛二酸的重量总和不低于所述组合总重量的50％以上，优选60％-90％，更优选70％-90％。特别地，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中m+m’＝1的甘露糖醛二酸的重量总和不低于所述组合总重量的10％，优选30-40％。在另一个优选实施方案中，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中m+m’＝2的甘露糖醛二酸的重量总和不低于所述组合总重量的10％，优选30-50％。根据一个优选实施方案，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中n＝1-5的甘露糖醛二酸寡糖的重量总和占所述组合总重量的80-95％。根据一个优选实施方案，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中n＝1-3的甘露糖醛二酸寡糖的重量总和所述组合总重量的20-70％。根据一个优选实施方案，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中n＝1-3的甘露糖醛二酸的重量总和与n＝4-7的甘露糖醛二酸寡糖重量总和的比例在1.0-3.5之间，优选在1.0-3.0之间。根据一个优选实施方案，本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中各聚合度甘露糖醛二酸寡糖在所述组合中的重量百分含量为：二糖5～25％，三糖15～30％，四糖15～25％，五糖10～25％，六糖5～15％，七糖3～10％，八糖2～5％，九糖1～5％，十糖1～5％。特别地，组合中寡糖在所述组合中的重量百分含量为：二糖10～20％，三糖18～30％，四糖15～25％，五糖15～20％，六糖5～10％，七糖3～5％，八糖2～3％，九糖1～3％，十糖1～3％。本专利技术的甘露糖醛二酸寡糖组合中，其中所述药学上可接受的盐是钠盐或钾盐。甘露糖醛二酸寡糖组合物的制备方法本专利技术的甘本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘露糖醛二酸寡糖组合，其包含具有式(Ⅲ)的甘露糖醛二酸或其药学上可接受的盐：

【技术特征摘要】
2016.12.30 CN PCT/CN2016/1138791.一种甘露糖醛二酸寡糖组合，其包含具有式(Ⅲ)的甘露糖醛二酸或其药学上可接受的盐：其中n为选自1-9的整数，m选自0，1或2，m’选自0或1，并且其中，n＝1-5的甘露糖醛二酸的重量总和占所述组合总重量的80-95％；n＝1-3的甘露糖醛二酸的重量总和与n＝4-7的甘露糖醛二酸重量总和的比例在1.0-3.5之间。2.根据权利要求1的甘露糖醛二酸寡糖组合，其中m+m’＝1或2的甘露糖醛二酸的重量总和不低于所述组合总重量的50％以上，优选60％-90％，更优选70％-90％。3.根据权利要求2的甘露糖醛二酸寡糖组合，其中m+m’＝1的甘露糖醛二酸的重量总和不低于所述组合总重量的10％，优选30-40％。4.根据权利要求1的甘露糖醛二酸寡糖组合，其中m+m’＝2的甘露糖醛二酸的重量总和不低于所述组合总重量的10％，优选30-50％。5.根据权利要求1的甘露糖醛二酸寡糖组合，其中n＝1-5的甘露糖醛二酸的重量总和占所述组合总重量的80-95％。6.根据权利要求1的甘露糖醛二酸寡糖组合，其中n＝1-3的甘露糖醛二酸的重量总和占所述组合总重量的20-70％。7.根据权利要求1的甘露糖醛二酸寡糖组合，其中n＝1-3的甘露糖醛二酸的重量总和与n＝4-7的甘露糖醛二酸重量总和的比例在1.0-3.5之间。8.根据权利要求7的甘露糖醛二酸寡糖组合，其中n＝1-3的甘露糖醛二酸的重量总和与n＝4-7的甘露糖醛二酸重量总和的比例在1...

【专利技术属性】
技术研发人员：耿美玉，丁健，张真庆，肖中平，杜晓光，辛现良，
申请(专利权)人：上海绿谷制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31