低分子量透明质酸的制造方法技术

本发明专利技术涉及将通过链球菌内ID9102生产的高分子透明质酸制造成低分子透明质酸的方法。具体地，本发明专利技术涉及将高分子透明质酸和活性炭在一定分解条件下进行反应，维持透明质酸固有的特性的同时一定地减少透明质酸分子量的方法。根据本发明专利技术的高分子透明质酸的低分子化方法，比起需要pH处理的条件或各种反应催化剂及加热等复杂的附加处理条件的公知的方法，工序简便、没有去除投入的材质的再处理的不便，反而还具有去除杂质的效果，因此简便又经济，能够高纯度生产低分子透明质酸。根据本发明专利技术的低分子化方法，具有可根据变更利用活性炭的反应条件，而调整低分子透明质酸的分子量的优点。根据本发明专利技术生产的低分子透明质酸可保持透明质固有的特性的同时以适合医药品规格而制造，并且以适合化妆品或食品用的规格而制造。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请将于2009年9月15日申请的韩国专利申请第10-2009-0087185号作为优先权，上述说明书是本申请的参考文献。本专利技术涉及保持高分子透明质酸的粘度和弹性及吸收水分等固有的特性而制造成低分子透明质酸的方法，具体涉及通过与透明质酸反应的分解媒介物种类和高效率的低分子生成条件的、便于在工业中适用的高品质的低分子透明质酸的生产方法。
技术介绍
透明质酸(Hyaluronicacid (HA)、Hya Iuronan、(C14H20NNaO11) η (η > 1000))是存在于所有生物体的高分子，是被称为glycosaminoglycan的多糖类。是如的结构，β-1，3 结合的 D-glucuronic acid 和 N-acetylglucosamine 以一个单位(one unit)反复连接β -I，4结合的结构。是水溶性物质，有用的分子量达到1，000 13，000，OOODa (道尔顿、daltons)的广泛的直链结构。透明质酸是在1934年首次被Meyer和Palmer从牛眼的玻璃状液发现，多分布在皮肤、眼睛的玻璃状体、关节液、肌肉、胎盘、鸡冠等，因此也可从上述器官分离提取。据悉特别是多分布在胎盘或关节内，大部分的生产是从鸡冠提取。但从生物体生产透明质酸难以分离软骨素等高分子，并且也有很大动物来源的病原性物质的负担。透明质酸是盐结构，体现优秀的功效，并且保湿效果卓越，因此在物理性摩擦状态下起到强烈的润滑作用，因此功能非常优秀，具有防止细菌侵入效果等功效和有关物性的卓越的优点，因此最近流行开发很多应用透明质酸的产品。上述优点不仅可以起到医药品或化妆品的功能，还可以适用于医药部外品和生物材料及食品，并可持续以透明质酸为基础的新领域的开发。高分子透明质酸的功能性的方面是粘度上升或关节润滑作用及水分吸收及弹性能力等结合，作为医药品扩展到眼科用及膝关节注射液或滴眼液等领域，并且鉴于最近全球爆发性的透明质酸市场增大现象，可预测对开发衍生物的可能性。比起高分子透明质酸的功能，低分子不及高分子。但最近因对低分子的体内吸收能力的再度关注，低分子透明质酸作为被要求组织内吸收能力的化妆品或食品等的用途而逐渐受到瞩目。从而，需要开发低分子透明质酸，也需要维持透明质酸的固有功能的同时降低分子量的技术。关于降低高分子透明质酸的分子量的方法有很多通过论文或专利报道。首先有根据酸和碱的加水分解方法(日本特开63-57602、特开平1-266102、Y. Tokita et al.、Polymer Degradation and Stability、48、269_273、1995)。该方法除了增加新的工序之夕卜，还有处理后需要以PH规格内的值增加或减少的不便。不仅根据透明质酸的浓度pH的变化速度不同，在实际生产工厂也难以进行生产。并且确认了随着PH的调整发生增加杂质的现象，特别是增加内毒素的数值，因此增加了去除杂质的分离精制工序的费用。在适当的PH下用高温加热或利用超音波的分解方法，需要引进新设备，也在分离精制工序中发生不必要的费用增加。并且利用次氯酸等氧化剂的方法(日本特开平2-245193)、利用过氧化氢的方法(日本特开平2-22301)、利用过硫酸铵的分解能力的方法(韩国专利授权10-0369517)也可得到其加水分解能力的认证，但需要去除投入的分解材料，并且存在因内毒素或新的杂质的形成而导致品质下降的可能性。上述的将高分子透明质酸进行低分子化的方法，因为在分离精制工序途中为了调节分子量而新投入的分解促进剂，只存在分解作用。因停止分离工序中的改善原料品质的工序，并要考虑用于调节分子量的新设备的引进或费用的增加，因此效率低，其结果处理过程更加复杂，并且因工序的增加，需要的时间也增加，导致费用增加，因此大量生产的工业方面是极其非经济的因素。
技术实现思路
需要解决的课题由此，本专利技术者将高分子透明质酸进行低分子化的方法中，在研究能够同时解决去除杂质和调节分子量这两个因素的方法的过程中，发现在适当的条件下将透明质酸与与活性炭进行接触时，透明质酸的品均分子量减少，从而完成了本专利技术。本专利技术提供一种将高分子透明质酸进行低分子化时，解决公知方法中产生杂质而发生的品质低下的问题和随着增加复杂的工序而产生的费用增加等非效率性，从而节省高品质的低分子透明质酸的生产费用的方法。从而，本专利技术的目的是提供包括将透明质酸与活性炭进行接触的步骤的低分子量的透明质酸的制造方法。并且，本专利技术的另一目的是提供包括将透明质酸与活性炭进行接触的步骤的透明质酸的分子量减少方法。本专利技术的技术解决方案在于为了达到上述目的，本专利技术提供包括将透明质酸与活性炭进行接触的步骤的低分子量的透明质酸制造方法。为了达到本专利技术的另一目的，本专利技术提供将透明质酸与活性炭进行接触的步骤的透明质酸的分子量减少方法。本专利技术提供为了利用微生物培养或从鸡冠提取或其他方法获取的高分子透明质酸制作成一定分子量的低分子透明质酸，使用活性炭为反应媒介物的方法。本专利技术中使用的高分子透明质酸可通过微生物培养或从鸡冠提取或其他方法获取。下面介绍通过培养微生物高分子获取透明质酸的一例。链球菌内ID9102(KCTC11395BP)采纳为透明质酸的生产群组，葡萄糖40_100g/L、酵母X 2-5g/L、老蛋白胨10-20g/L、硫酸镁O. 5-lg/L、磷酸一氢钾l_5g/L、氯化钠2_10g/L、谷氨酸O. 1-lg/L、pH6. 0-7. 0、32_37°C、0. I-Ivvm的好气条件下在75L发酵槽培养时，在4-6g/L范围内可维持透明质酸的生产性，并可生产平均分子量200万-400万Da的透明质酸。含有透明质酸的培养物用公知的方法即圆心分离或压滤机、厚度过滤器、薄膜过滤等除去菌体，并将其滤液用作本专利技术的高分子透明质酸。在本专利技术中，高分子透明质酸根据活性炭和其他低分子化反应条件被分解成具有、特定范围的平均分子量的低分子透明质酸。本专利技术提供包括将透明质酸与活性炭进行接触的步骤的低分子量的透明质酸的制造方法。本专利技术的方法，其特征在于，包括将透明质酸与活性炭进行接触的步骤。本专利技术的透明质酸(Hyaluronicacid (HA)、Hyaluronan、(C14H20NNaO11) η (η >1000))是存在于所有生物体的高分子,是指叫做葡萄糖胺聚糖(glycosaminoglycan)的多糖类。本专利技术的透明质酸具有如的结构。本专利技术的透明质酸可从鸡冠等 生物体组织分离精制而获取，并且可从通过遗传工程学方法而形质转换的微生物生产。使用于本专利技术方法的材料的透明质酸可通过上述方法制作或购买商业性销售物。在本专利技术的方法中使用的透明质酸的平均分子量没有特别的限制。例如在本专利技术的方法中使用的透明质酸的平均分子量可为10万Da至1300万Da、100万 Da 至 1300 万 Da、350 万 Da 至 1300 万 Da、350 万 Da 至 1000 万 Da、350 万 Da 至 800 万Da，优选地，可为350万Da至1300万Da，更加优选地，可为350万Da至800万Da。本专利技术的一实施例中，将具有生产透明质酸能力的链球菌内ID9102(KCTC11395BP)作为透明质酸生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜大中，任种赫，康在勋，
申请(专利权)人：一栋制药株式会社，
类型：发明
国别省市：