一种低交联度透明质酸钠的制备方法技术

本发明专利技术公开的一种低交联度透明质酸钠的制备方法，具体方法为:配制氢氧化钠碱液‑透明质酸钠凝胶溶解‑加入合适剂量的交联剂‑交联反应‑终止交联反应‑透析法去除交联剂‑有机溶剂纯沉‑脱水干燥‑成品低交联度透明质酸钠。本发明专利技术通过设计反应条件，控制交联初始反应的透明质酸钠的分子量，通过交联剂种类和比例的选择控制交联程度，再用膜处理法去除残留的交联剂，通过设定指标控制透析终点，调节反应体系的离子浓度后用有机溶剂醇沉，脱水干燥得到成品。该发明专利技术在一定范围内可根据需求定制特定交联度的HA原料，可满足不同用途如医药、美容、化妆品等多个领域内的需求。

A preparation method of sodium hyaluronate with low crosslinking degree

The invention discloses a preparation method of sodium hyaluronate with low crosslinking degree. The specific method is to prepare sodium hydroxide sodium hyaluronate gel dissolved in sodium hyaluronate gel and add appropriate dose of crosslinking agent to terminate crosslinking reaction. Sodium hypo. By designing reaction conditions, the molecular weight of sodium hyaluronate of the crosslinked initial reaction is controlled, the degree of crosslinking is controlled by the selection of the types and proportions of the crosslinking agent, and the residual crosslinking agent is removed by the membrane treatment method, and the dialytic end point is controlled by setting the index, and the organic solvent alcohol is precipitate by the organic solvent after adjusting the ionic concentration of the reaction system. Dehydrated and dried to get the finished product. The invention can customize HA raw materials with specific cross-linking degree according to demand in a certain range, which can meet the needs of various applications, such as medicine, beauty, cosmetics and other fields.

【技术实现步骤摘要】
一种低交联度透明质酸钠的制备方法
本专利技术涉及药物制备
，特别涉及一种低交联度透明质酸钠的制备方法。
技术介绍
目前交联透明质酸钠应用范围广泛，如美容填充，化妆品，宫腔用防粘连凝胶等。常规的医用交联透明质酸钠凝胶制备大部分属于高度交联产品，低度交联修饰改性后的透明质酸钠，其化学性能、流变学性能与非交联的也存在一定差异，如水溶性优于高度交联的产品，但体内降解时间等指标又优于非交联的产品，随着HA产品的应用领域不断发展，该技术也将得到更广泛的应用。但是目前尚无好的方法制备低度交联修饰改性后的透明质酸钠。目前广泛应用于美容填充领域的交联透明质酸钠，为了保证其填充效果和在人体内的降解速率，交联度一般控制在6-9％之间，有的甚至高达甚至12％，低度交联的透明质酸的制备工艺，对反应时间以及终止反应条件控制要求十分严格(如DVS交联)，且去除残留交联剂更多单纯的使用有机溶剂沉淀的方法进行，对最终产品质量以及临床使用安全性都存在较大的隐患。
技术实现思路
本专利技术所要解的技术问题在于提供一种低度交联的透明质酸钠的制备方法。本专利技术所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：一种低交联度透明质酸钠的制备方法，具有如下步骤:(1)碱液配制步骤将氢氧化钠用注射用水溶解，配制成一定浓度的氢氧化钠溶液；(2)溶解步骤将透明质酸钠原料加入到步骤(1)制备的氢氧化钠溶液内，溶解30min-240min得到溶解完成的的透明质酸钠溶液，溶解温度控制在40-80℃；(3)交联反应步骤将步骤(2)制备的溶解完成的透明质酸钠，加入适量的交联剂，交联反应20-60min；(4)终止交联反应步骤配制合适浓度的盐酸溶液，加入步骤(3)的交联反应溶液中，将交联反应溶液的pH值调节至中性，终止交联反应；(5)去除交联剂步骤采用合适分子量的超滤膜，采用等体积透析的方法去除残留的交联剂，透析液为3-10倍体积的注射用水，透析完成后将超滤截留液进行浓缩得到浓缩后的超滤截留液；(6)调节离子强度步骤检测步骤(5)中所得的浓缩后的超滤截留液的电导率，加入合适量的离子浓度调节试剂，调节浓缩后的超滤截留液的离子浓度至1.2-2.4ms/cm得到HA溶液；(7)醇沉步骤将步骤(6)所得的HA溶液，加入2-3倍体积的有机溶剂，连续进行漂洗和脱水得到脱水后的HA原料；(8)干燥步骤将步骤(7)内脱水的HA原料，在含有五氧化二磷条件下抽真空干燥，温度控制40-60℃，最终得到交联度为0.5％～5％的透明质酸钠粉末。在本专利技术的一个优选实施中，所述氢氧化钠溶液浓度为0.3mol/L。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(2)中，所述透明质酸钠原料为发酵法或提取法制备。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(2)中，所述透明质酸钠原料与氢氧化钠溶液的质量比为0.1～1:100～200在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(3)中，所述交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、京尼平、碳化二亚胺中的一种或任意两种的混合。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(3)中，所述交联剂与溶解完成的透明质酸钠的体积比为0.01～0.08:100～200。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(5)中，浓缩后的超滤截留液的体积为原先的20-50％。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(5)中，所述超滤膜的材质为聚丙烯腈或聚醚砜。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(5)中，所述超滤膜的形式为平板或中空纤维膜。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(5)中，所述超滤膜的分子量为10KD。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(6)中，所述离子浓度调节试剂为氯化钠。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(7)中，醇沉所用的有机溶剂为95％的乙醇。在本专利技术的一个优选实施中，所述步骤(7)中，醇沉的方式为有机溶剂滴加至HA溶液中，所得最终成品性状为粉末状。本专利技术调节交联反应过程中的交联剂的比例，交联反应条件，可制备出低度交联度的产品，随着交联度的改变其水溶性能与体外降解时间也发生相应的变化，膜处理法等体积透析和有机溶剂醇沉是有效去除残留交联剂的方法，该专利技术在一定范围内可根据需求定制特定交联度的HA原料，可满足不同用途如医药、美容、化妆品等多个领域内的需求。具体实施方式：下面结合实施例对本专利技术进一步说明，可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本专利技术。但不以任何方式限制本专利技术，凡依照本专利技术的内容所做的任何本领域的等同替换均属于本专利技术的保护范围之内。说明1：以下实施例所选透明质酸钠原料为发酵法生产，分子量120万。2：以下实施例所采用的交联剂为1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)3：以下实施例所采用的超滤膜的材质为聚醚砜(PES)，形式为中空纤维，分子量为10KD。4：实施例不局限于发酵法制备的原料，也将以提取法制备的原料为例说明本专利技术的有效性和通用性。实施例1称取6g的氢氧化钠溶液，加500ml的注射用水溶解，配制成0.3mol/L的氢氧化钠溶液，加入1.0g的透明质酸钠原料，搅拌溶解后，水浴50℃保温60min，取样，编号A-1。取1.2ml的1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)加入到上述HA溶液内，搅拌转速不低于300rpm/min，水浴温度保持40℃，连续反应30min。反应完毕后，加入稀盐酸调节PH至中性，终止交联反应。连接超滤装置，用2％浓度的氢氧化钠循环清洗设备30min后用纯化水冲洗至pH为中性，取5L注射用水将终止交联反应后的HA溶液等体积透析，透析倍数为10倍，取样检测截留液电导率为120μs/cm，继续将截留液浓缩至250ml，加入5.0g的氯化钠，搅拌溶解。开启搅拌，取500ml的95％乙醇，缓慢滴加至浓缩液内，收集粉末，用95％乙醇连续洗涤脱水三次，在含有五氧化二磷条件下抽真空干燥12h，温度控制40-60℃，最终得成品，收集备用。称取所得成品透明质酸钠0.5g，装入无菌EPPENDORF离心管，再加入透明质酸酶溶液3mL(200单位/mL)，加入重水3mL，放入37℃的恒温槽中，进行65小时酶促反应，将酶解完毕后的试剂送检氢谱核磁共振，要求30℃，测量δH1.6和δH2.0，计算交联度【MoD＝[δH1.6峰面积/4]/(δH2.0峰面积/3)】。将所得原料配制成10mg/ml浓度溶液，编号A-2。实施例2称取6g的氢氧化钠溶液，加500ml的注射用水溶解，配制成0.3mol/L的氢氧化钠溶液，加入1.0g的透明质酸钠原料，搅拌溶解后，水浴50℃保温120min，取样，编号B-1。取1.2ml的1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)加入到上述HA溶液内，搅拌转速不低于300rpm/min，水浴温度保持40℃，连续反应60min。反应完毕后，加入稀盐酸调节PH至中性，终止交联反应。连接超滤装置，用2％浓度的氢氧化钠循环清洗设备30min后用纯化水冲洗至PH为中性，取5L注射用水将终止交联反应后的HA溶液等体积透析，透析倍数为10倍，取样检测截留液电导率为78μs/cm，继续将截留液浓缩至250ml，加入5.0g的氯化钠，搅拌溶解。开启搅拌，取500ml的95％乙醇，缓慢滴加至浓缩液内，收集粉末，用95％乙醇连续洗涤脱水三次，在含有五氧化二磷条件下抽真空干燥12h，温度控制40-60℃，最终得成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低交联度透明质酸钠的制备方法，其特征在于，具有如下步骤:(1)碱液配制步骤将氢氧化钠用注射用水溶解，配制成一定浓度的氢氧化钠溶液；(2)溶解步骤将透明质酸钠原料加入到步骤(1)制备的氢氧化钠溶液内，溶解30min‑240min得到溶解完成的的透明质酸钠溶液，溶解温度控制在40‑80℃；(3)交联反应步骤将步骤(2)制备的溶解完成的透明质酸钠，加入适量的交联剂，交联反应20‑60min；(4)终止交联反应步骤配制合适浓度的盐酸溶液，加入步骤(3)的交联反应溶液中，将交联反应溶液的pH值调节至中性，终止交联反应；(5)去除交联剂步骤采用合适分子量的超滤膜，采用等体积透析的方法去除残留的交联剂，透析液为3‑10倍体积的注射用水，透析完成后将超滤截留液进行浓缩得到浓缩后的超滤截留液；(6)调节离子强度步骤检测步骤(5)中所得的浓缩后的超滤截留液的电导率，加入合适量的离子浓度调节试剂，调节浓缩后的超滤截留液的离子浓度至1.2‑2.4ms/cm得到HA溶液；(7)醇沉步骤将步骤(6)所得的HA溶液，加入2‑3倍体积的有机溶剂，连续进行漂洗和脱水得到脱水后的HA原料；(8)干燥步骤将步骤(7)内脱水的HA原料，在含有五氧化二磷条件下抽真空干燥，温度控制40‑60℃，最终得到交联度为0.5％～5％的透明质酸钠粉末。...

【技术特征摘要】
1.一种低交联度透明质酸钠的制备方法，其特征在于，具有如下步骤:(1)碱液配制步骤将氢氧化钠用注射用水溶解，配制成一定浓度的氢氧化钠溶液；(2)溶解步骤将透明质酸钠原料加入到步骤(1)制备的氢氧化钠溶液内，溶解30min-240min得到溶解完成的的透明质酸钠溶液，溶解温度控制在40-80℃；(3)交联反应步骤将步骤(2)制备的溶解完成的透明质酸钠，加入适量的交联剂，交联反应20-60min；(4)终止交联反应步骤配制合适浓度的盐酸溶液，加入步骤(3)的交联反应溶液中，将交联反应溶液的pH值调节至中性，终止交联反应；(5)去除交联剂步骤采用合适分子量的超滤膜，采用等体积透析的方法去除残留的交联剂，透析液为3-10倍体积的注射用水，透析完成后将超滤截留液进行浓缩得到浓缩后的超滤截留液；(6)调节离子强度步骤检测步骤(5)中所得的浓缩后的超滤截留液的电导率，加入合适量的离子浓度调节试剂，调节浓缩后的超滤截留液的离子浓度至1.2-2.4ms/cm得到HA溶液；(7)醇沉步骤将步骤(6)所得的HA溶液，加入2-3倍体积的有机溶剂，连续进行漂洗和脱水得到脱水后的HA原料；(8)干燥步骤将步骤(7)内脱水的HA原料，在含有五氧化二磷条件下抽真空干燥，温度控制40-60℃，最终得到交联度为0.5％～5％的透明质酸钠粉末。2.如权利要求1所述的低交联度透明质酸钠的制备方法，其特征在于，所述氢氧化钠溶液浓度为0.3mol/L。3.如权利要求1所述的低交联度透明质酸钠的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述透明质酸钠原料为发酵法或提取法制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮，葛雪飞，李建勇，
申请(专利权)人：浙江景嘉医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33